一、金雀异黄素对低密度脂蛋白诱导的内皮细胞c-myc mRNA表达的影响(英文)（论文文献综述）
刘素娟[1]（2020）在《金雀异黄素调控TIPE2/Akt对LPS活化的巨噬细胞凋亡的影响》文中进行了进一步梳理目的:探究金雀异黄素（genistein,GEN）对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）活化的巨噬细胞凋亡的影响及是否与调节TIPE2/Akt通路有关。方法:1.将1 000 ng·mL-1LPS作用于RAW264.7细胞24 h,采用RT-qPCR检测IL-6和TNF-αmRNA表达水平,Western Blot检测iNOS和COX-2蛋白表达情况,构建LPS活化巨噬细胞模型。使用GEN（10μM）分别预孵育RAW264.7细胞1h、2 h、4 h、8 h,再和LPS(1 000 ng·mL-1)共处理24 h,CCK8检测细胞活力,RT-qPCR和Western Blot分别检测凋亡蛋白Cleaved caspase-3、CHOP、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-8 mRNA与蛋白表达,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率,TUNEL染色检测细胞凋亡指数,研究GEN对LPS活化巨噬细胞凋亡的影响。TIPE2是一种免疫负性调控因子,为明确TIPE2在GEN调控巨噬细胞凋亡中所起的调控作用,使用GEN孵育RAW264.7细胞2 h,再用LPS处理24 h,RT-qPCR检测TIPE2基因表达,Western Blot检测TIPE2、Akt、p-Akt蛋白表达,Immunofluorescence检测TIPE2表达,观察GEN对活化巨噬细胞TIPE2表达及Akt磷酸化的影响。2.分别使用TIPE2过表达或敲降慢病毒颗粒感染RAW264.7细胞,嘌呤霉素进行筛选,荧光显微镜下观察GFP蛋白表达情况,RT-qPCR、Western Blot检测TIPE2基因及蛋白表达,建立稳定细胞系。采用LPS孵育各细胞系24 h,CCK8试剂盒测定细胞活力,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率,TUNEL检测细胞凋亡指数,Western Blot检测Cleaved caspase-3、CHOP、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-8、Akt、p-Akt蛋白表达,研究TIPE2对活化巨噬细胞凋亡及Akt磷酸化的影响。IGF-1(100 ng·mL-1)预处理TIPE2过表达细胞2 h,再与LPS共处理24 h,CCK8试剂盒测定细胞活力,Western Blot检测Cleaved caspase-3、CHOP、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-8蛋白表达,验证TIPE2对活化巨噬细胞Akt磷酸化的影响。3.GEN孵育稳定敲降TIPE2细胞系2 h,再与LPS共处理24 h,CCK8试剂盒测定细胞活力,Western Blot检测Cleaved caspase-3、CHOP、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-8蛋白表达。IGF-1、GEN联合处理RAW264.7、稳定敲降TIPE2、稳定过表达TIPE2细胞系2 h,再与LPS共孵育24 h,CCK8试剂盒测定细胞活力,Western Blot检测Cleaved caspase-3、CHOP、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-8蛋白表达,研究GEN是否通过TIPE2/Akt通路影响LPS活化巨噬细胞凋亡。结果:1.LPS(1 000 ng·mL-1)处理RAW264.7细胞24 h,IL-6和TNF-αmRNA表达上调,iNOS和COX-2蛋白表达增加,说明LPS能有效活化RAW264.7细胞,可用于后续实验。与对照组比较,LPS显着增加巨噬细胞活力,降低细胞凋亡率和凋亡指数,减少凋亡蛋白Cleaved caspase-3、CHOP、Bax、Cleaved caspase-8表达,增加Bcl-2表达。GEN呈时间依赖性明显降低活化巨噬细胞活力,升高细胞凋亡率和凋亡指数,促进Cleaved caspase-3、CHOP、Bax、Cleaved caspase-8表达,抑制Bcl-2表达,且GEN作用2 h即能有效促进活化巨噬细胞凋亡（P<0.05）,因此我们选用2 h作为GEN的处理时间。与对照组比较,LPS明显下调TIPE2 mRNA及蛋白表达,上调p-Akt水平,Akt无明显变化;GEN对未活化细胞TIPE2、Akt、p-Akt表达均无明显影响,而GEN可显着增加活化巨噬细胞TIPE2基因及蛋白表达水平,减少p-Akt表达,不影响Akt表达变化。2.与TIPE2空载体组比较,TIPE2过表达组细胞TIPE2表达上调约2倍,TIPE2敲降组细胞TIPE2表达下调约70%。TIPE2过表达显着抑制活化巨噬细胞活力,提高凋亡率和凋亡指数,减少p-Akt、Bcl-2表达,增加Cleaved caspase-3、CHOP、Bax、Cleaved caspase-8表达;IGF-1可有效逆转TIPE2过表达对活化巨噬细胞活力及凋亡蛋白的作用。TIPE2敲降能明显促进活化巨噬细胞活力,降低凋亡率和凋亡指数,增加p-Akt、Bcl-2表达,减少Cleaved caspase-3、CHOP、Bax、Cleaved caspase-8表达。3.与TIPE2空载体+GEN+LPS组比较,TIPE2敲降+GEN+LPS组细胞活力增加,Bcl-2表达增多,Cleaved caspase-3、CHOP、Bax、Cleaved caspase-8表达减少。与LPS组相比,LPS+IGF-1组细胞活力及Bcl-2表达显着增加,Cleaved caspase-3、CHOP、Bax、Cleaved caspase-8表达减少;与LPS+GEN组比较,LPS+GEN+IGF-1组细胞活力、Bcl-2表达均明显增加,Cleaved caspase-3、CHOP、Bax、Cleaved caspase-8表达减少。与RAW264.7+GEN+LPS组比较,TIPE2过表达+GEN+LPS组细胞活力减弱,Bcl-2表达减少,Cleaved caspase-3、CHOP、Bax、Cleaved caspase-8表达增多,而TIPE2过表达+GEN+LPS+IGF-1组与TIPE2过表达+GEN+LPS组结果相反;与RAW264.7+GEN+LPS组比较,TIPE2敲降+GEN+LPS组细胞活力增强,Bcl-2表达增加,Cleaved caspase-3、CHOP、Bax、Cleaved caspase-8表达减少,而TIPE2敲降+GEN+LPS+IGF-1组比TIPE2敲降+GEN+LPS组结果更为明显。结论:GEN可能通过上调TIPE2表达,抑制Akt磷酸化,促进LPS活化的巨噬细胞凋亡。
丛丽[2]（2020）在《金雀异黄素调控NF-κB/miR-21抑制LPS诱导炎症细胞反应的机制研究》文中研究指明动脉粥样硬化是一个慢性炎症过程,炎症反应参与其发生发展。金雀异黄素（GEN）具有抗炎活性,但作用机制尚未完全阐释。课题组前期研究显示GEN抑制活化炎症细胞的转录因子NF-κB,下调miR-21和TLR4表达,生物信息学分析发现miR-21与TIPE2 CDS区存在特异性结合位点。据此我们推测:NF-κB/miR-21/TIPE2信号轴在炎症细胞反应中扮演重要角色,GEN通过抑制NF-κB,下调miR-21表达,进而活化TIPE2,阻断TLR4信号转导,最终发挥抗炎作用。为验证上述科学假说,本研究用脂多糖（LPS）刺激RAW264.7细胞和THP-1细胞构建炎症细胞反应模型,LPS诱导C57小鼠血管慢性炎症反应构建动物模型。RT-qPCR检测LPS对炎症细胞miR-21、miR-155、miR-125a表达的影响。利用慢病毒构建稳定过表达和敲降miR-21细胞系,NF-κB抑制剂PDTC和GEN单独或联合处理细胞后再用LPS刺激,RT-qPCR、Western Blot、IF分别检测TNF-α、IL-6、MCP-1、i NOS、COX-2、NF-κB p65、miR-21表达,分析miR-21、PDTC对GEN抗炎作用的影响。不同浓度GEN处理巨噬细胞,CCK8和乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒分别检测细胞活力及细胞外LDH含量,评价GEN对细胞活力的影响。RT-qPCR检测不同浓度或不同孵育时间的GEN对活化巨噬细胞miR-21表达的影响。构建miR-21宿主基因Vmp1启动子报告基因载体、NF-κB p65过表达载体并转染至巨噬细胞,双荧光素酶启动子活性报告基因实验分析NF-κB和GEN对Vmp1启动子活性的影响。利用慢病毒构建TIPE2稳定过表达和敲降细胞系,miR-21 mimic转染至细胞后再用GEN、LPS处理,RT-qPCR、Western Blot检测GEN对TIPE2、TLR4、MyD88、TRIF表达的影响及TIPE2对GEN生物学效应的影响,并分析miR-21对GEN调控TIPE2/TLR4的影响。双荧光素酶报告基因实验研究miR-21与TIPE2的靶向关系,并通过RT-qPCR和Western Blot进行验证。