一、冷哮丸对动物祛痰作用的影响（论文文献综述）
唐璇,佟琳,郭非非,唐仕欢,杨洪军[1]（2020）在《基于TCMATCOV平台的常用经典名方治疗新型冠状病毒肺炎潜在作用分析》文中进行了进一步梳理随着新型冠状病毒肺炎（coronavirus disease 2019,COVID-19）疫情全球暴发,筛选有效药物成为当今研究的重点,而经典名方的筛选成为药物研发的方向之一。该研究在整理国家及省市发布的新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案的基础上,分析诊疗方案中的经典名方应用情况,进一步探讨其对COVID-19疾病重症期网络的扰动影响,选取代表方剂进行核心靶点筛选以及基因富集分析,从而揭示其作用机制。该研究整理得到68首经典名方,其中,出现频次10次及以上的共13首,包括麻杏石甘汤、银翘散、升降散、达原饮、宣白承气汤等。在此基础上,运用新型冠状病毒肺炎药效预测分析平台（TCMATCOV平台）对涉及的经典名方进行网络扰动计算,根据预测结果得到68首经典名方对COVID-19疾病网络稳健性的扰动评分,以蛋白质相互作用置信分数分别为0.4,0.5和0.6的平均扰动总分进行由大至小排列。得分17分以上的有7首,13分以上的有50首,其中,得分前3名的分别为甘露消毒丹（18.19）、冷哮丸（17.74）、麻杏石甘汤（17.62）。进一步对此3首方剂进行作用靶点挖掘后发现,COVID-19特异性因子Ccl2,IL10,IL6和TNF均为3首方剂的作用靶点。经过核心靶点的生物过程富集分析发现3首方剂对于COVID-19重症期可能通过影响细胞与细胞黏附、细胞因子介导的信号通路、慢性炎症反应等免疫相关通路阻止疾病的发展。研究表明,TCMATCOV平台基于药物干扰的肺炎疾病网络稳健性的方法来评估不同方剂对于COVID-19疾病网络的扰动作用,进行潜在有效性预测,可为进一步的实验或临床验证提供参考。
姚奇志[2]（2017）在《五生饮水煎剂的有效成分含量测定和毒性试验研究》文中研究说明目的:1.探索五生饮水煎剂供试品的最佳制备方法;探索煎煮过程中包煎、离心工艺对乌头类生物碱含量的影响;对五生饮水煎剂中的三种单酯型乌头类生物碱的含量测定进行方法学考察;观察水煎剂中总乌头类生物碱在煎煮过程中的含量变化情况;观察低温防腐储藏条件对五生饮稳定性的影响。2.观察五生饮水煎剂的急性毒性反应,了解是否出现急性毒性反应及其作用剂量。通过30天亚急性毒性试验,观察其对大鼠毒性反应及剂量-反应关系,停药后是否出现延迟毒性。方法:1.采用HPLC对五生饮水煎剂供试品水提醇沉组、0.01%HCL乙醇溶液沉淀组、蒸干药典法组、乙醚萃取组进行含量测定,观察峰面积、波峰及拖尾因子;对水煎剂采用布包煎、离心工艺,观察30min、60min、90min、120min、150min不同时间点7种供试品波峰情况;采用HPLC法测定五生饮水煎剂中三种单酯型乌头类生物碱的含量,初步建立方法学考察;观察煎煮过程中Oh、0.5h、1h、1.5h时间点乌头类生物碱的含量变化情况;测定6个月内水煎剂中单酯型乌头类生物碱的含量。2.急性毒性试验:采用最大给药量法,单次口服五生饮水煎剂,40.5g生药/kg,相当于临床患者用量的96.4倍。按30ml/kg体重24h连续灌胃3次,间隔至少4h,观察给药期及给药后14天SD大鼠的外观、行为、精神、分泌物及大体脏器解剖病理变化。亚急性毒性试验:将128只SD大鼠分为空白、低、中、高剂量4组,每组雌雄各16只,雌雄各4笼。