一、脐血造血细胞的冷冻保存方法的比较（论文文献综述）
韩洪祯[1]（2016）在《脐血库造血干细胞冻存方法的研究现状》文中研究说明脐带血富含造血干细胞和各系祖细胞,被认为是除骨髓以外的一种很有应用前景的移植用的造血干细胞来源。与骨髓血相比,脐血来源丰富,容易采集,寻找无关供体时间短,HLA配型要求低,具有更强的扩增潜能、复制能力,传播巨细胞病毒危险性低,发生移植物抗宿主病（GVHD）危险性小和可扩充少数民族供体库等优点[1-2]。自1988年Gluckman等[3]实施第1例脐带血干细胞移植以来,近20多年,脐血
王秋实,马良艳,张晋,佟海侠,王殿昌,段小晶,吴思梦,袁哲,王哲,刘学勇[2]（2014）在《1727份公共库脐带血的质量分析——附23份库存脐带血干细胞解冻质控分析》文中提出目的评估公共库存脐带血造血干细胞的质量及脐血库用于质控的血样是否能够正确反应实际血袋内的脐带血造血干细胞的活性和数量。方法分析2009年1月-2010年12月按照Rubinsten标准分离入库保存的1 727例合格脐带血造血干细胞,通过流式细胞术和集落培养法计算造血干细胞数量,血细胞计数仪计数细胞数量、应用气相液氮系统深低温冷冻造血干细胞。分析入库细胞总数（TNC）的影响因素,以及与CD34+总数、集落形成单位（CFU-C）总数的相关性;对冷冻时间>24个月的23份脐带血造血干细胞解冻后,分析解冻前后血袋、冷冻麦管内和冻存管内的细胞数、CFU-C产率、CD34+百分比、活细胞比率,并推算血袋内TNC、CD34+细胞数、CFU-C总数。结果1 727份脐带血平均血量为（96.62±20.41）m L,入库TNC、CD34+总数、CFU-C总数分别为（9.88±2.54）×108个、（2.76±1.85）×106个、（11.05±7.72）×105个,CD34+总数和CFU-C总数与TNC相系数均为0.49,CD34+百分比与CFC产率相关系数为0.80。23份解冻脐带血冷冻前后血袋、冷冻管和冷冻麦管内WBC（×109/L）分别为28.03±8.01、22.55±6.56、20.43±5.23,TNC（×108）为10.74±3.33、58±2.90、7.78±2.28、7.97±2.73、台盼兰拒染率（%）99.0±0、83.04±6.21、78.9±6.56、80.43±6.01（P<0.01）;冷冻前和解冻后血袋、冷冻管,冷冻麦管的CFU-C产率（/105）分别为159.9±45.8、149.2±37.4、91.6±35.8、155.0±41.2,冷冻管内CFU-C产率明显下降（P<0.05）;冷冻前和解冻后血袋、冷冻管,冷冻麦管的CFU-C总数（×105）分别为159.9±45.8、149.2±37.4、91.6±35.8、155.0±41.2,解冻后冷冻管内CFU-C总数下降明显（P<0.05）;血袋、冷冻管和麦管内的小细胞数量（×108）分别为3.92±1.40、3.95±1.77、3.86±1.46、4.05±1.52,CD34+总数（×106）为3.23±1.84、3.02±1.88、3.12±1.85、3.62±3.07。结论公共库入库的1 727份脐带血符合国际通用标准;解冻后检测分析发现,脐带血冷冻后丢失的细胞以成熟的粒细胞为主,冷冻解冻后的脐带血造血干细胞符合临床应用标准。
李昕,陈方平,蒋铁斌,王二华,刘竞[3]（2013）在《深低温冷冻保存对脐血细胞的影响及机制》文中研究说明目的:判断深低温冷冻保存对于脐血单个核细胞和CD34+细胞集落形成能力及凋亡率的影响,从而选取能准确反映冷冻损伤的指标以及优化脐血冷冻保存的方式。方法:从脐血中分离出单个核细胞及CD34+细胞,对这两种形式的细胞进行深低温冷冻保存,保存30 d后复温,并分别进行冷冻前后的粒-巨噬细胞集落形成单位（colony formingunit-granulocyte/monocyte,CFU-GM）和髓系多向造血干细胞（colony formingunit-granulocyte,erythrocyte,monocyte and megakaryocyte,CFU-GEMM）的培养,比较冷冻前后的细胞集落产率,同时AnnexinV–FITC-PI染色后流式细胞仪检测两种保存形式的细胞冷冻前后的细胞凋亡率。结果:冷冻保存对于以单个核细胞形式保存的细胞其集落形成能力和以CD34+细胞形式保存细胞的CFU-GM产率均无明显影响（P=0.31）,而对以CD34+细胞形式保存的细胞其CFU-GEMM的产率却有明显影响,冷冻后的CFU-GEMM的产率明显低于冷冻前（P<0.05）,且冷冻前即发现两种形式的细胞均有凋亡,冷冻后以单个核细胞形式保存的细胞其细胞凋亡率稍有所上升,但以CD34+细胞形式保存的细胞其细胞凋亡率更高。结论:冷冻前细胞即存在凋亡,冷冻对于以CD34+细胞形式冷冻保存的细胞中的较早期的祖细胞CFU-GEMM存在一定的损伤,其损伤可能主要为诱导细胞凋亡所致,而对于以单个核细胞形式保存的细胞的影响较小。