采用腹腔注射LPS联合胃灌注GEN、尾静脉注射miR-21拮抗剂,或腹腔注射LPS联合胃灌注GEN、皮下注射PDTC处理高脂饮食喂养的C57小鼠。分别通过RT-qPCR检测主动脉、外周血单个核细胞（PBMC）、腹腔巨噬细胞（PMΦ）的miR-21、iNOS、COX-2、NF-κB p65、TIPE2、TLR4、MyD88、TRIF表达,Western Blot、IHC、IF分析主动脉、脾脏、PMΦ炎症相关蛋白表达,HE染色观察脾脏形态学改变,生化分析仪检测血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇的含量并计算动脉硬化指数,探索GEN、miR-21和PDTC对小鼠血管慢性炎症反应的影响。结果显示,LPS能促进炎症相关因子表达,可用于构建炎症细胞反应模型,并上调炎症细胞miR-21表达。敲降miR-21后,活化炎症细胞的炎症相关因子表达水平明显降低,而过表达miR-21可恢复其表达。同时,过表达NF-κB p65能增强miR-21宿主基因Vmp1的启动子活性,而PDTC作用与之相反,且PDTC能显着下调活化炎症细胞miR-21及炎症相关因子表达,然而过表达miR-21处理又可有效减弱PDTC对miR-21和炎症细胞反应的抑制作用。此外,实验浓度范围内的GEN不影响巨噬细胞活力,并以剂量、时间依赖的方式下调miR-21,过表达miR-21可明显抵消GEN对炎症细胞反应的抑制作用。高脂饮食喂养联合腹腔注射LPS能诱导小鼠血管慢性炎症反应,miR-21拮抗剂可有效减缓血管慢性炎症反应,并与GEN协同抑制炎症相关因子表达,降低血脂水平。此外,PDTC可增强GEN对活化巨噬细胞及血管慢性炎症小鼠miR-21、炎症相关因子表达的抑制作用。GEN虽能有效降低miR-21宿主基因的启动子活性,但过表达NF-κB p65又可显着减弱这一效应。GEN可上调血管慢性炎症小鼠TIPE2表达,并抑制TLR4、MyD88和TRIF表达,这一结果在活化巨噬细胞中得到证实。此外,敲降TIPE2能逆转GEN对炎症细胞反应的抑制作用以及对TLR4信号通路的阻断功能,而过表达TIPE2作用与之相反。虽然miR-21mimic可拮抗GEN恢复TLR4信号转导,但过表达TIPE2处理后又能明显减弱miR-21 mimic的作用。miR-21 inhibitor可促进TIPE2表达,miR-21 mimic作用与之相反,并能显着降低野生组荧光素酶活性。综合上述研究结果,可得出以下结论;（1）LPS通过NF-κB增强mi R-21宿主基因启动子活性,促进miR-21转录表达,激活炎症细胞反应。（2）GEN下调NF-κB减少miR-21表达,进而活化TIPE2,通过My D88依赖型和TRIF依赖型途径抑制TLR4炎症信号转导,发挥抗炎活性。
王智谦[3]（2018）在《头花蓼中黄酮类化合物对大鼠血脂紊乱、肝损伤和动脉粥样硬化的保护》文中指出研究背景:头花蓼（polygomuncapitutam,PC）是苗族传统的药用植物,对多种疾病具有预防保护作用和生物学调节作用。黄酮类化合物是头花蓼中主要的植物活性成分。黄酮类化合物在化学结构上具有多酚结构,该结构赋予它抗氧化活性、抑制炎症反应和调节血脂水平的功能。多种植物中的黄酮类化合物可以对癌症、心血管疾病、胃肠道疾病、神经系统相关综合征如抑郁症、癫痫、阿尔茨海默病和神经退行性疾病等起到保护作用。此外,植物中的黄酮成分也能显着调节人和动物的血脂水平。高血脂是肝脏疾病和动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的危险因素,我们通过大鼠高脂模型和AS模型,研究头花蓼中黄酮类化合物对大鼠血脂紊乱、肝损伤和动脉粥样硬化的保护作用。第一部分头花蓼中黄酮类化合物对高脂模型大鼠血脂紊乱和肝损伤的保护目的:通过构造大鼠高脂模型,研究头花蓼中黄酮类化合物对高脂模型大鼠血脂紊乱和肝损伤的保护作用。方法:采取超声法提取头花蓼中的黄酮类化合物。实验动物为7月龄SPF级雄性Wistar大鼠60只,分为空白对照组、模型组、头花蓼低剂量组、头花蓼中剂量组、头花蓼高剂量组和阳性对照组,每组10只。除对空白对照组大鼠喂养普通饲料外,其余各组喂养高脂饲料干预30天。高脂模型构造后,头花蓼低剂量组、头花蓼中剂量组和头花蓼高剂量组分别灌胃的头花蓼提取物1.4mg/kg-bw、2.8mg/kg-bw 和 5.6mg/kg-bw,阳性对照组给予 125mg/kg.d 的阿托伐他汀,对照组和模型组每天灌胃40ml/kg的生理盐水。干预28天后,禁食禁水12h后处死大鼠。采用ELISA试剂盒检测各组大鼠血浆中丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）的活性。在全自动生化仪上检测血清中总胆固醇（total cholesterol,TC）、总甘油三脂（triglyceride,TG）、高密度脂蛋白（high-density lipoprotein,HDL）、低密度脂蛋（low density lipoprotein,LDL）的含量。分别采用羟胺法、比色法、TBA法和可见光法检测肝匀浆中的超氧化物歧化酶（superoxidedismutase,SOD）活力、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量和过氧化氢酶（catalase,CAT）含量。采用ELISA试剂盒检测各组大鼠肝匀浆中白介素-1β（interleukin lβ,IL-1β）、白介素-18（interleukin 6,IL-18）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）和白介素-6（interleukin 6,IL-6）的含量。HE 染色制作肝脏病理切片,光学显微镜观察肝损伤。取出完整的肝脏后,肝脏重量（g）/体重（100g）计算肝脏指数。结果:1.血脂水平:模型组的TC、TG和LDL水平显着高于正常对照组,HDL显着低于正常对照组。头花蓼中、高剂量组和阳性对照组的TC和LDL水平显着低于模型组,头花蓼低、中、高剂量组和阳性对照组的TG水平显着低于模型组,头花蓼高剂量组和阳性对照组的HDL水平显着高于模型组。2.肝功能酶:模型组的ALT和AST水平显着高于正常对照组,头花蓼低、中、高剂量组的血清ALT和AST水平显着低于模型组。3.肝组织切片:模型组的肝组织切片中看到脂肪空泡和轻微肝损伤,头花蓼高剂量组和阳性对照组无脂肪空泡、肝损伤和肝纤维化。4.肝脏指数:模型组的肝脏指数显着高于正常对照组,头花蓼低、中、高剂量组和阳性对照组的肝脏指数显着低于模型组。5.氧化应激指标:模型组的SOD、CAT和GSH-Px活性显着低于正常对照组,MDA活性显着高于正常对照组。头花蓼中、高剂量组和阳性对照组的SOD活性显着高于模型组,头花蓼高剂量组和阳性对照组的CAT和GSH-Px活性显着高于模型组,MDA活性低于模型组。6.炎性指标:模型组的IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α水平显着高于正常对照组,头花蓼低、中、高剂量组和阳性对照组的IL-1β水平显着低于模型组,头花蓼高剂量组和阳性对照组的IL-6和TNF-α水平显着低于模型组,头花蓼中、高剂量组和阳性对照组的IL-18水平显着低于模型组。结论:高脂模型干预后,大鼠的血脂水平升高、肝功能酶升高、肝脏病理出现损伤、肝脏中炎症因子和氧化应激水平升高,提示高血脂可以导致肝脏损伤以及肝脏炎症和氧化应激。头花蓼中黄酮类化合物提取物可以改善大鼠的血脂水平、炎症因子和氧化应激,并对大鼠的肝脏有保护作用。第二部分头花蓼中黄酮类化合物对大鼠动脉粥样硬化的作用及其机制研究目的:动脉粥样硬化模型大鼠中研究头花蓼中黄酮类化合物对动脉粥样硬化的保护作用,以及头花蓼中黄酮类化合物与NF-κB/PI3K/AKT信号通路的关系,探究其可能的调节机制。方法:实验动物分为正常对照组、AS模型组、头花蓼低剂量组、头花蓼中剂量组、头花蓼高剂量组和阳性对照组6组,每组10只雄性大鼠。正常组喂养正常饲料,对其余5组造模。喂养开始前一次性腹腔注射维生素D 360万IU/kg,然后喂养高脂饲料8周。采用ELISA试剂盒检测各组大鼠血浆中前列环素（Prostacyclin2,PGI2）、血栓素 A2（Thromboxane2,TXA2）及内皮素-1（Endothelinl,ET-1）的含量。血液流变分析仪检测血黏度（高、中、低切变率）、血浆黏度和红细胞压积（hematocrit,HCT）。Medlab生物信息放大采集系统检测胸主动脉舒张功能。大鼠胸主动脉HE染色,400倍光学显微镜下观察,拍片。采用Image-Pro Plus 6.0软件对HE染色结果分析,检测主动脉内中膜厚度。Westem blot方法检测PI3K/Akt/NF-κB信号通路中PI3K蛋白（p85和p110）、AKT蛋白、NF-KB（p65）蛋白在大鼠胸主动脉中的表达水平。RT-PCR检测p85、AKT和p65 mRNA的相对表达水平。结果:1.血脂水平:模型组的TC、TG和LDL水平显着高于正常对照组。头花蓼低、中、高剂量组和阳性对照组的TC和TG水平显着低于AS模型组,头花蓼中、高剂量组和阳性对照组的LDL水平显着低于模型组。2.血液炎性指标:AS模型组的IL-6和TNF-α水平显着高于正常对照组,头花蓼中、高剂量组和阳性对照组的IL-6和TNF-α水平显着低于AS模型组。3.血液流变学指标比较:AS模型组的全血黏度、血浆黏度和HCT均显着高于正常对照组。头花蓼中剂量组中,低切边率的全血黏度和HCT显着低于AS模型组。