予以3.4g生药.kg-1.d-1、6.8g生药.kg-1.d-1、13.5g生药.kg-1.d-1不同剂量五生饮水煎液对SD大鼠进行连续30天给药,停药恢复28天,给药29天及恢复期结束,对每组每性别前2笼分别进行眼科、尿液检查,给药30天及恢复期结束,同样方法进行血常规、血生化、凝血、脏器指数及主要脏器病理切片检查。结果:1.乙醚萃取法制成的供试品与3种对照品相比,在20min、24min、26min左右处峰型对应且峰面积稳定;包煎、离心工艺未对水煎剂中生物碱成分产生影响;苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱可以作为五生饮水煎剂的含量测定指标;三种单酯型乌头类生物碱含量经历先轻微下降而后逐渐上升,双酯型乌头类生物碱含量逐渐下降,至1h时间点完全无法检测出;五生饮水煎剂在6个月内单酯型乌头类生物碱含量稳定。2.急性毒性试验中,未见大鼠死亡,受试大鼠3次给药后的外观、行为精神、对刺激的反应、分泌物、排泄物未见明显异常,水煎剂的最大给药量为40.5g生药/kg。亚急性毒性试验中,各给药组SD大鼠一般形态良好,体重呈平稳上升趋势,摄食量、眼科检查未见明显异常,给药29天高剂量组雄鼠SG值偏高,较溶媒对照组差异有统计学意义（P<0.05）;恢复期结束,高剂量组雌鼠SG值偏低,较溶媒对照组差异有统计学意义（P<0.05）。给药29天,低、中剂量组雌鼠尿pH值偏高,较溶媒对照组差异有统计学意义（P<0.05）;给药30天,低剂量组雌鼠血红蛋白浓度（HGB）和红细胞容积（HCT）偏低,较溶媒对照组差异有统计学意义（P><0.05）;恢复期结束,高剂量组雌鼠平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）偏低,较溶媒对照组差异有统计学意义（P<0.05）。恢复期结束,中剂量组雌鼠凝血酶原时间（PT）缩短,较溶媒对照组差异有统计学意义（P<0.05）。给药30天,高剂量组雌鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）偏高,较溶媒对照组差异有统计学意义（PP<0.05）;恢复期结束,低剂量组雌鼠血糖（GLU）偏低,较溶媒对照组差异有统计学意义（P<0.05）;给药30天,低剂量组雌鼠血尿素氮（Urea）偏高,较溶媒对照组差异有统计学意义（P<0.05）;恢复期结束,高剂量组雄鼠甘油三酯（TG）偏低,较溶媒对照组差异有统计学意义（P<0.05）。恢复期结束,高剂量组雄鼠血钾（K+）偏高,较溶媒对照组差异有统计学意义（P<0.05）。高剂量组雌鼠脾脏系数偏高,较溶媒对照组差异有统计学意义（P<0.05）。其余检测值与大鼠主要脏器病理切片未见明显异常。结论:1.选用低温乙醚萃取方法制备五生饮供试品;初步确定对生半夏、生川乌、生天南星布包煎,对水煎剂进行离心的初步工艺改良;HPLC测定五生饮水煎剂中三种乌头类生物碱的方法可靠,准确性良好;五生饮水煎剂在低温防腐条件下6个月内稳定性良好。2.急性毒性试验中,在24h内对SD大鼠予以40.5g生药/kg连续灌胃3次,试验阶段未见明显相关毒性反应。亚急性毒性试验中,所有个体数据均在背景范围内或无剂量相关依赖性,五生饮水煎剂对SD大鼠灌胃给药30天未见有明显毒性反应,五生饮水煎剂的无可见有害作用水平（NOAEL）为13.5g生药.kg-1.d-1。
刘芽青,宋洋,金伟,罗燕[3]（2017）在《张晓云教授应用礞石滚痰丸合射干麻黄汤治疗重症哮喘经验总结》文中认为重症哮喘是急诊科常见的急危重症之一,其病死率极高。中医认为宿痰是哮喘的核心病机,故清除宿痰是治疗哮喘之首要。然西医在痰液引流方面效果不甚理想,中医药在祛痰方面具有独特优势。张晓云教授治疗重症哮喘时,应用礞石滚痰丸合射干麻黄汤在清除宿痰方面取得了满意效果。对张晓云教授应用礞石滚痰丸合射干麻黄汤治疗重症哮喘的经验进行了总结。