关雪晶,杨慧,张雁,吴宏[4]（2009）在《当归多糖对脐血造血细胞的抗冷冻损伤作用》文中研究表明目的:探讨当归多糖（APS）对脐血造血细胞的抗冷冻损伤作用.方法:采用细胞计数法比较羟乙基淀粉（HES）、明胶、淋巴细胞分离液（Ficoll）分离脐血单个核细胞（MNC）的回收率.应用细胞计数法、台盼蓝拒染法、集落形成实验和流式细胞术,检测冻存1,3,6mo脐血MNC的生物学活性,将脐血MNC与不同浓度APS共培养24h后冻存,1mo后复苏,观察APS对脐血MNC抗冷冻损伤的作用.结果:HES法、明胶法的MNC回收率均大于85%,显着高于Ficoll法（50.00±4.00）%（P<0.05）;冻存1,3,6mo组MNC,CFU-Mix,CD34+细胞回收率及台盼蓝拒染率差异均无显着性,且脐血MNC的损伤与冻存时间不相关.APS50,100,200,400mg/L不同浓度APS组MNC,CFU-Mix回收率和台盼蓝拒染率除APS400mg/L组下降外,其余各组明显上升（P<0.05）;各组组间CD34+细胞回收率差异无显着性.结论:APS可有效提高脐血造血细胞的抗冷冻损伤能力.
杨慧,吴宏[5]（2008）在《当归多糖对脐血造血细胞冷冻损伤的可恢复性研究》文中研究指明目的探讨当归多糖（APS）是否具有恢复脐血造血细胞冷冻损伤的作用及与造血生长因子（HGFs）联合促进冷冻复苏后脐血单个核细胞（MNC）体外扩增的效应。方法将冷冻30d的脐血MNC复苏后,立即在常规培养体系中分别加入APS0、50、100、200、400μg/mL,或同时加入HGFs组合,培养24h或14d,采用MNC计数,台盼蓝拒染实验、MTT法、CFU-Mix集落形成实验以及流式细胞术计数CD34+细胞等方法分别观察APS促进冷冻损伤的脐血造血细胞恢复的能力以及APS联合HGFs对脐血造血细胞的扩增能力。结果冷冻复苏后加入一定质量浓度的APS可使脐血MNC数量与台盼蓝拒染率明显增加,造血细胞的增殖能力显着提高,CFU-Mix集落产率明显提高（P<0.05）,且能明显提高冻存脐血MNC中CD34+细胞率（P<0.05）;一定质量浓度的APS联合HGFs可显着提高冷冻复苏后的脐血MNC扩增倍数及CFU-Mix集落产率（P<0.05）;其作用无明显量效关系。结论APS能提高冷冻复苏后脐血造血细胞的活力、增殖能力以及CD34+细胞率,可促进脐血造血细胞冷冻损伤的恢复;与HGFs联合可促进冷冻复苏后的脐血MNC体外扩增。
李一鸣[6]（2008）在《脐血干细胞玻璃化保存过程的研究》文中研究表明脐血中含有丰富的造血干细胞,可以治疗白血病、恶性肿瘤、重型地中海贫血等多种疾病。脐带血中造血干细胞占有的比例甚至超过成人骨髓,是继骨髓和外周血之后新近发现的造血干细胞的又一来源。目前,脐血造血干细胞的低温保存主要采用的是慢速冻存方法,但是这种方法的冻存效果以及冻存技术还有需要提高和完善的地方。玻璃化法作为一种新型的、简便的低温保存方法可以有效地克服慢速冻存的缺点,但是玻璃化法需要高浓度的保护剂才能实现,这会给细胞带来很大的渗透损伤和毒性损伤。本文对联合玻璃化保护剂的特性,联合玻璃化保护剂的导入、洗脱程序以及脐血造血干细胞玻璃化低温保存过程及其后期培养等方面的问题进行了系统的研究。首先对联合玻璃化保护剂的特性进行了研究。本实验所采用的联合玻璃化保护剂的组成为:25%DMSO、17%甲酰胺、10%1,2-丙二醇和6%聚乙二醇（w/v）。通过稀释的方法测定了不同浓度的联合玻璃化保护剂的渗透压值。通过冷台观察发现当降温速率低于30℃/min时,保护剂不能实现玻璃化。提高复温速率能够有效地缩短反玻璃化时间。其次对脐血造血干细胞联合玻璃化保护剂的连续导入及分步洗脱过程进行了研究。通过采用分别在室温（20℃）与低温（1.5℃）下,不同导入时间的方法连续导入保护剂,并采用分五步,每步之间平衡60s的方法对保护剂进行洗脱。实验结果表明,在低温下,导入后细胞的活率高于室温导入,而最佳的导入时间为60s。洗脱后,细胞活率的分布情况与导入后基本一致,并且洗脱过程所造成的细胞损失相对较小。最后对脐血造血干细胞玻璃化低温保存过程及其后期培养进行了研究。实验研究了降复温操作方法对细胞活率的影响,并与导入、洗脱过程进行比较。通过对洗脱保护剂后的细胞进行4天培养,全面观察了玻璃化保存过程后细胞的生长情况。结果表明,当前采用的玻璃化低温保存程序是一套简单有效的方法,可以满足实验要求。通过对细胞的后期培养,进一步证明60s为保护剂连续导入最佳时间。并且,导入温度对细胞的后期培养并无影响。