头花蓼高剂量组和阳性对照组的全血黏度、血浆黏度和HCT显着低于AS模型组。4.血管内皮活性因子:AS模型组的TXA2和ET-1水平显着高于正常对照组,头花蓼高剂量组和阳性对照组的TXA2和ET-1水平显着低于AS模型组。5.胸主动脉舒张功能:随着Ach浓度的增加,各组的血管内皮舒张度差异逐渐增大。Ach浓度为10-5mol/L和10-4mol/L时,各组差异有统计学意义。AS模型组的血管内皮舒张度显着低于正常对照组,头花蓼中、高剂量组和阳性对照组的血管内皮舒张度显着高于AS模型组。6.主动脉HE染色结果:AS模型组主动脉管腔狭窄,内膜增厚,出现显着动脉粥样硬化病变。头花蓼低和中剂量组的主动脉粥样硬化程度减轻。头花蓼高剂量组和阳性对照组主动脉无显着损伤,动脉粥样硬化病变不明显。7.主动脉内中膜厚度:AS模型组的内中膜厚度水平显着高于正常对照组,头花蓼高剂量组和阳性对照组的内中膜厚度水平显着低于模型组。8.信号通路相关蛋白:AS模型组的p110蛋白、p65蛋白和Akt蛋白相对表达水平显着高于正常对照组,头花蓼高剂量组的p110蛋白相对表达水平显着低于AS模型组,头花蓼高剂量组和阳性对照组的p65蛋白相对表达水平显着低于AS模型组,头花蓼中、高剂量组和阳性对照组的Akt蛋白相对表达水平显着低于AS模型组。9.信号通路相关mRNA:AS模型组的p85 mRNA、p65 mRNA和Akt mRNA相对表达水平显着高于正常对照组,头花蓼高剂量组和阳性对照组的p85 mRNA相对表达水平显着低于AS模型组,头花蓼中、高剂量组和阳性对照组的p65 mRNA和Akt mRNA相对表达水平显着低于AS模型组。结论:头花蓼中黄酮类化合物能降低动脉粥样硬化大鼠的血脂水平,炎性因子水平,血液粘度和红细胞压积;能降低血管活性因子水平,改善大鼠主动脉的舒张功能;能降低主动脉内中膜厚度,改善大鼠动脉粥样硬化病变程度;能降低主动脉中 PI3K-p110、PI3K-p85、Akt 和 NF-κB-p65 水平,提示对 PI3K/Akt/NF-κB信号通路有调节作用。
李晓玲[4]（2016）在《大豆异黄酮对蛋鸡生产性能和脂类代谢的影响》文中认为大豆异黄酮是天然植物雌激素的一种,根据动物的种类和生理阶段不同,其可发挥不同的生理作用；目前大豆异黄酮的研究多集中在抗肿瘤、抗氧化及预防心血管疾病方面,对蛋鸡脂类代谢及蛋黄品质等方面研究较少。本试验采取超声辅助提取豆粕中总异黄酮,并进行蛋鸡饲养试验,探索大豆异黄酮对蛋鸡生产性能和脂类代谢的影响,为将来超声波萃取法的工业化生产及大豆异黄酮的实际应用提供理论依据。试验一、大豆异黄酮的提取：本试验采取超声辅助提取豆粕中总异黄酮,并结合单因素试验结果用响应面法对提取条件进行了优化,最终确定最佳工艺条件为：乙醇浓度为55%、提取温度40℃、液料比24：1g/ml,在此条件下大豆异黄酮的提取量可达0.45mg/g。试验二、大豆异黄酮对蛋鸡生产性能和脂类代谢的影响：本试验选取海兰褐蛋鸡192只,随机分为4组,试验1、2、3组日粮在基础饲粮中分别添加400g/t、800g/t、1200g/t大豆异黄酮,第4组为对照组饲喂基础饲粮,试验期为5周,试验结果如下；1.在生产性能方面：试验组蛋鸡的产蛋率与对照组相比,只有在试验期的前3周有显着的变化。试验期的第1周和第2周,试验2、3组的产蛋率显着高于对照组（P<0.05）,而在第3周,只有试验3组的产蛋率显着高于对照组（P<0.05）；试验组蛋鸡的平均蛋重与对照组相比也有不同程度的提高,从试验期的第2周开始,与对照组相比,3个试验组的平均蛋重均显着提高（P<0.05）；试验组蛋鸡的料蛋比与对照组相比也有不同程度的降低,在试验期的第1周,与对照组相比,试验1组料蛋比显着降低（P<0.05）,在试验期的第2周,3个试验组料蛋比均显着低于对照组（P<0.05）,在试验期的第3周和第5周,只有试验3组料蛋比显着降低（P<0.05）；与对照组相比,3个试验组的蛋壳强度和蛋壳厚度都有显着的提高（P<0.05）,但对蛋黄颜色无影响（P>0.05）,另外试验2组的蛋白高度和哈夫单位显着降低（P<0.05）,且各组之间差异不显着（P>0.05）。2.在脂类代谢方面：大豆异黄酮各剂量组均能显着降低蛋鸡血清和蛋黄总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、丙二醛（MDA）及血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和极低密度脂蛋白胆固醇（VLDL-C）的含量（P<0.05）,提高高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量（P<0.05）,添加量为800g/t的大豆异黄酮能显着提高蛋鸡血清脂蛋白酯酶（LPL）活性（P<0.05）。
任娇,孙惜时,田憬若,谈甜甜,崔桂友[5]（2014）在《大豆异黄酮对内皮细胞损伤保护作用的研究进展》文中研究指明血管内皮细胞的损伤,会影响血管正常的功能运转,引发高血压、血栓等心血管疾病。大豆异黄酮（soy isoflavones）是一种植物雌性激素,主要存在于豆类植物中,其抗氧化作用可以修复内皮细胞的损伤,对心血管有显着的保护作用。大豆异黄酮对损伤内皮细胞的保护体现在清除自由基、干扰信号通路和影响基因的表达等多个方面。现对大豆异黄酮对损伤血管的保护作用及途径进行了综述,为开发新型内皮细胞保护药物及其临床研究提供理论依据。
翟晓涵[6]（2013）在《金雀异黄素调控Nrf2及二相解毒酶的表达对Caco-2细胞氧化损伤保护机制的研究》文中指出目的:本研究建立Caco-2细胞系的H202损伤模型,探索金雀异黄素（genistein,GEN）对Caco-2细胞的保护作用与Nrf2通路的关系,并深入探讨其与Nrf2上游信号通路MAPKs、PI3K/AKT、PKC及下游二相解毒酶HO-1和GCLC之间的关系,进而阐明金雀异黄素抗氧化损伤的分子机制。方法:1.金雀异黄素对Caco-2细胞二相解毒酶的诱导作用（1）培养状态良好的Caco-2细胞,随机分为四组:空白对照组;低、中、高剂量金雀异黄素正常给药组（2.5 μM、5 μM、10 μM）。药物与细胞共同孵育6小时后测定以下指标:采用免疫印迹法（Western blotting）检测细胞内血红素氧合酶1（Heme Oxygenase-1,HO-1）及谷氨酸半胱氨酸连接酶（glutamate-L-cysteine ligase catalyticsubunit,GCLC）的蛋白表达水平;采用 RT-PCR（Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction）法测定 HO-1、GCLC 的 mRNA 表达水平。（2）培养状态良好的Caco-2细胞,随机分为六组:空白对照组;金雀异黄素高剂量（10 μM）不同时间点正常给药组（2、4、6、8、24小时）。作用结束后,测定HO-1及GCLC的蛋白及mRNA表达水平。2.金雀异黄素对Caco-2细胞Nrf2通路的激活作用（1）Caco-2细胞随机分为四组:空白对照组;低、中、高剂量金雀异黄素正常给药组（2.5 μM、5 μM、10 μM）。药物与细胞共同作用6小时后测定转录因子Nrf2（NF-E2-related factor 2）蛋白及 mRNA 的表达水平。（2）Caco-2细胞随机分为六组:空白对照组;金雀异黄素高剂量（10 μM）不同时间点正常给药组（2、4、6、8、24小时）。作用结束后,测定Nrf2的蛋白及mRNA表达水平。（3）Caco-2细胞随机分为四组:阴性对照组（NC）;转染Nrf2si-RNA组;阴性对照+金雀异黄素（lO^M）组;转染Nrf2si-RNA+金雀异黄素（10μM）组。转染42小时后,药物与细胞作用6小时后提取蛋白,免疫印迹法检测Nrf2及HO-1、GCLC蛋白表达水平。3.金雀异黄素对H202损伤的Caco-2细胞的保护作用（1）Caco-2细胞随机分为五组:空白对照组;H202损伤组（10 mM）;低、中、高浓度金雀异黄素预处理组（2.5 μM、5 μM、10 μM）。给予金雀异黄素3小时后,损伤组和药物预处理组加H202,继续培养3小时后,采用MTT法检测细胞存活率。（2）Caco-2细胞随机分为五组:空白对照组;H202损伤组（10 mM）;高剂量金雀异黄素预处理组（10μM）;锌原卟啉（HO-1特异性抑制剂）（20μM）+高剂量金雀异黄素预处理组;丁硫氨酸-亚砜亚胺（GCLC特异性抑制剂）（200 μM）+高剂量金雀异黄素预处理组。MTT法检测细胞存活率。（3）Caco-2细胞随机分为四组:空白对照组;金雀异黄素正常给药组（10μM）;H202损伤组（10mM）;高剂量金雀异黄素预处理组（10μM）。药物与细胞作用6小时后,采用DCFH-DA探针法测定细胞中ROS表达情况;采用免疫印迹法及RT-PCR法分别检测细胞内HO-1、GCLC及Nrf2的蛋白和mRNA表达水平。4.金雀异黄素对Caco-2细胞ERK1/2和PKC通路的激活作用（1）Caco-2细胞随机分为四组:空白对照组;低、中、高剂量金雀异黄素正常给药组（2.5 μM、5 μM、10l M）。药物与细胞共同孵育6小时后测定以下指标:采用免疫印迹法检测细胞内 ERK1/2、p-ERKl/2、PKC、p-PKC、P38、p-P38、JNK、p-JNK、PI3K、p-PI3K蛋白表达水平。（2）Caco-2细胞随机分为六组:空白对照组;金雀异黄素（10 μM）组;ERK1/2抑制剂（PD98059）（20 μM）组;ERK1/2 抑制剂（PD98059）（20^M）+ 金雀异黄素（10 μM）组;PKC 抑制剂（GF109203X）（20μ）组;PKC 抑制剂（GF109203X）（20μM）+金雀异黄素（10μM）组。