冷宇[4]（2016）在《1、喘敏脱治疗哮喘主要药效学研究 2、新霉胺原料药的有机溶剂残留与水溶液稳定性研究》文中指出1、喘敏脱治疗哮喘主要药效学研究目的:自制喘敏脱是名老中医刘志海治疗小儿哮喘的多年临床经验方,目前自制喘敏脱的药效学研究尚无文献记载。方法:通过组胺引喘试验,气道内酚红渗出量的检测,耳肿胀实验,氨气引咳试验,大鼠足肿胀试验,五项试验对喘敏脱平喘、化痰、抗炎,止咳等药效做了初步的研究。结果:（1）喘敏脱能延长豚鼠哮喘的引喘潜伏期,延迟哮喘的发作。（2）喘敏脱能增加小鼠气道内酚红排出量。（3）喘敏脱能减轻小鼠耳水肿及大鼠足肿胀。（4）喘敏脱能延长鼠咳嗽的潜伏期,减少咳嗽次数。结论:喘敏脱具有较好的平喘,化痰,止咳和抗炎功效,其机制有待进一步深入研究。2、新霉胺原料药的有机溶剂残留与水溶液稳定性研究目的:本课题旨在通过新霉胺的有机残留与水溶液稳定性研究,为确定和提高新霉胺原料药产品质量,改进工艺,研究新霉胺的给药剂型奠定基础。方法:（1）通过查阅相关文献,确定色谱条件,包括气相柱的选择,实验温度的科学设置。进行方法学验证实验,确定实验的可靠性,然后带样检测,实验结果和《中国药典》相关规定比较,确定实验结果。（2）通过查阅相关文献,确定色谱条件,包括反相色谱柱的选择,实验条件的科学设置。通过方法学验证实验,再开始实验含量测定,确定实验的可靠性,然后带样检测,从p H对新霉胺稳定性的影响和经典恒温法预测新霉胺水溶液在室温的稳定性两个方面考察新霉胺的稳定性,得出结论。结果:（1）通过气相试验测得3批新霉胺样品中甲醇的残留量均低于限度,乙醇未检出,符合规定。（2）新霉胺在弱酸和弱碱环境中稳定,在强酸性环境中不稳定,容易降解,p Hm为9。新霉胺在水中的降解随温度的加快而加快,25℃下的t90为9.8h;在4℃条件下的为16.6h。
杨柏灿[5]（2016）在《论甘草之补》文中认为甘草的补益作用呈现出多样化的特点,源于甘草至甘至纯的特性,这是甘草配伍多样、应用广泛的关键。甘草补益作用不仅局限于补气,更包括补益五脏气血阴阳,其中主要侧重于养心复脉、养心安神的补心作用,补中益气、升阳举陷、健脾化积、健脾祛湿的补脾及补肺作用,补益肝肾者则较少。除此之外,甘草之补还体现在药味的合化反应,是辛甘化阳、酸甘化阴的代表药物。
王宏蕾[6]（2013）在《含反药配伍的甘遂半夏汤中甘遂不同入药方式对癌性腹水大鼠模型宜忌条件探讨》文中研究表明中药“十八反”从古至今一直被认为是中药配伍的禁忌。十八反源自《神农本草经》,经过不断转引,由张从正概括为“十八反歌诀”。“十八反歌”成为了临床用药的禁忌,医疗工作者一般在临床应用中更不敢越雷池一步。然而,古今医家不乏应用反药,达到速除顽疾的病例。《金匮要略》治留饮之甘遂半夏汤就是其中之一。本课题模拟临床患者腹水状态,采用癌性腹水模型大鼠,探讨含反药组合的甘遂半夏汤中甘遂不同入药方式对于机体的生物效应。从临床角度,探索甘遂不同入药方式与甘草配伍的致毒、增毒、减效或增效的特征,为临床用药提供理论支撑,进一步丰富中药十八反配伍禁忌理论,指导临床用药。将甘遂与甘草的不同炮制品种进行配伍组合,然后将四种组合中的甘遂分为甘遂同其他药物入汤剂煎煮和甘遂单独研末后入汤剂两种入药方式,共计八组中药组,检测甘遂不同入药方式对于癌性腹水大鼠的利水功能、肝功能、肾功能、心功能的相关指标,观察甘遂不同入药方式对于癌性腹水大鼠的机体影响。本实验得出的主要结果如下：1、甘遂半夏汤（生甘草醋甘遂组）：药效：两中药组血中钾离子、醛固酮含量较模型组显着降低（p<0.05）。