刘铭彦[7]（2007）在《玻璃化法低温保存脐血造血干细胞的研究》文中提出脐血中含有丰富的造血干细胞，是继骨髓和外周血之后新近发现的造血干细胞的又一来源。为了更有效地利用脐血造血干细胞，脐血造血干细胞的低温保存便成为一个重要的课题。目前，脐血造血干细胞的低温保存主要采用的是慢速冻存方法，但是这种方法的冻存效果以及冻存技术还有需要提高和完善的地方；玻璃化法作为一种新型的、简便的低温保存方法可以有效地克服慢速冻存的缺点，但是玻璃化法需要高浓度的保护剂才能实现，这会给细胞带来很大的渗透损伤和毒性损伤。本文对联合玻璃化保护剂的特性，联合玻璃化保护剂的导入、洗脱程序以及脐血造血干细胞玻璃化低温保存过程等方面的问题进行了较为系统的研究。首先对联合玻璃化保护剂的特性进行了研究。联合玻璃化保护剂的组成为：25％DMSO、17％甲酰胺、10％1，2-丙二醇和6％聚乙二醇（w／v）。通过稀释的方法测定了不同浓度的联合玻璃化保护剂的渗透压值。通过冷台观察发现当降温速率低于30℃／min时，保护剂不能实现玻璃化。提高复温速率能够有效地减少反玻璃化过程中冰晶的数量，抑制冰晶的生长。同时经实验确定，采用一步导入方法进行保护剂导入时会对造血干细胞造成严重的渗透损伤和毒性损伤。其次对脐血造血干细胞联合玻璃化保护剂的导入洗脱过程进行了优化。通过采用分五步、不同平衡时间的方法对导入洗脱过程进行优化，同时考察在洗脱过程中添加不同浓度的海藻糖对洗脱效果的影响。实验结果表明：五步导入每步之间平衡90s和五步洗脱每步之间平衡60s得到了最佳的造血干细胞活率。在洗脱过程中添加0.5M海藻糖能够有效地提高造血干细胞活率。最后对脐血造血干细胞玻璃化低温保存过程进行了研究。考察了降、复温速率对玻璃化后造血干细胞活率的影响。同时对造血干细胞的玻璃化低温保存和慢速冻存进行了比较分析。实验结果表明：提高降、复温速率都能有效地提高玻璃化后的造血干细胞活率。玻璃化后的造血干细胞活率高于慢速冻存后的造血干细胞活率。
杨慧[8]（2007）在《当归多糖对造血细胞抗冷冻损伤及冷冻损伤的可恢复性研究》文中提出当归作为祖国传统医学的“补血、活血”要药已有数千年的临床应用历史。现代实验研究证明:当归化学成分复杂,当归多糖（APS）是其主要化学成份之一。APS是当归中促进造血的有效成分,对正常或贫血小鼠的髓系造血祖细胞（BFU-E、CFU-E、CFU-GM和CFU-MK）的增殖分化有显着的促进作用;同时APS在体外可促进人红系、粒单系及混合系造血祖细胞的增殖分化;另外,在有外源性造血生长因子（HGF）存在的条件下,APS可促进脐血单个核细胞（MNC）总数,CFU-GM,CFU-E集落数量增多,且可使脐血单个核细胞形成大量基质细胞贴壁。但目前尚未见APS对造血细胞抗冷冻损伤及冷冻损伤的可恢复性研究的报道。造血干细胞移植（HSCT）是将从骨髓、外周血、脐血中分离的造血干细胞（HSC）移植给受者,从而重建或恢复受者的造血和免疫功能,现已成为治疗恶性血液病和多种实体瘤的有效方法。脐血（umbilical cord blood, UCB）是继骨髓及外周血之后又一新的HSC移植供源,因具有HSC含量高,增殖能力强,免疫原性弱等特点已被应用于临床,但单份脐血HSC含量有限,只能用于低体重小儿移植。为更广泛地开展脐血HSCT及建立脐血库,需长期低温保存脐血造血细胞。如何在体外将脐血造血细胞进行有效的保存与复苏,降低其冷冻损伤,是HSCT治疗的关键技术环节之一。造血细胞受到冷冻、解冻过程的损伤,活力会有一定程度下降,但在适当条件下,可使造血细胞活力得到最大程度的保存。除冷冻保护剂和适当的降温速度、复温过程外,目前已发现某些HGF对提高冷冻的造血细胞增殖潜力有一定作用。但其价格较昂贵。研究发现:人参总皂苷能促进冷冻骨髓造血细胞的复苏、增殖,提高骨髓细胞冷冻损伤的可恢复性。许多植物多糖尤其是中药多糖对血细胞发生有明显促进作用,其是否可以提高冷冻的HSC增殖潜力是值得我们深入探讨的。本研究以健康产妇,足月分娩且无并发症的脐血为标本,分为两个部分进行实验研究:1、APS对脐血造血细胞抗冷冻损伤的作用; 2、APS对脐血造血细胞冷冻损伤的可恢复性研究及与HGF联合促进冷冻复苏后脐血造血细胞体外扩增的效应。本研究旨在为APS在造血细胞冷冻保护中的应用提供实验依据。1、APS对脐血造血细胞抗冷冻损伤的作用研究目的:探讨APS在脐血造血细胞冷冻前的抗冷冻损伤作用。方法: 1、用淋巴细胞分离液（Ficoll）密度梯度离心法,明胶法,羟乙基淀粉（HES）法分离脐血MNC,分离前后计数MNC数,通过计算MNC的得率比较三种分离方法的效率,从而选择一种快速有效的分离方法。