免疫印迹法检测HO-1、GCLC及Nrf2蛋白的表达水平。（3）Caco-2细胞随机分为八组:空白对照组;H202损伤组;高剂量药物预处理（10 μM）组;高剂量药物预处理（10 μM）+ ERK1/2抑制剂（PD98059）（20 μM）组;高剂量药物预处理（10μM）+PKC抑制剂（GF109203X）（20μM）组;高剂量药物预处理（10μM）+P38抑制剂（SB203580）（20μM）组;高剂量药物预处理（10μM）+JNK抑制剂（SP600125）（20μM）组;高剂量药物预处理（10μM）+P13K抑制剂（LY294002）（20μM）组。采用MTT法检测细胞存活率。结果:1.金雀异黄素与Caco-2细胞共同孵育6小时后,与空白对照组相比,中、高浓度金雀异黄素正常给药组二相解毒酶HO-1、GCLC蛋白及mRNA表达显着升高（p<0.01）,并呈剂量依赖性。提示金雀异黄素可诱导HO-1和GCLC的表达;金雀异黄素与细胞不同时间点作用结束后,与对照组（0小时）相比,金雀异黄素作用4小时对HO-1、GCLC的mRNA诱导作用最强（p<0.01）,6小时对HO-1、GCLC蛋白的诱导作用最强（p<0.01）。2.金雀异黄素与Caco-2细胞共同孵育6小时后,与空白对照组相比,中、高浓度药物组转录因子Nrf2蛋白及mRNA表达显着升高（p<0.01）;金雀异黄素与细胞不同时间点作用结束后,在4小时即可明显上调Nrf2蛋白的表达（p<0.01）,6小时时蛋白表达达峰值（p<0.01）,随后表达减少;在2小时可明显上调Nrf2mRNA的表达（p<0.01）,4小时表达达峰值（p<0.01）;Nrf2干扰序列转染Caco-2细胞后,与空白对照组相比,明显抑制Nrf2的蛋白表达;给予金雀异黄素后,对照组Nrf2、HO-1、GCLC蛋白表达水平上调,而Nrf2si-RNA转染组均无明显变化,表明在正常细胞内Nrf2是金雀异黄素的作用靶点之一;金雀异黄素可通过诱导转录因子Nrf2进而激活HO-1和GCLC的表达。3.采用H202刺激Caco-2细胞后,与空白对照组相比,损伤组细胞存活率显着下降（p<0.01）,ROS含量明显增高;中、高浓度金雀异黄素预处理组细胞存活率明显上升（p<0.01）,并具浓度依赖性。药物预处理组ROS含量显着降低。表明金雀异黄素对H202损伤的Caco-2细胞具有保护作用。4.与空白对照组相比,H202刺激Caco-2细胞后,金雀异黄素正常给药组与损伤组HO-1、GCLC和Nrf2蛋白及mRNA表达均明显上升（p<0.01）,高剂量药物预处理组表达最高（p<0.01）,表明金雀异黄素可在细胞受损情况下进一步激活Nrf2和诱导二相解毒酶的表达。5.与空白对照组相比,低、中、高浓度药物组ERK1/2、PKC的磷酸化蛋白水平明显上调;使用ERK1/2和PKC特异性抑制剂后,金雀异黄素对细胞Nrf2、HO-1和GCLC的上调作用几乎被取消,且金雀异黄素对细胞的保护作用被抑制,说明金雀异黄素通过ERK1/2和PKC通路激活Nrf2并诱导下游二相解毒酶的表达,发挥细胞保护作用。结论:1.金雀异黄素可促进Caco-2细胞的转录因子Nrf2核转位,进而上调二相解毒酶HO-1、GCLC的mRNA和蛋白表达,并呈剂量依赖性和时间相关性。2.金雀异黄素对H202损伤的Caco-2细胞具有保护作用,其机制与金雀异黄素激活ERK1/2和PKC通路显着诱导细胞内Nrf2及下游二相解毒酶的表达有关。
柯晓安,张舜,王珊珊[7]（2009）在《大豆异黄酮预防心血管疾病的研究进展》文中研究指明大豆异黄酮是一类存在于豆类食物中的植物雌激素,由于其类雌激素样作用,富含大豆异黄酮豆类食品对心血管等疾病具有防治作用而备受研究者关注,本文就大豆异黄酮对心血管疾病在流行病学、动物实验和临床试验等近几年的研究进展情况作一概述。
侯海晶[8]（2009）在《益气活血中药复方三芪口服液对早期糖尿病肾病的影响》文中提出目的:探讨益气活血中药复方三芪口服液干预糖尿病肾病的起始点及肾保护作用机制研究。方法:临床部分:病例来源:广东省中医院大学城医院的住院及门诊病人共58例。诊断标准:（1）西医诊断标准:①糖尿病诊断标准:参照1999年WHO标准。②糖尿病肾病分期标准:参照Mogensen标准及王海燕《肾脏病学》。Ⅰ期:肾脏肥大和肾小球高滤过,此期肾脏结构正常。Ⅱ期:运动后出现微量白蛋白尿,肾脏病理示肾小球毛细血管基底膜（GBM）增厚。Ⅲ期:持续性微量白蛋白尿,尿白蛋白排泄率（UAER）在20～200μg/min或30～300mg/24h之间,肾脏病理示肾小球系膜基质增加及GBM明显增厚,又称早期糖尿病肾病或亚临床糖尿病肾病。Ⅳ期:UAER＞200ug/min或持续尿蛋白＞500mg/24h,病理示肾小球系膜基质明显增加及GBM明显增厚,部分小球荒废,又称临床期糖尿病肾病或中期糖尿病肾病。Ⅴ期:肾功能破坏,肾小球荒废,又称终末期糖尿病肾病。（2）中医证型诊断标准:参照2002年版《中药新药临床研究指导原则》中关于气虚证及血瘀证的辨证标准。（3）症状积分标准:症状按无、轻、中、重记0、1、2、3分,舌脉记“有”为1分,“无”为0分。纳入标准:（1）符合以上中西医诊断标准;（2）血糖:FPG≤7.0mmol/L 2HPG≤10.0mmol/L,病情稳定二周以上;（3）蛋白尿:24h尿蛋白定量≤0.3g,UAER＜200ug/min。同时具备以上三条方可纳入临床试验。排除标准:（1）排除其它原发及继发性原因所致蛋白尿;（2）无感染、酮症酸中毒、高渗性非酮症糖尿病昏迷、低血糖症等急性并发症;（3）合并原发性及其它继发性肾脏病者;（4）合并严重消化、循环、造血等系统原发性疾病者;（5）严重的精神疾病（经精神科医生会诊）或因其它原因不能配合调查者。监测项目:每二周监测症状、舌脉、血压、餐后2h毛细血管血糖,试验前后各监测尿24h微量白蛋白定量,血清肌酐（SCr）、低密度脂蛋白（LDL-C）、血胆固醇（TCH）、甘油三酯（TG）、血栓调节蛋白（TM）。疗程:12周。治疗方案:（1）基础治疗:①糖尿病健康教育、体育锻炼及低盐优质蛋白糖尿病饮食:每日食盐摄入量≤6克,精蛋白摄入量:0.8g/Kg·d;②控制血压:目标:＜130/80mmHg;可应用非ACEI及ARB外的所有降压药;③控制血糖:目标:FPG≤7.0mmol/L 2hPG≤10.0mmol/L全部应用糖适平和/或胰岛素治疗;④对症处理。（2）分组治疗:T组:三芪口服液:1支/次,3次/日,口服;L组:洛汀新片:10mg/次,1次/日,口服。调查方法:（1）药物洗脱:共2周,停用所有ACEI、ARB、益气活血类中药等制剂;给予受试者DM教育,低盐低脂优质低蛋白饮食;血压控制于＜130/80mmHg水平;血糖控制在FPG≤7.0mmol/L,2hPG≤10.0mmol/L水平;结束复查24h尿微量白蛋白定量及排泄率、血浆TM、低密度脂蛋白（LDL-C）、TCH、TG水平;（2）分组:将合格病例分为洛汀新组（L组）及三芪组（T组）;（3）试验过程依从性:采用药物记量的方法了解患者依从性。耐心向患者做好解释工作,使其充分理解,配合研究。（4）干扰和沾染的控制:所有病人受试期间不得接受试验措施以外的相关药物或治疗,尽量保证病人按照治疗方案规定用药,而不受其他药物等治疗措施的影响。结果:（1）治疗前两组患者一般情况、24h尿微量白蛋白定量、肾功能、血栓调节蛋白等,差异无统计学意义（P＞0.05）;治疗过程中,两组患者血糖差异无统计学意义（P＞0.05）;（2）治疗后T组DN患者24h尿微量白蛋白定量、血栓调节蛋白、低密度脂蛋白、症状积分较治疗前明显降低,差异有显着性统计学意义（P＜0.01）;（3）治疗后T组与L组比较:T组症状积分前后差值高于L组,差异有显着性统计学意义（P＜0.01）;T组LDL-C治疗前后与L组比较,明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。24h尿微量白蛋白定量、血栓调节蛋白等差异无统计学意义（P＞0.05）。二、实验部分:实验一:三芪口服液对实验性糖尿病肾病模型大鼠肾组织AGEs/RAGE、PAI-1、TGF-β1表达影响的研究。选鼠分组:选用SD雄性大鼠,设立正常对照组（C组）;余动物采用STZ单次腹腔注射方法制备糖尿病（DM）动物模型。DN模型制备及分组:DM大鼠模型成功后,给予隔日高脂饲料饲养4周,DN大鼠模型成功,随机分为M组、T组。干预起始点:DN模型成功,分组后即开始干预。干预方式:①饲料:T、M组给予隔日高脂饲料,C组给予普通饲料;实验期间均自由进食和饮水;②药物:T组给予三芪口服液灌胃,C及M组给予生理盐水灌胃。干预时限:6周。大鼠淘汰标准:①干预过程中,测定血糖值＜16.8mmol/L者,予以淘汰;②6周后处死大鼠,光镜示肾组织无明显病变者,予以淘汰。标本制备:选择DN模型制备及分组干预后C组、M组、T组大鼠肾组织,每组随机选择6例标本。实验方法:免疫组化法。观察项目:测定肾组织AGEs/RAGE、TGF-β1、PAI—1等的免疫组化染色面积、面密度及积分光密度。实验二:三芪口服液对糖尿病大鼠肾足细胞及其膜蛋白PCX、nephrin表达的影响。标本来源、实验方法同实验一。观察项目:测定肾组织足细胞计数、PCX荧光染色面积,Nephrin、PCX面密度及积分光密度。结果:实验一:三芪口服液对实验性糖尿病肾病模型大鼠肾组织AGEs/RAGE、PAI-1、TGF-β1表达影响的研究。