生甘草醋甘遂汤组AQP-1表达较模型组显着升高（P<0.05）,且较研末组显着升高（P<0.05）。毒性：免疫器官：胸腺指数生甘草醋甘遂末组与模型组相比显着降低（p<0.05）,与甘遂入汤剂组相比也显着降低（p<0.05）。肝功能：生化指标各组无显着差异。肝病理切片对比：呋塞米组>模型组>研末组>汤剂组。肾功能：模型组、生甘草醋甘遂末组、呋塞米组VA较空白组显着升高（P<0.05）。汤剂组较空白组无显着差异。模型组、生甘草醋甘遂末组、呋塞米组Cre较空白组显着升高（P<0.05）；生甘草醋甘遂汤组较模型组显着降低（P<0.05）。各组Ure较空白组显着升高（P<0.05）；两组中药组较模型组显着降低（P<0.05）。肾病理切片对比：呋塞米组>模型组>研末组>汤剂组。心功能：心指数：模型组、生甘草醋甘遂末组、呋塞米组较空白组显着降低（p<0.05）；生甘草醋甘遂汤组较模型组显着升高（p<0.05）；两中药组对比有显着性差异（p<0.05）,研末组较汤剂组显着降低（p<0.05）。心脏病理切片对比：各组无明显差异。2、甘遂半夏汤（生甘草生甘遂组）：药效：血钾：两组中药组较模型组显着降低（p<0.05）。ALD：生甘草生甘遂末组较模型组显着降低（p<0.05）。腹膜水通道蛋白-1：生甘草生甘遂末组较模型组显着升高（P<0.05）；两给药组之间对比有显着性差异（P<0.05）,生甘草生甘遂末组较高。毒性：肝功能：肝指数：生甘草生甘遂末组肝指数较模型组显着升高（p<0.05）。AST：模型组、生甘草生甘遂末组、呋塞米组较空白组明显升高（p<0.05）。ALT：生甘草生甘遂汤组较模型组显着降低（p<0.05）。A1b：模型组、生甘草生甘遂末组及呋塞米组与空白组对比显着降低（p<0.05）。肝病理切片对比：呋塞米组>模型组>研末组>汤剂组。肾功能： VA：模型组、生甘草生甘遂末组、呋塞米组较空白组显着升高（P<0.05）。Cre：模型组、生甘草生甘遂末组、呋塞米组较空白组显着升高（P<0.05）；生甘草生甘遂汤组较模型组显着降低（P<0.05）。Ure：模型组、生甘草生甘遂汤组、呋塞米组较空白组显着升高（P<0.05）；两组中药组较模型组显着降低（P<0.05）。肾病理切片对比：呋塞米组>模型组>研末组>汤剂组。心功能：心指数：两组中药组与模型组相比显着升高（P<0.05）。LDH：模型组及生甘草生甘遂汤组较空白组显着升高（P<0.05）,生甘草生甘遂末组较汤剂组显着降低（P<0.05）。心病理切片对比：各组无明显差异。3、甘遂半夏汤（炙甘草醋甘遂组）：药效血钾：两组中药组较模型组显着降低（p<0.05）。ALD：两组中药组较模型组显着降低（p<0.05）。AQP-I：炙甘草醋甘遂汤组较模型组显着升高（P<0.05）；两给药组之间对比有显着性差异（P<0.05）,炙甘草醋甘遂汤组AQP-1值较高。毒性肝功能：肝指数：炙甘草醋甘遂汤组较模型组显着升高（p<0.05）。AST：模型组、炙甘草醋甘遂汤组、呋塞米组较空白组显着升高（p<0.05）。ALT：炙甘草醋甘遂末组较模型组显着降低（p<0.05）。Alb：炙甘草醋甘遂末组较模型组显着降低（p<0.05）。肝病理切片对比：呋塞米组>模型组>汤剂组>研末组。肾功能：VA：模型组、炙甘草醋甘遂汤组、呋塞米组较空白组显着升高（P<0.05）；炙甘草醋甘遂末组较汤剂组显着降低（P<0.05）。Ure：两组中药组较模型组显着降低（P<0.05）。肾病理切片对比：呋塞米组>模型组>研末组>汤剂组。心功能：心指数：模型组、炙甘草醋甘遂末组、呋塞米组较空白组显着降低（P<0.05）;炙甘草醋甘遂汤组较模型组显着升高（P<0.05）；炙甘草醋甘遂末组较汤剂组显着降低（P<0.05）。CK：炙甘草醋甘遂末组较模型组显着降低（P<0.05）。