2、将脐血MNC以5%的二甲基亚砜（DMSO）为冷冻保护剂在液氮中分别冻存1、3、6个月,采用细胞计数法,台盼蓝拒染实验,造血祖细胞体外半固体培养,流式细胞术等技术方法,通过比较台盼蓝拒染率,MNC、CFU-Mix、CD34+细胞回收率了解冻存不同时间对脐血MNC和造血细胞活性的影响。3、将分离得到的MNC随机分为5组: APS50μg/ml组、APS100μg/ml组、APS200μg/ml组、APS400μg/ml组和对照组。分别加入不同浓度的APS或等量的培养液培养24小时,采用细胞计数法计数培养前、后各组的MNC数,了解APS能否促进MNC的增殖。4、将以上各组培养24h后的脐血MNC以5%的DMSO作为冷冻保护剂,在液氮中保存1个月后取出复苏。采用细胞计数法,台盼蓝拒染实验,造血祖细胞体外半固体培养,流式细胞术等技术方法,通过研究各组冻存前后MNC、CFU-Mix、CD34+细胞回收率及台盼蓝拒染率,了解APS在冷冻前作用于脐血造血细胞,是否能增强脐血造血细胞耐受冷冻的能力。结果:1、三种分离方法中HES组和明胶组的MNC得率明显高于Ficoll组（P<0.05）,HES组和明胶组的MNC得率无统计学差异（P>0.05）。2、脐血MNC冻存1,3,6个月,比较冻存前后MNC、CFU-Mix、CD34+细胞回收率及台盼蓝拒染率显示差异均无显着性（ P>0.05）。3、APS100μg/ml组和APS200μg/ml组的脐血MNC的增殖倍数明显高于对照组（P<0.05）。4、APS100μg/ml组和APS200μg/ml组的MNC和CFU-Mix回收率较对照组均明显增高（P<0.05）; APS50μg/ml组、APS100μg/ml组和APS 200μg/ml组的台盼蓝拒染率较对照组明显增高（P<0.05）; APS100μg/ml组的以上指标均显示效果最佳;APS各浓度组和对照组比较,CD34+细胞回收率差异无显着性（P>0.05）。结论:1、HES法和明胶法分离脐血MNC的效率高于Ficoll密度梯度离心法。2、脐血MNC经过冻存和复苏,细胞有一定的损伤,但这种损伤并不与冻存时间成正比。3、APS能促进脐血MNC的增殖。4、APS能增强脐血造血细胞抗冷冻损伤的能力。2、APS对脐血造血细胞冷冻损伤的可恢复性研究目的:探讨APS是否具有恢复脐血造血细胞冷冻损伤的作用及与HGF联合促进冷冻复苏后脐血造血细胞体外扩增的效应。方法:1、将复苏后的脐血MNC随机分为5组:APS50μg/ml组、APS100μg/ml组、APS200μg/ml组、APS400μg/ml组和对照组。复苏后立即加入不同浓度的APS,对照组加入等量培养液共同培养24h,采用MNC计数,台盼蓝拒染实验,造血祖细胞体外半固体培养,MTT比色分析法以及流式细胞术等方法检测APS对脐血造血细胞冷冻损伤的恢复性作用;2、冷冻复苏后将脐血MNC与HGF组合和不同浓度的APS（50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml）共培养14天,计数MNC总数、CFU-Mix数以及用流式细胞仪检测扩增后CD34+细胞率。结果:1、APS 100μg/ml组和200μg/ml组较对照组脐血MNC数量与台盼蓝拒染率均明显增加,脐血造血细胞的增殖能力显着提高,CFU-Mix集落产率也明显提高（P<0.05）,APS 100μg/ml组的各个指标均显示效果最佳;APS 100μg/ml组的脐血MNC中CD34+细胞率明显高于对照组（P<0.05）。2、与对照组相比,APS浓度为100μg/ml和200μg/ml联合HGF组可显着提高冷冻复苏后的脐血MNC数,CFU-Mix集落产率和CD34+细胞率（P<0.05）。结论:1、APS能提高冷冻复苏后脐血MNC和造血细胞的数量、活力以及增殖能力,可促进脐血造血细胞冷冻损伤的恢复。2、APS与HGF联合可促进冷冻复苏后的脐血造血细胞体外扩增。
林小娟,姜俊芬,韩伟[9]（2007）在《脐带血冷冻保存为孩子健康提供保障》文中研究说明脐血干细胞移植在恶性肿瘤、良性或者发育不良导致的造血失调和某些遗传性疾病患者的临床治疗中的作用越来越大,在某些疾病的基因治疗上也具有非常诱人的前景。建立一套最优的脐血保存方法在扩大脐血的应用上起着十分重要的作用。本文就脐血冻存和移植所涉及的一些过程及意义作了简要概括,并对脐带血的深低温冷冻保存技术及目前我国脐带血库的概况作了分析比较。