24h蛋白尿定量及排泄率:（1）T、M组24h尿蛋白定量、排泄率较C组升高,差异有显着性统计学意义（P＜0.01）;（2）T组24h尿蛋白定量、排泄率较M组降低,差异有显着性统计学意义（P＜0.01）。血尿素氮、肌酐:C、T、M组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。总胆固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白:（1）T、M组TCh、TG较C组均升高,差异有显着性统计学意义（P＜0.01）;（2）T组TCh、TG较M组降低,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。AGEs:在肾小球、肾小管、毛细血管、系膜等肾组织均有AGEs阳性物质存在,胞浆和细胞外基质均有AGEs沉积。和C组比较,M组呈强阳性表达;T组染色面积及积分光密度均较M组降低,差异有显着性统计学意义（P＜0.01）。RAGE:主要表达定位在肾小球,和C组比较,在M组表达明显增加;T组染色面积及积分光密度均较M组明显减弱,差异有显着性统计学意义（P＜0.05）。TGF-β1:主要定位在肾小管及间质处,肾小球表达较弱;T组免疫组化染色面密度及积分光密度均较M组降低,差异有显着性,差异有显着性统计学意义（P＜0.01）。PAI-1:主要表达定位于肾小管、收集管,小球内无表达,和C组比较,M组呈强阳性表达;T组染色面积及积分光密度均较M组降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。实验二:三芪口服液对糖尿病肾病大鼠肾足细胞及其膜蛋白PCX、nephrin表达的影响。肾小球足细胞计数:与C组相比,M组肾小球足细胞数明显下降,（P＜0.05）,T组肾小球足细胞数亦有下降,但较M组足细胞数为多,结果分析统计有显着差异（P＜0.05）。肾小球足细胞标志性蛋白PCX平均荧光密度:C、M和T组三组肾脏肾小球足细胞PCX荧光密度比较NC组可见PCX阳性信号沿肾小球血管壁走行分布均匀、连续;M组PCX阳性信号分布不均匀,而且不连续;T组PCX阳性信号较M组分布均匀,较M组连续。定量分析结果显示,M组PCX平均荧光密度均低于C、T组（分别降低了48.5%、30.1%）（分别为P＜0.001,P＜0.05）。肾小球nephrin蛋白表达:M组大鼠肾小球nephrin蛋白表达显着低于C组（P＜0.05）;T组大鼠肾小球nephrin蛋白表达显着高于M组（P＜0.05）;T组与C组比较,肾小球nephrin蛋白表达无显着差异（P＞0.05）;C组大鼠肾脏nephrin蛋白在肾小球沿毛细血管袢呈线状分布;M组大鼠部分肾小球中nephrin蛋白呈颗粒状分布,三芪口服液治疗能显着抑制DN大鼠肾小球nephrin蛋白的重新分布。肾小球足细胞分析指标与24小时尿蛋白相关性:Pearson相关分析结果显示,24小时UMA与肾小球足细胞PCX平均荧光密度、nephrin蛋白表达呈负相关（P＜0.01）。结论:1.三芪口服液能改善早中期DN患者临床症状、蛋白尿、降低血浆TM水平,稳定肾功能,干预过程中未发现其它不良反应,结果提示可将血栓调节蛋白升高作为干预DN的起点。2.益气活血中药复方三芪口服液对DN肾脏保护作用的机制可能是:抑制AGEs/RAGE系统的表达,从而下调肾组织TGF-β1的表达、减少PAI-1生成,减轻ECM积聚,从而调节细胞、细胞外基质、细胞因子和生长因子间的网络调控,延缓DN肾间质纤维化及肾小球硬化的进展。3.益气活血中药复方三芪口服液能够上调肾足细胞裂孔隔膜nephrin、足细胞特异性标志蛋白PCX的蛋白表达,从而改善足细胞的损伤,改善肾脏足细胞的超微结构,减少尿蛋白,延缓DN进程。
李丽玮[9]（2009）在《木贼大孔树脂提取物对ECV304细胞炎症反应及凋亡的抑制作用》文中研究指明目的:前期动物实验研究证实木贼水煎剂和正丁醇提取物具有保护血管内皮,改善动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）早期病变的作用。为进一步确认木贼保护血管内皮、抗AS的有效部位及其机制,本实验以大孔树脂提取木贼（Equisetum）中总黄酮和酚酸,观察其对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的ECV304细胞炎症反应和细胞凋亡的影响。方法:第一部分1木贼大孔树脂提取物的制备称取适量木贼饮片加12倍量的70%乙醇,电热套加热回流提取3次,每次2h,过滤得提取液。分批将提取液减压浓缩,经101大孔树脂分别以蒸馏水、30%乙醇及70%乙醇洗脱。收集70%乙醇洗脱液,减压浓缩即为大孔树脂提取物,以下简称木贼提取物。2木贼总黄酮和酚酸含量的测定将槲皮素和阿魏酸标准品稀释成不同浓度,用紫外分光光度计测定其吸光度,绘制标准曲线并得回归方程。用同样方法检测70%乙醇洗脱液的吸光度,根据回归方程得出总黄酮和总酚酸含量。精量一定质量的70%乙醇洗脱液,将其烘干达恒重,用所测总黄酮和酚酸含量与之相比,计算所含总黄酮和总酚酸纯度。3含木贼提取物的细胞培养液制备用二甲基亚砜（DMSO）溶解木贼提取物,然后用不含血清的低糖DMEM将其分别稀释至1000μg/ml,500μg/ml,250μg/ml, DMSO终浓度为5%,紫外线照射灭菌,56℃,30min灭活,-20℃保存。第二部分1低密度脂蛋白的分离、氧化和鉴定采用化学沉淀法提取人低密度脂蛋白（LDL）。将LDL置于10μmol/L浓度CuSO4溶液中37℃氧化24h,经PH7.4 PBS透析24h,过滤除菌,得ox-LDL,4℃保存。琼脂糖凝胶电泳鉴定,并以紫外分光光度计进行LDL氧化产物共轭双烯检测,考马斯亮蓝法测定蛋白浓度。2 ECV304细胞的培养与分组ECV304细胞株复苏后于含15%新生小牛血清的DMEM中培养,胰酶法消化传代。分别设正常对照组、ox-LDL损伤组（ox-LDL终浓度为80μg/ml ）、木贼提取物高浓度（100μg/ml ）组、木贼提取物中浓度（50μg/ml ）组、木贼提取物低浓度（25μg/ml ）组。观察各组内皮细胞情况。3指标检测分别于倒置显微镜下观察各组细胞的形态学变化,硝酸还原酶法和放射免疫分析法分别检测培养液中NO活性和IL-8浓度,化学比色法检测细胞中NOS和iNOS活性。流式细胞仪检测细胞凋亡率、Caspase-3蛋白表达量,半定量RT-PCR检测细胞IL-8 mRNA、iNOS mRNA、Nox4mRNA、Lox-1mRNA、Caspase-3 mRNA、Bax mRNA和Bcl-2 mRNA。Western blotting检测iNOS蛋白表达量。结果:第一部分1木贼中总黄酮和总酚酸的含量:以槲皮素计单位质量木贼中总黄酮含量为1.69mg/g,以阿魏酸计单位质量木贼中总酚酸含量为1.23mg/g;单位质量木贼中总黄酮与总酚酸合计平均含量为2.92mg/g。2木贼提取物总黄酮和总酚酸的纯度:为63.28%。第二部分1 LDL的提取和氧化结果化学沉淀法所得LDL的琼脂糖凝胶电泳显示为单一条带,与正常血清中LDL条带处于同一水平。LDL氧化产物琼脂糖凝胶电泳显示为单一条带,泳动速率较LDL快近一倍,提示LDL的提取及氧化成功。氧化曲线显示LDL氧化程度于10h左右已达到完全。2细胞生长状况于倒置相差显微镜下观察正常对照组细胞生长良好,细胞饱满,无死亡细胞;ox-LDL损伤组细胞生长较差,细胞瘦小,萎缩,有部分细胞死亡;木贼提取物组细胞生长较好,细胞较饱满,少部分细胞变圆,一般情况好于ox-LDL损伤组,以中浓度组生长状态最好。3木贼提取物对ECV304细胞炎症反应的影响3.1培养液NO水平变化ox-LDL损伤组NO浓度较正常对照组明显降低（P<0.01）,木贼提取物高,中,低浓度组NO浓度较ox-LDL损伤组显着升高（P<0.01）。3.2细胞NOS、iNOS活性、iNOS mRNA、iNOS蛋白表达的变化ox-LDL损伤组NOS活性较正常对照组明显降低（P<0.01）,iNOS活性则明显升高（P<0.01）,木贼提取物高,中,低浓度组NOS活性较ox-LDL损伤组显着升高（P<0.01）,iNOS活性明显低于ox-LDL损伤组（P<0.01）,用药组间无明显量效关系。ox-LDL损伤组iNOS mRNA及蛋白表达较正常对照组明显升高（P<0.01）,木贼提取物中浓度组则明显下降（P<0.01）。3.3培养液IL-8浓度和细胞IL-8 mRNA的变化ox-LDL损伤组IL-8较正常对照组明显升高（P<0.01）,木贼提取物高,中,低浓度组IL-8较ox-LDL损伤组明显降低（P<0.01）,以中浓度组最为明显。木贼提取物中浓度组IL-8 mRNA的水平显着降低（P<0.01）。3.4细胞Lox-1mRNA的变化木贼提取物中浓度组对损伤的ECV304细胞Lox-1mRNA的水平有明显抑制作用（P<0.01）。3.5细胞Nox4mRNA的变化木贼提取物中浓度组对损伤的ECV304细胞Nox4mRNA的水平有明显抑制作用（P<0.01）。4木贼提取物对ECV304细胞凋亡的影响4.1流式细胞仪检测细胞凋亡率的改变ox-LDL损伤组细胞调亡率与正常对照组相比明显升高（P<0.01）,而木贼提取物中浓度组调亡率则比损伤组明显降低（P<0.01）。4.2木贼提取物对细胞Bax mRNA和Bcl-2 mRNA的影响ox-LDL损伤组细胞Bax mRNA的水平明显高于正常对照组（P<0.01）;与损伤组相比,木贼提取物中浓度组Bax mRNA的水平明显降低（P<0.01）。Bcl-2 mRNA的水平与上述趋势相反。Bax/Bcl-2比值各组间差异更为明显,损伤组远高于对照组（P<0.01）,木贼提取物中浓度组则显着降低（P<0.01）。4.3木贼提取物对细胞Caspase-3蛋白及Caspase-3 mRNA的影响Caspase-3蛋白及Caspase-3mRNA在ox-LDL损伤组的表达均明显高于正常对照组（P<0.01）;而两者在木贼提取物中浓度组则比损伤组明显降低（P<0.01）。结论:通过70%乙醇回流和101大孔树脂层析,得到总黄酮和总酚酸纯度达到63.28%的木贼提取物,符合作为有效部位的标准。用木贼提取物干预培养的细胞,证实其具有抑制ox-LDL诱导的ECV304细胞炎症反应和细胞凋亡的作用,其机制可能在于下调多种相关基因的表达。