LDH：模型组及炙甘草醋甘遂汤组较空白组显着升高（P<0.05）,炙甘草醋甘遂末组较模型组显着降低（P<0.05）,较汤剂组显着降低（P<0.05）。心病理切片对比：各组无明显差异。4、甘遂半夏汤（炙甘草生甘遂组）：药效血钾：炙甘草生甘遂汤组较模型组显着降低（p<0.05）。ALD：模型组、炙甘草生甘遂末组、呋塞米组较空白组显着升高（p<0.05）,两组中药组较模型组显着降低（p<0.05）。毒性免疫器官：胸腺指数：炙甘草生甘遂末组较汤剂组显着降低（p<0.05）。肝功能：AST：模型组、炙甘草生甘遂末组、呋塞米组较空白组明显升高（p<0.05）。ALT：炙甘草生甘遂末组较模型组显着降低（p<0.05）。Alb：炙甘草生甘遂末组与模型组相比显着降低（p<0.05）,与汤剂组也显着降低（p<0.05）。Alp：模型组、炙甘草生甘遂末组、呋塞米组较空白组显着降低（p<0.05）,炙甘草生甘遂末组较模型组显着降低（p<0.05）,较汤剂组也显着降低（p<0.05）。肝病理切片对比：呋塞米组>模型组=研末组>汤剂组。肾功能：Cre：炙甘草生甘遂汤组较模型组显着降低（P<0.05）。Ure：炙甘草生甘遂汤组较模型组显着降低（P<0.05）。肾病理切片对比：呋塞米组>模型组=研末组>汤剂组。心功能：心指数：模型组、炙甘草生甘遂末组、呋塞米组较空白组显着降低（p<0.05）；汤剂组较模型组显着升高（p<0.05）,较研末组也显着升高（p<0.05）。心脏病理切片对比：各组无明显差异。通过以上实验结果,得出以下结论：1、甘遂半夏汤（生甘草醋甘遂组）：不论甘遂半夏汤中甘遂入汤剂煎煮还是研末入药,对于癌性腹水模型大鼠有一定的利水作用,其中甘遂入汤剂组通过提高AQP-1的表达,可能有较好的利水作用。甘遂研末组对于免疫器官可能有更进一步的损伤。两组中药组对于大量腹水所致肝肾损伤可能有一定的保护作用,汤剂组这种作用较显着。2、甘遂半夏汤（生甘草生甘遂组）：甘遂研末组通过提高AQP-1的表达及降低醛固酮含量,可能有较好的利水作用。甘遂入汤剂煎煮组对于大量腹水所致肝、肾损伤可能有一定的保护作用,甘遂研末组对癌性腹水所致心肌可能损伤有一定修护作用。3、甘遂半夏汤（炙甘草醋甘遂组）：不论甘遂半夏汤中甘遂入汤剂煎煮还是研末入药,对于癌性腹水模型大鼠可能都有一定的利水作用,其中甘遂入汤剂组通过提高AQP-1的表达,可能有较好的利水作用。两组中药组对于大量腹水所致肝、肾损伤可能有一定的保护作用,醋甘遂研末组有较好的保护心功能的作用。4、甘遂半夏汤（炙甘草生甘遂组）：不论甘遂半夏汤中甘遂入汤剂煎煮还是研末入药,对于癌性腹水模型大鼠可能都有一定的利水作用,其机制是通过降低醛固酮含量,促进腹水从尿液排出,汤剂组较研末组效佳。生甘遂研末组对于免疫器官可能有更进一步的损伤。汤剂组对于大量腹水所致肝肾损伤可能有一定的保护作用。两组对心功能的恢复都有一定药效。
徐丽[7]（2012）在《天贝汤对支气管哮喘大鼠气道炎症和气道重塑的影响的实验研究》文中研究表明目的：支气管哮喘（bronchial asthma，简称哮喘）是以气道炎症、气道重塑、可逆性气道阻塞、气道高反应性为主要特征的由多种因素引起的一种气道慢性炎症性疾病，是由嗜酸性粒细胞、肥大细胞和T淋巴细胞等多种炎症细胞参与的一种呼吸系统疾病。近二十年来，随着工业化和全球污染的加剧，在世界范围内哮喘的发病率和死亡率呈逐年上升的趋势，全球患者约3亿左右，严重威胁着人们的身体健康和生存质量。加之哮喘病程绵长难愈，给社会带来了严重的经济负担。所以，哮喘已成为严重的公共卫生问题而引起了世界各国的极大关注。到目前为止，全身或局部应用糖皮质激素仍然是治疗哮喘的首选，但长期应用副作用明显。