孟凡会,田青武,曹永献,刘忠强,孙波,赵洪国[10]（2006）在《深低温冻存对脐血单个核细胞免疫特性影响的研究》文中进行了进一步梳理目的研究冻存过程对脐血造血细胞免疫表型和细胞因子分泌量的影响,为脐血临床移植提供实验依据。方法18例脐血标本分离液分出单个核细胞（MNC）后,分成三组,即新鲜标本对照组、DMSO对照组及低温冻存组。低温冻存组加二甲亚砜（终浓度为10％）,经程控降温后放-196 ℃液氮保存,冻存30天后在40℃的水浴中快速复苏。复苏后和其它两组一样进行细胞计数、台盼蓝拒染率检测以及流式细胞仪单克隆抗体检测单个核细胞中CD4+、CD8+细胞亚群的比例;并经PHA刺激,培养72小时,用ELISA法检测培养上清液中白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素 -6（IL-6）、γ-干扰素（IFN-γ）及粒-巨细胞集落刺激因子（GM-CSF）的含量。结果台盼蓝拒染率比新鲜标本对照组有所下降（t=7．55,P<0．01）。细胞亚群CD4+细胞比例明显升高（t=-2．83- -2．73,P<0．05）。IL-2、IL-6及IFN-γ三种细胞因子检测结果,除IL-6与新鲜标本对照组比较差别不具统计学意义外,其它均有所上升（t=-7．91--2．60,P<0．01或P<0．05）。GM-CSF与DMSO 对照组无差别,与新鲜标本对照组比较有明显的下降（t=7．74,P<0．01）。结论冻存可以使淋巴细胞亚群及细胞因子分泌量发生改变,此冻存过程可以提高脐血造血细胞的免疫功能。在脐血移植后, 这可能有利于机体早期免疫杌能的重建,提高抗感染、抗肿瘤的能力。
二、脐血造血细胞的冷冻保存方法的比较（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、脐血造血细胞的冷冻保存方法的比较（论文提纲范文）
（1）脐血库造血干细胞冻存方法的研究现状（论文提纲范文）
| 一、脐带血冻存方式 |
| 1. 程控降温冷冻保存: |
| 2. 非程控降温冷冻保存: |
| 二、影响脐血冻存质量的因素 |
| 1. 冷冻保护剂的使用: |
| 2. 冻存温度及降温速率: |
（2）1727份公共库脐带血的质量分析——附23份库存脐带血干细胞解冻质控分析（论文提纲范文）
| 1 对象与方法 |
| 1.1 供者来源与研究对象的选择 |
| 1.2 脐血采集 |
| 1.3 脐血分离处理 |
| 1.4脐血造血干细胞冷冻保存 |
| 1.5 脐血造血干细胞程序降温 |
| 1.6 入库脐血质量检测[9, 10] |
| 1.6.1 有核细胞计数 |
| 1.6.2 病毒检测 |
| 1.6.3 造血干细胞计数 |
| 1.6.4 细胞活性检测 |
| 1.6.5 HLA分型 |
| 1.6.6 细菌学检测 |
| 1.7 冷冻脐带血造血干细胞质量评估 |
| 1.8统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 公共脐血库库存1 727份脐血基本情况 |
| 2.2 公共脐血库1 727份入库脐血造血干细胞相关性分析 |
| 2.3 公共脐血库1 727份入库脐血白细胞计数与CD34+比例、CFU-C产率相关性分析 |
| 2.4 公共脐血库23份库存脐血复苏后质量检测 |
| 3 讨论 |
（3）深低温冷冻保存对脐血细胞的影响及机制（论文提纲范文）
| 1 材料及方法 |
| 1.1 脐血采集 |
| 1.2 材料 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 以密度梯度离心法分离单个核细胞 |
| 1.3.2 CD34+细胞的分选 |
| 1.3.3 单个核细胞及CD34+细胞的低温保存及复温 |
| 1.3.4 单个核细胞及CD34+细胞的集落半固体培养 |
| 1.3.5 细胞凋亡检测 |
| 1.4 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 脐血CD34+细胞的分离纯化结果 |
| 2.2 脐血CFU-GM和CFU-GEMM的培养特征 |
| 2.3 冷冻前后单个核细胞的CFU-GM和CFU-GEMM的产率 |
| 2.4 冷冻前后CD34+细胞的CFU-GM和CFU-GEMM的产率 |
| 2.5 冷冻前后细胞凋亡率的比较 |
| 3 讨论 |
（4）当归多糖对脐血造血细胞的抗冷冻损伤作用（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 实验分组 |
| 1.2.1.1 脐血MNC分离检测分组 |
| 1.2.1.2 脐血MNC冻存时间检测分组 |
| 1.2.1.3 APS作用检测分组 |
| 1.2.2 脐血MNC的分离 |
| 1.2.2.1 Ficoll法检测 |