沈丽霞[10]（2008）在《槲皮素和补骨脂素对人乳腺癌细胞株雌激素样作用的实验研究》文中研究说明一研究背景雌激素是正常乳腺发育以及乳腺癌形成过程中发挥重要角色的类固醇激素,在体内通过与不同基因编码的雌激素受体亚型（ERα和ERβ）结合而表现广泛的生物学活性。女性进入绝经期后,体内雌激素水平显着下降,出现绝经期综合症,长期以来临床采用人工合成的雌激素替代治疗（hormone replacement treatment,HRT）缓解妇女绝经期综合征症状。然而HRT所带来的如生殖系统肿瘤及乳腺癌的发生、子宫内膜增生、高血凝状态等不良反应影响其推广应用,1999年美国国立卫生研究院已宣布将人工合雌激素列入致癌“黑名单”。因此,人们致力于寻求雌激素的替代物,期望这种替代物能保留雌激素对心血管系统等保护作用,同时避免上述的不良影响,这类物质被称为选择性雌激素受体调节剂（selective estrogen receptor modulators,SERMs）,这些化合物具有双向调节作用:在体内雌激素水平较低时有拟雌激素作用;当体内雌激素水平较高时可发挥抗雌激素活性。来源于植物而且结构类似雌激素的植物雌激素（phytoestrogen,PE）正是其中的重要一类。长期以来,许多中草药植物被广泛应用于妇女保健和妇科病症的治疗,这些中药所含的植物雌激素在其中发挥的药效作用不容忽视。本课题是在课题组通过报告基因技术筛选中药植物雌激素受体调节剂的研究基础上展开的,课题组以往的实验结果表明补骨脂、菟丝子是具有雌激素活性的中药。本实验以二者主要有效成分补骨脂素（Psoralen）和槲皮素（Quercetin）为研究对象,深入研究补骨脂素和槲皮素植物雌激素作用及分子生物学机制。希望从筛选出的具有雌激素样作用的中药中,最终找出具有雌激素样作用的单体化合物,作为人工合成雌激素的代用品。二研究方法本实验以两种人类乳腺癌细胞系（ER阳性细胞株MCF-7、T47D和ER阴性细胞株MDA-MB-231）为模型,以17β-雌二醇（E2）和代表性的植物雌激素金雀异黄素（Genistein）为参照,运用流式细胞术、RT-PCR、蛋白质免疫印记技术、基因芯片技术等方法,从蛋白表达和基因水平系统研究槲皮素、补骨脂素雌激素样作用及其作用机理。三研究结果1槲皮素、补骨脂素对人类乳腺癌细胞增殖作用的实验研究1.1 MTT法测定槲皮素和补骨脂素对人类乳腺癌细胞系细胞增殖的影响1.1.1对雌激素受体阳性乳腺癌细胞系增殖作用影响以10-3μM E2为阳性对照药,金雀异黄素、槲皮素、补骨脂素三种药物分别在1～50μM不同浓度处理MCF-7、T47D细胞24h、48h、72h。与溶剂对照组相比,10-3μM E2处理24h、48h、72h能促进雌激素受体阳性MCF-7、T47D细胞增殖;与E2相似,金雀异黄素在浓度1μM、10μM、20μM、30μM、40μM、50μM时处理MCF-7细胞24h、48h、72h促进增殖,在浓度1μM、10μM、20μM时处理T47D细胞24h、48h、72h促进其增殖;槲皮素在浓度为10μM、20μM、30μM、40μM、50μM时处理MCF-7细胞24h促进增殖,浓度1μM处理48h、72h也促进其增殖;在浓度为10μM、20μM、30μM、40μM时处理T47D细胞24h、48h、72h促进其增殖;补骨脂素在浓度1μM、10μM、20μM、30μM、40μM时处理MCF-7细胞24h、48h、72h促进增殖;在浓度10μM、20μM、30μM、40μM时处理T47D细胞24h、48h、72h促进其增殖。为进一步验证MCF-7细胞的增殖是否通过雌激素受体发生作用,雌二醇组和各浓度药物组同时加入终浓度为10-8mol·L-1ICI182,780共孵育24h。ICI182,780为实验用雌激素受体完全拮抗剂,能完全阻断E2等雌激素样物质由雌激素受体介导的一系列生物效应,包括促增殖作用。10-3μM E2及在1μM～50μM浓度范围内的金雀异黄素、槲皮素和补骨脂素诱导的MCF-7细胞增殖作用被10-8mol·L-1ICI182,780完全拮抗,与溶剂对照组的细胞增殖情况无显着性差异。1.1.2对雌激素受体阴性细胞乳腺癌细胞系增殖作用影响与溶剂对照组相比,10-3μM E2对雌激素受体阴性MDA-MB-231细胞处理24h未见其增殖作用,金雀异黄素、补骨脂素在浓度1μM、10μM、20μM、30μM、40μM、50μM时对雌激素受体阴性MDA-MB-231细胞处理24h,未见其增殖作用;槲皮素在浓度为10μM、20μM、30μM、40μM、50μM时处理24h而抑制其增殖。1.2流式细胞术检测槲皮素、补骨脂素对MCF-7、T47D处理后细胞周期的变化分别选取金雀异黄素、槲皮素和补骨脂素10μM浓度处理MCF-7、T47D细胞48h,与对照组相比,增殖指数明显升高,S期细胞的比例增加,细胞DNA合成增加,对细胞增殖具有促进作用,与10-3μM E2阳性对照组的变化趋势一致,但作用强度不及阳性对照组,当MCF-7、T47D被ICI182,780分别与E2、金雀异黄素、槲皮素、补骨脂素共孵育48h后,E2、金雀异黄素、槲皮素、补骨脂素的增殖效应被抑制,细胞周期S期细胞数比例显着下降。2槲皮素和补骨脂素对雌激素受体两种亚型ERα、ERβ的影响2.1槲皮素、补骨脂素对T47D细胞ERα、ERβ基因mRNA转录的影响10μM金雀异黄素、10μM槲皮素和10μM补骨脂素分别处理T47D细胞48h,RT-PCR表达结果显示金雀异黄素、槲皮素和补骨脂素显着诱导T47D细胞ERαmRNA水平。雌二醇、金雀异黄素、槲皮素和补骨脂素对T47D细胞ERβmRNA水平的影响与对照组相比无显着性差异。2.2槲皮素、补骨脂素对MCF-7、T47D细胞ERα、ERβ受体蛋白表达的影响10-3μM E2、10μM金雀异黄素、10μM槲皮素和10μM补骨脂素分别处理MCF-7、T47D细胞48h,western-blot结果显示,均上调MCF-7、T47D细胞ERα蛋白水平,而对ERβ蛋白表达没有明显影响;当与ICI182,780共孵育MCF-7、T47D细胞ERα蛋白表达被拮抗。3金雀异黄素和补骨脂素对人乳腺癌T47D细胞基因表达的实验研究10-3μM E2、10μM金雀异黄素和10μM补骨脂素分别处理ER阳性细胞T47D 48h,应用乳腺癌和雌激素受体信号通路基因芯片研究相关基因表达。细胞周期蛋白基因CCNE1（Cyclin E1）,CCNE2（Cyclin E2）与CCNA2（Cyclin A2）表达显均显着上调;ESR1即ERα基因,雌激素诱导的相关基因PGR,TFF1/PS2,BCL2,ERBB2,C3,CCND1,TEF3,IGFBP2,IGFBP5,GATA3等也分别不同程度的上调。四研究结论1槲皮素、补骨脂素在一定浓度范围内（1～50μM）促进雌激素受体阳性MCF-7和T47D细胞增殖,而且对MCF-7细胞的增殖效应可以被雌激素受体拮抗剂ICI182,780完全拮抗,而对雌激素受体阴性细胞MDA-MB-231未见显着增殖效应。槲皮素、补骨脂素其增殖效应类似于植物雌激素金雀异黄素。提示槲皮素、补骨脂素是具有雌激素样作用的中药活性成分,其促雌激素受体阳性细胞系增殖作用是通过雌激素受体所介导的。2金雀异黄素、槲皮素和补骨脂素诱导T47D细胞ERαmRNA,而对ERβmRNA水平无明显影响;诱导MCF-7、T47D细胞ERα蛋白表达,而对ERβ受体蛋白的表达无明显影响,而且ICI182,780可拮抗MCF-7、T47D细胞ERα蛋白表达。提示槲皮素、补骨脂素产生的类似金雀异黄素促进ER阳性细胞增殖的雌激素样作用是通过增加ERα表达实现的。3通过基因芯片实验进一步证实补骨脂素具有同金雀异黄素相似的雌激素作用,激活人乳腺癌T47D细胞的ERα受体表达,而且雌激素诱导基因的上调显示补骨脂素同金雀异黄素同属于植物雌激素;通过周期蛋白过表达而调节CDK的活性加速S期进程,促进细胞的增殖。
二、金雀异黄素对低密度脂蛋白诱导的内皮细胞c-myc mRNA表达的影响(英文)（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、金雀异黄素对低密度脂蛋白诱导的内皮细胞c-myc mRNA表达的影响(英文)（论文提纲范文）
（1）金雀异黄素调控TIPE2/Akt对LPS活化的巨噬细胞凋亡的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 GEN对LPS活化的巨噬细胞凋亡的影响 |
| 1.1 试剂与材料 |
| 1.1.1 细胞系 |
| 1.1.2 试剂与耗材 |
| 1.1.3 试剂配置 |
| 1.1.4 仪器设备 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 细胞培养 |
| 1.2.2 实验分组 |
| 1.2.3 CCK8 |
| 1.2.4 RT-qPCR |
| 1.2.5 Western Blot |
| 1.2.6 Anexin v-FITC/PI |
| 1.2.7 TUNEL |
| 1.2.8 Immunofluorescence |
| 1.2.9 统计学分析 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 建立LPS活化的巨噬细胞模型 |
| 1.3.2 GEN降低LPS活化巨噬细胞活力 |
| 1.3.3 GEN促进活化巨噬细胞凋亡率的升高 |
| 1.3.4 GEN影响活化巨噬细胞凋亡指数 |
| 1.3.5 GEN影响活化巨噬细胞凋亡蛋白表达 |
| 1.3.6 GEN促进活化巨噬细胞TIPE2表达 |
| 1.3.7 GEN抑制活化巨噬细胞Akt磷酸化 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二部分 TIPE2/Akt对活化巨噬细胞凋亡的影响 |
| 2.1 试剂与材料 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 试剂与耗材 |
| 2.1.3 试剂配置 |
| 2.1.4 慢病毒载体 |
| 2.1.5 仪器设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 TIPE2 过表达、TIPE2 敲降慢病毒感染RAW264.7细胞及稳定细胞系建立 |
| 2.2.3 实验分组 |
| 2.2.4 CCK8 |
| 2.2.5 TUNEL |
| 2.2.6 Flow Cytometry |
| 2.2.7 Western Blot |
| 2.2.8 统计学分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 建立TIPE2过表达稳定细胞系 |
| 2.3.2 TIPE2过表达抑制活化巨噬细胞活力 |
| 2.3.3 TIPE2过表达上调活化巨噬细胞凋亡率 |
| 2.3.4 TIPE2过表达影响活化巨噬细胞凋亡指数 |
| 2.3.5 TIPE2过表达影响活化巨噬细胞凋亡蛋白表达 |
| 2.3.6 TIPE2过表达抑制活化巨噬细胞Akt活性 |
| 2.3.7 建立TIPE2敲降稳定细胞系 |
| 2.3.8 TIPE2敲降增强活化巨噬细胞活力 |
| 2.3.9 TIPE2敲降降低活化巨噬细胞凋亡率 |
| 2.3.10 TIPE2敲降下调活化巨噬细胞凋亡指数 |
| 2.3.11 TIPE2敲降影响活化巨噬细胞凋亡蛋白表达 |
| 2.3.12 TIPE2敲降上调活化巨噬细胞Akt磷酸化水平 |
| 2.3.13 TIPE2/Akt对活化巨噬细胞活力的影响 |
| 2.3.14 TIPE2/Akt影响活化巨噬细胞凋亡蛋白表达 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三部分 GEN调控TIPE2/Akt对活化巨噬细胞凋亡的影响及机制 |
| 3.1 试剂与材料 |
| 3.1.1 细胞系 |
| 3.1.2 试剂与耗材 |
| 3.1.3 试剂配置 |
| 3.1.4 仪器设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞培养 |
| 3.2.2 实验分组 |
| 3.2.3 CCK8 |
| 3.2.4 Western Blot |
| 3.2.5 统计学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 TIPE2促进GEN对活化巨噬细胞活力的作用 |
| 3.3.2 TIPE2影响GEN对活化巨噬细胞凋亡蛋白表达的作用 |
| 3.3.3 Akt磷酸化抑制GEN对活化巨噬细胞活力的作用 |
| 3.3.4 Akt磷酸化影响GEN对活化巨噬细胞凋亡蛋白表达的作用 |
| 3.3.5 Akt磷酸化抑制TIPE2过表达对GEN调控活化巨噬细胞活力的作用 |
| 3.3.6 Akt磷酸化抑制TIPE2过表达对GEN调控活化巨噬细胞凋亡蛋白表达的作用 |
| 3.3.7 Akt磷酸化促进TIPE2敲降对GEN调控活化巨噬细胞活力的作用 |
| 3.3.8 Akt磷酸化促进TIPE2敲降对GEN调控活化巨噬细胞凋亡蛋白表达的作用 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 英文缩写词表 |
| 攻读硕士学位期间的主要成果 |
| 1 发表的论文 |
| 2 参与科研项目 |
| 致谢 |
（2）金雀异黄素调控NF-κB/miR-21抑制LPS诱导炎症细胞反应的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言与文献综述 |
| 1.1 炎症细胞反应与动脉粥样硬化 |
| 1.2 金雀异黄素的结构特征与生物学活性 |
| 1.3 金雀异黄素的抗炎作用及分子机制 |
| 1.4 炎症细胞反应的表观遗传调控 |
| 1.5 miRNA与炎症细胞反应 |
| 1.6 雌激素调控miR-21影响炎症细胞反应 |
| 1.7 免疫负调控因子TIPE2 |
| 1.8 炎症信号受体TLR4 |
| 1.9 立题依据和意义 |
| 第二章 NF-κB/miR-21 调控LPS诱导的炎症细胞反应 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 构建LPS诱导的炎症细胞反应模型 |
| 2.3.2 LPS上调炎症细胞miR-21 表达 |
| 2.3.3 miR-21促进炎症细胞反应 |
| 2.3.4 活化炎症细胞miR-21 表达依赖于转录因子NF-κB |
| 2.3.5 NF-κB/miR-21 调控炎症细胞反应 |
| 2.3.6 LPS依赖NF-κB增强miR-21 宿主基因启动子活性 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 金雀异黄素调控NF-κB/miR-21 抑制炎症细胞反应 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 GEN对巨噬细胞活力的影响 |
| 3.3.2 GEN以剂量、时间依赖的方式抑制活化巨噬细胞miR-21表达 |
| 3.3.3 GEN抑制miR-21 表达发挥抗炎作用 |
| 3.3.4 GEN对炎症细胞反应的抑制作用依赖于NF-κB |
| 3.3.5 GEN抑制NF-κB,下调miR-21 表达 |
| 3.3.6 GEN对活化巨噬细胞miR-21 宿主基因启动子活性的抑制作用依赖于NF-κB |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 金雀异黄素调控miR-21/TIPE2/TLR4 抑制炎症细胞反应的分子机制 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 材料 |
| 4.2.2 方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 GEN促进免疫负调控因子TIPE2 表达 |
| 4.3.2 GEN通过调控TIPE2 发挥抗炎作用 |
| 4.3.3 GEN抑制炎症信号受体TLR4 介导的信号转导 |
| 4.3.4 GEN上调TIPE2,抑制TLR4 信号通路 |
| 4.3.5 GEN通过抑制miR-21 调控TIPE2/TLR4 信号通路 |
| 4.3.6 TIPE2是miR-21 的直接靶标 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 研究结论与展望 |
| 参考文献 |
| 缩略词表(中英文对照) |
| 攻读博士学位期间撰写和发表的论文 |
| 致谢 |
（3）头花蓼中黄酮类化合物对大鼠血脂紊乱、肝损伤和动脉粥样硬化的保护（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 头花蓼中黄酮类化合物对高脂模型大鼠血脂紊乱和肝损伤的保护 |
| 一、引言 |
| 二、材料和方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、结论 |
| 第二部分 头花蓼中黄酮类化合物对大鼠动脉粥样硬化的作用及其机制研究 |
| 一、引言 |
| 二、材料和方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
（4）大豆异黄酮对蛋鸡生产性能和脂类代谢的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 大豆异黄酮概述 |
| 1.1 大豆异黄酮来源及理化特性 |
| 1.2 大豆异黄酮代谢与吸收 |
| 2 大豆异黄酮提取工艺研究进展 |
| 2.1 有机溶剂萃取法 |
| 2.2 超声波萃取法 |
| 2.3 微波萃取法 |
| 2.4 超临界流体萃取技术 |
| 3 大豆异黄酮检测方法研究进展 |
| 3.1 紫外分光光度法 |
| 3.2 高效液相色谱法 |
| 3.3 薄层扫描法和毛细管电泳法 |
| 4 异黄酮类化合物的生理作用研究进展 |
| 4.1 异黄酮类化合物与癌症 |
| 4.2 异黄酮类化合物与骨质疏松症 |
| 4.3 异黄酮类化合物与心血管疾病 |
| 4.4 异黄酮类化合物与抗氧化 |
| 4.5 异黄酮类化合物与免疫 |
| 5 异黄酮在畜牧业的应用 |