| 1.2.2.2 HES法检测 |
| 1.2.2.3 明胶法检测 |
| 1.2.3 脐血MNC的冷冻保存与复苏 |
| 1.2.4 各项指标检测 |
| 1.2.4.1 脐血MNC计数 |
| 1.2.4.2 台盼蓝拒染实验 |
| 1.2.4.3 脐血混合集落形成单位 (CFU-Mix) 体外培养与计数 |
| 1.2.4.4 流式细胞术检测 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组脐血分离MNC效率比较 |
| 2.2 不同冻存时间对脐血MNC, CFU-Mix, CD34+细胞回收率及台盼蓝拒染率的影响 |
| 2.3 冻存前加入APS对脐血MNC, CFU-Mix集落回收率和台盼蓝拒染率的影响 |
| 2.4 冻存前加入APS对脐血CD34+细胞回收率的影响 |
| 3 讨论 |
（5）当归多糖对脐血造血细胞冷冻损伤的可恢复性研究（论文提纲范文）
| 1 材料 |
| 1.1 实验标本: |
| 1.2 药品与试剂: |
| 2 方法 |
| 2.1 脐血 MNC的分离: |
| 2.2 脐血 MNC的冷冻保存: |
| 2.3 脐血 MNC的融冻与复苏: |
| 2.4 实验分组: |
| 2.4.1 将冷冻30 d 的脐血 MNC 复苏后随机分成5组: |
| 2.4.2 将冷冻复苏后的脐血 MNC随机分成5组: |
| 2.5 脐血 MNC计数: |
| 2.6 台盼蓝拒染实验: |
| 2.7 MTT 比色试验: |
| 2.8 CFU-Mix 体外培养与计数: |
| 2.9 流式细胞术检测脐血CD34+ 细胞百分率: |
| 2.10 脐血造血细胞体外扩增: |
| 2.11 统计学方法: |
| 3 结果 |
| 3.1 APS 对冻存复苏的脐血 MNC数量、活细胞率和增殖能力的影响: |
| 3.2 APS 对冻存复苏的脐血CFU-Mix 集落产率和 CD34+ 细胞率的影响: |
| 3.3 APS 联合 HGFs对冷冻复苏的脐血造血细胞体外扩增的影响: |
| 4 讨论 |
（6）脐血干细胞玻璃化保存过程的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 低温保存概述 |
| 1.2 低温冷冻保存的方法 |
| 1.2.1 慢速冻存法 |
| 1.2.2 玻璃化冻存法 |
| 1.3 低温损伤机理及其假说 |
| 1.4 冷冻保护剂及其保护机理 |
| 1.4.1 冷冻保护剂概述 |
| 1.4.2 渗透性冷冻保护剂 |
| 1.4.3 非渗透性冷冻保护剂 |
| 1.4.4 新型冷冻保护剂:抗冻蛋白 |
| 1.5 玻璃化的实现 |
| 1.5.1 冷冻保护剂导入阶段 |
| 1.5.2 降温复温阶段 |
| 1.5.3 冷冻保护剂洗脱阶段 |
| 1.5.4 低温断裂及反玻璃化 |
| 1.6 渗透压 |
| 1.7 脐血及脐血造血干细胞的低温保存 |
| 1.7.1 脐血及脐血造血干细胞概述 |
| 1.7.2 脐血及脐血造血干细胞的临床应用 |
| 1.7.3 脐血的采集及保存 |
| 1.7.4 脐血造血干细胞的分离及低温保存 |
| 1.8 小结 |
| 2 脐血的采集及造血干细胞的分离和培养 |
| 2.1 概述 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 脐血来源 |
| 2.2.2 实验装置 |
| 2.2.3 实验药品及试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 实验试剂的配制 |
| 2.3.2 细胞计数法 |
| 2.3.3 脐血的采集 |
| 2.3.4 造血干细胞的分离和原代培养 |
| 2.3.4 脐血造血干细胞的传代培养 |
| 2.4 小结 |
| 3 脐血造血干细胞联合玻璃化保护剂特性的研究 |
| 3.1 概述 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验装置 |
| 3.2.2 实验药品及试剂 |
| 3.2.3 联合玻璃化保护剂的配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 联合玻璃化保护剂渗透压值的测定 |
| 3.3.2 降温速率对联合玻璃化保护剂玻璃化形成能力影响的研究 |
| 3.3.3 复温速率对联合玻璃化保护剂反玻璃化时间影响的研究 |
| 3.4 实验结果与讨论 |
| 3.4.1 联合玻璃化保护剂的渗透压值 |
| 3.4.2 降温速率对联合玻璃化保护剂玻璃化形成能力的影响 |