| 5.1 异黄酮类化合物与动物生长 |
| 5.2 异黄酮类化合物与动物繁殖 |
| 5.3 异黄酮类化合物与动物泌乳 |
| 5.4 异黄酮类化合物与禽类产蛋 |
| 6 本试验研究的目的及意义 |
| 试验一 大豆异黄酮的提取工艺优化 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 标准曲线的绘制 |
| 2.2 单因素试验结果 |
| 2.3 响应面试验 |
| 2.4 响应面分析与优化 |
| 2.5 大豆异黄酮的定性检测结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 大豆异黄酮不同提取方法的特点与应用 |
| 3.2 大豆异黄酮不同测定方法的特点与应用 |
| 4 小结 |
| 试验二 大豆异黄酮对蛋鸡生产性能和脂类代谢的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 试验材料 |
| 1.3 试验设计 |
| 1.4 饲养管理 |
| 1.5 指标测定及方法 |
| 1.6 数据处理及统计 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 大豆异黄酮对蛋鸡生产性能及蛋品质的影响 |
| 2.2 大豆异黄酮对蛋鸡脂类代谢的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 大豆异黄酮对蛋鸡生产性能及蛋品质的影响 |
| 3.2 大豆异黄酮对蛋鸡脂类代谢的影响 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（5）大豆异黄酮对内皮细胞损伤保护作用的研究进展（论文提纲范文）
| 1 大豆异黄酮提取物对氧化损伤内皮细胞的保护作用 |
| 1. 1 体外水平研究 |
| 1. 2 体内水平研究 |
| 2 大豆异黄酮单体成分对氧化损伤内皮细胞的保护作用 |
| 2. 1 染料木素 |
| 2. 2 其他单体成分 |
| 3 大豆异黄酮对内皮细胞损伤的保护途径 |
| 3. 1 自由基水平 |
| 3. 2 基因水平 |
| 3. 3 信号通路 |
| 4 展望 |
（6）金雀异黄素调控Nrf2及二相解毒酶的表达对Caco-2细胞氧化损伤保护机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1. 药物及主要实验试剂 |
| 2. 主要仪器 |
| 3. 主要溶液的配制 |
| 4. 药物的配制 |
| 5. 试验用细胞株 |
| 6. 细胞培养 |
| 7. MTT法筛选金雀异黄素的浓度及检测细胞存活率 |
| 8. 细胞内ROS检测方法 |
| 9. Nrf2-siRNA转染 |
| 10. RT-PCR测定相关mRNA水平 |
| 11. Western Blot法检测目的蛋白表达水平 |
| 12. 统计学处理 |
| 结果 |
| 1. 金雀异黄素浓度的筛选 |
| 2. 金雀异黄素对Caco-2细胞二相解毒酶表达的影响 |
| 3. 金雀异黄素对Caco-2细胞的保护作用与HO-1、GCLC的关系 |
| 4. 金雀异黄素对Caco-2细胞中Nrf2表达的影响 |
| 5. 金雀异黄素诱导二相解毒酶HO-1、GCLC表达与Nrf2的关系 |
| 6. 金雀异黄素对H_2O_2损伤的Caco-2细胞存活率的影响 |
| 7. 金雀异黄素对细胞内活性氧(ROS)生成的影响 |
| 8. 金雀异黄素对H_2O_2损伤的Caco-2细胞中二相解毒酶表达的影响 |
| 9. 金雀异黄素对H_2O_2损伤的Caco-2细胞中Nrf2表达的影响 |
| 10. 金雀异黄素对磷酸化ERK1/2和磷酸化PKC蛋白表达的影响 |
| 11. 金雀异黄素激活ERK1/2和PKC通路对Nrf2及HO-1、GCLC表达的影响 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
（7）大豆异黄酮预防心血管疾病的研究进展（论文提纲范文）
| 1 SIF与血脂代谢 |
| 2 抗低密度脂蛋白氧化 |
| 3 对血管平滑肌细胞的作用 |
| 4 抗血栓生成作用 |
| 5 对动脉粥样硬化相关基因表达的影响 |
| 6 应用前景展望 |
（8）益气活血中药复方三芪口服液对早期糖尿病肾病的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一部分 研究背景 |
| 1 古代文献有关本病的论述 |
| 2 中医药防治糖尿病肾病的实验研究近况 |
| 3 糖基化终末产物与糖尿病肾病 |
| 4 足细胞损伤与糖尿病肾病 |
| 第二部分 临床研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 结果分析 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 三芪口服液对实验性糖尿病肾病模型大鼠肾组织AGEs/RAGE、PAI-1、TGF-β1表达影响的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 实验二 三芪口服液对糖尿病大鼠肾足细胞及其膜蛋白PCX、nephrin表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一 英文缩略语 |
| 附录二 糖尿病肾病常见症状积分标准 |
| 附录三 附图 |
| 研究生在学期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（9）木贼大孔树脂提取物对ECV304细胞炎症反应及凋亡的抑制作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 木贼总黄酮和总酚酸的提取 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 小结 |
| 第二部分 木贼提取物对氧化低密度脂蛋白诱导的ECV304细胞炎症反应及凋亡的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）槲皮素和补骨脂素对人乳腺癌细胞株雌激素样作用的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词 |
| 综述 |
| 文献综述一 植物雌激素的活性成分及其生物活性研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 具有雌激素样作用的中药研究进展 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 技术流程图 |
| 第一部分 槲皮素、补骨脂素对人乳腺癌细胞增殖作用的实验研究 |
| 实验一 MTT法测定槲皮素、补骨脂素对人乳腺癌细胞增殖作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 流式细胞仪检测槲皮素、补骨脂素对人乳腺癌细胞周期的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 槲皮素、补骨脂素对人乳腺癌细胞雌激素受体表达的影响 |
| 实验三 槲皮素、补骨脂素对人乳腺癌细胞ERαERβmRNA表达的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 槲皮素、补骨脂素对人乳腺癌细胞ERαERβ蛋白表达的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 基因芯片技术探讨基因表达的实验研究 |
| 实验五 金雀异黄素和补骨脂素对人乳腺癌T47D细胞基因表达的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、金雀异黄素对低密度脂蛋白诱导的内皮细胞c-myc mRNA表达的影响(英文)（论文参考文献）
- [1]金雀异黄素调控TIPE2/Akt对LPS活化的巨噬细胞凋亡的影响[D]. 刘素娟. 湖南师范大学, 2020(01)
- [2]金雀异黄素调控NF-κB/miR-21抑制LPS诱导炎症细胞反应的机制研究[D]. 丛丽. 湖南师范大学, 2020(01)
- [3]头花蓼中黄酮类化合物对大鼠血脂紊乱、肝损伤和动脉粥样硬化的保护[D]. 王智谦. 武汉大学, 2018(01)
- [4]大豆异黄酮对蛋鸡生产性能和脂类代谢的影响[D]. 李晓玲. 沈阳农业大学, 2016(02)
- [5]大豆异黄酮对内皮细胞损伤保护作用的研究进展[J]. 任娇,孙惜时,田憬若,谈甜甜,崔桂友. 大豆科学, 2014(01)
- [6]金雀异黄素调控Nrf2及二相解毒酶的表达对Caco-2细胞氧化损伤保护机制的研究[D]. 翟晓涵. 大连医科大学, 2013(03)
- [7]大豆异黄酮预防心血管疾病的研究进展[J]. 柯晓安,张舜,王珊珊. 东南国防医药, 2009(03)
- [8]益气活血中药复方三芪口服液对早期糖尿病肾病的影响[D]. 侯海晶. 广州中医药大学, 2009(10)
- [9]木贼大孔树脂提取物对ECV304细胞炎症反应及凋亡的抑制作用[D]. 李丽玮. 河北医科大学, 2009(10)
- [10]槲皮素和补骨脂素对人乳腺癌细胞株雌激素样作用的实验研究[D]. 沈丽霞. 北京中医药大学, 2008(12)