| 3.4.3 复温速率对联合玻璃化保护剂反玻璃化时间的影响 |
| 3.5 小结 |
| 4 脐血造血干细胞玻璃化保护剂连续导入过程及分步洗脱过程的研究 |
| 4.1 概述 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验装置 |
| 4.2.2 实验药品及试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 联合玻璃化保护剂连续导入时间范围的初步确定 |
| 4.3.2 联合玻璃化保护剂连续导入最佳时间的确定及常温与低温导入效果的对比实验 |
| 4.4 实验结果与讨论 |
| 4.4.1 联合玻璃化保护剂连续导入时间范围的初步确定 |
| 4.4.2 联合玻璃化保护剂连续导入最佳时间的确定及常温与低温导入效果的对比实验 |
| 4.5 小结 |
| 5 脐血造血干细胞玻璃化低温保存及后期培养 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 实验装置 |
| 5.2.2 实验药品及试剂 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 脐血造血干细胞的玻璃化低温保存 |
| 5.3.2 脐血造血干细胞玻璃化保存的后期培养 |
| 5.4 实验结果与讨论 |
| 5.4.1 脐血造血干细胞的玻璃化低温保存 |
| 5.4.2 脐血造血干细胞玻璃化保存的后期培养 |
| 5.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录A 英文缩略语 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 |
| 致谢 |
（7）玻璃化法低温保存脐血造血干细胞的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 低温保存概述 |
| 1.2 低温保存方法 |
| 1.2.1 慢速冷冻法 |
| 1.2.2 玻璃化冷冻法 |
| 1.3 低温损伤机理及其假说 |
| 1.4 冷冻保护剂及其保护机理 |
| 1.4.1 冷冻保护剂概述 |
| 1.4.2 渗透性冷冻保护剂 |
| 1.4.3 非渗透性冷冻保护剂 |
| 1.4.4 新型冷冻保护剂:抗冻蛋白 |
| 1.5 玻璃化的实现 |
| 1.5.1 冷冻保护剂导入阶段 |
| 1.5.2 降温复温阶段 |
| 1.5.3 冷冻保护剂洗脱阶段 |
| 1.5.4 低温断裂及反玻璃化 |
| 1.6 渗透压 |
| 1.7 脐血及脐血造血干细胞的低温保存 |
| 1.7.1 脐血及脐血造血干细胞概述 |
| 1.7.2 脐血及脐血造血干细胞的临床应用 |
| 1.7.3 脐血的采集及保存 |
| 1.7.4 脐血造血干细胞的分离及低温保存 |
| 1.8 小结 |
| 2 脐血的采集及造血干细胞的分离和培养 |
| 2.1 概述 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 脐血来源 |
| 2.2.2 实验装置 |
| 2.2.3 实验药品及试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 实验试剂的配制 |
| 2.3.2 细胞计数法 |
| 2.3.3 脐血的采集 |
| 2.3.4 造血干细胞的分离 |
| 2.3.5 脐血造血干细胞的传代培养 |
| 2.4 小结 |
| 3 脐血造血干细胞联合玻璃化保护剂特性的研究 |
| 3.1 概述 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验装置 |
| 3.2.2 实验药品及试剂 |
| 3.2.3 联合玻璃化保护剂的配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 联合玻璃化保护剂渗透压值的测定 |
| 3.3.2 降温速率对联合玻璃化保护剂玻璃化形成能力的影响 |
| 3.3.3 复温速率对联合玻璃化保护剂反玻璃化情况的影响 |
| 3.3.4 联合玻璃化保护剂一步导入过程中损伤的研究 |
| 3.4 实验结果与讨论 |
| 3.4.1 联合玻璃化保护剂的渗透压值 |
| 3.4.2 降温速率对联合玻璃化保护剂玻璃化形成能力的影响 |
| 3.4.3 复温速率对联合玻璃化保护剂反玻璃化情况的影响 |
| 3.4.4 联合玻璃化保护剂一步导入过程所造成的损伤 |
| 3.5 小结 |
| 4 脐血造血干细胞联合玻璃化保护剂导入洗脱过程的优化研究 |
| 4.1 概述 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验装置 |
| 4.2.2 实验药品及试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 联合玻璃化保护剂导入过程的优化 |
| 4.3.2 联合玻璃化保护剂洗脱过程的优化 |
| 4.3.3 洗脱后细胞悬液渗透压值的测定 |
| 4.4 实验结果与讨论 |
| 4.4.1 五步导入每步之间最佳平衡时间的确定 |
| 4.4.2 五步洗脱每步之间最佳平衡时间以及海藻糖添加浓度的确定 |
| 4.4.3 洗脱后细胞悬液的渗透压值 |
| 4.5 小结 |
| 5 脐血造血干细胞玻璃化低温保存过程的初步研究 |
| 5.1 概述 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 实验装置 |
| 5.2.2 实验药品及试剂 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 降温速率对玻璃化后细胞活率的影响 |
| 5.3.2 复温速率对玻璃化后细胞活率的影响 |
| 5.3.3 脐血造血干细胞的玻璃化低温保存 |
| 5.3.4 玻璃化低温保存和慢速冻存的比较 |
| 5.4 实验结果与讨论 |
| 5.4.1 降温速率对玻璃化后细胞活率的影响 |
| 5.4.2 复温速率对玻璃化后细胞活率的影响 |
| 5.4.3 脐血造血干细胞的玻璃化低温保存 |
| 5.4.4 玻璃化低温保存与慢速冻存的比较 |
| 5.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录A 英文缩略语 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 |
| 致谢 |
（8）当归多糖对造血细胞抗冷冻损伤及冷冻损伤的可恢复性研究（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 论文正文：当归多糖对造血细胞抗冷冻损伤及冷冻损伤的可恢复性研究 |
| 第一部分 当归多糖对脐血造血细胞抗冷冻损伤的作用研究 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 5 参考文献 |
| 第二部分 当归多糖对脐血造血细胞冷冻损伤的可恢复性研究 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 5 参考文献 |
| 全文结论 |
| 文献综述 |
| 硕士期间发表的文章 |
| 致谢 |
（9）脐带血冷冻保存为孩子健康提供保障（论文提纲范文）
| 1 脐带血移植的意义 |
| 2 脐带血收集、保存的过程 |
| 3 脐带血的深低温冻存 |
| 3.1 冷冻保护剂及降温速率对脐血保存的影响 |
| 3.2 脐带血冷冻保存存技术 |
| 4 目前我国脐血库的概况 |
四、脐血造血细胞的冷冻保存方法的比较（论文参考文献）
- [1]脐血库造血干细胞冻存方法的研究现状[J]. 韩洪祯. 北京医学, 2016(06)
- [2]1727份公共库脐带血的质量分析——附23份库存脐带血干细胞解冻质控分析[J]. 王秋实,马良艳,张晋,佟海侠,王殿昌,段小晶,吴思梦,袁哲,王哲,刘学勇. 中国输血杂志, 2014(12)
- [3]深低温冷冻保存对脐血细胞的影响及机制[J]. 李昕,陈方平,蒋铁斌,王二华,刘竞. 中南大学学报(医学版), 2013(07)
- [4]当归多糖对脐血造血细胞的抗冷冻损伤作用[J]. 关雪晶,杨慧,张雁,吴宏. 第四军医大学学报, 2009(22)
- [5]当归多糖对脐血造血细胞冷冻损伤的可恢复性研究[J]. 杨慧,吴宏. 中草药, 2008(11)
- [6]脐血干细胞玻璃化保存过程的研究[D]. 李一鸣. 大连理工大学, 2008(08)
- [7]玻璃化法低温保存脐血造血干细胞的研究[D]. 刘铭彦. 大连理工大学, 2007(02)
- [8]当归多糖对造血细胞抗冷冻损伤及冷冻损伤的可恢复性研究[D]. 杨慧. 重庆医科大学, 2007(02)
- [9]脐带血冷冻保存为孩子健康提供保障[J]. 林小娟,姜俊芬,韩伟. 制冷技术, 2007(01)
- [10]深低温冻存对脐血单个核细胞免疫特性影响的研究[A]. 孟凡会,田青武,曹永献,刘忠强,孙波,赵洪国. 第五届全国低温生物医学及器械学术大会会议论文集, 2006