中医中药防治哮喘应该受到重视，特别是在减少副作用，预防复发等方面与西药比较有一定的优势。本文还概述了历代中医学家对哮喘的病名、病因病机、辨证施治的认识，对中药及中医药治疗哮喘的现代临床与机理研究作了全面总结。阐述了哮喘的现代流行病学、病因病机等。天贝汤是导师郭振武教授的临床经验方，具有宣肺降气、化痰平喘之功。本课题在建立大鼠支气管哮喘模型的基础上，予天贝汤进行干预，通过对本动物实验的观察，选择与哮喘发病机制相关的多项指标，探讨天贝汤对支气管哮喘大鼠气道炎症和气道重塑的作用和机制，为中医中药临床治疗支气管哮喘提供理论依据。材料与方法：72只健康雄性SPF级Wistar大鼠，体重240±20g，实验动物许可证号SCXK（京）2009-0004，随机分为正常对照组、哮喘模型组、天贝汤高剂量组（以下简称为高剂量组）、天贝汤中剂量组（以下简称为中剂量组）、天贝汤低剂量组（以下简称为低剂量组）、小青龙对照组（以下简称为小青龙组），每组12只。天贝汤组成：麻黄、茯苓、清半夏、川贝、天麻等组成，小青龙胶囊组成：麻黄、白芍、细辛、干姜、炙甘草、桂枝、半夏、五味子。将上方加水煎煮三次合并后过滤。低温（4℃）放置备用。天贝汤高、中、低剂量组，给药剂量分别是：高剂量组9ml/kg,中剂量组4.5ml/kg，低剂量组2.25ml/kg，小青龙组给药剂量0.972g/kg。从第15天开始给药，直至处死，每日1次灌胃，连续6周。各组参照吕国平等介绍的方法，分为致敏和激发两步。除正常对照组外，实验第1d和第8d共2次每只大鼠腹腔注射新鲜配制的含10%卵蛋白的生理盐水1ml（内含卵蛋白100mg，氢氧化铝100mg和灭活百日咳杆菌6×109个）致敏，致敏15d后各组灌胃后1小时后将大鼠放入不完全封闭的雾化吸入箱内开始激发，用超声雾化器喷入含1%卵蛋白激发，每次雾化20分钟，每日1次，激发6周，激发后以大鼠烦躁、打喷嚏、咳嗽、抓鼻、大小便失禁、呼吸幅度加深及喘促发作、紫绀等哮喘发作症状，认为哮喘造模成功。正常对照组以生理盐水代替卵蛋白进行腹腔注射及雾化吸入，雾化流量及时间同前。第一部分天贝汤对支气管哮喘大鼠支气管病理组织学观察末次喷雾激发后18-24h内予乙醚麻醉动物，以固定板固定后打开并暴露胸腔，开胸结扎，剥离肺组织，取出肺组织，于4℃4%多聚甲醛固定，脱水、包埋、切片，HE染色观察。第二部分各组大鼠体重和被激发时的表现的变化第三部分天贝汤对支气管哮喘大鼠肺组织核因子-κB（NF-κB）的影响核因子-κB（NF-κB）是一种具有多种功能的核转录因子，具有广泛的生物学活性，不仅参与哮喘的气道炎症反应，还参与哮喘气道重塑的过程。动物分组、模型建立、用药情况及数据统计处理同前。动物麻醉完全后，取肺组织于4%多聚甲醛固定，脱水、包埋、切片，行免疫组织化学ABC法染色。一抗选用兔抗p52（N F-кB的一个亚单位）多克隆抗体（武汉博士德生物工程公司）稀释度1∶100;用SABC法试剂盒进行操作,操作步骤按试剂盒说明书进行。主要操作步骤如下：石蜡切片常规脱蜡脱水，3%H2O2溶液灭活内源性过氧化物酶，热修复1h。滴加山羊封闭血清，湿盒孵育，加入一抗（1:100稀释）湿盒孵育1h，4℃冰箱内过夜，PBS漂洗，加入生物素化二抗37℃孵育，PBS漂洗5min，3次。⑧滴加ABC复合物37℃孵育30min，PBS漂洗5min，3次。⑦二氨基联苯胺（DAB）光镜下显色5-15min，终止呈色反应。苏木精衬染，常规裱片、封片和观察。计算机图象处理软件半定量测定NF－κB表达。第四部分天贝汤对支气管哮喘大鼠血清中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的影响。气道重塑是慢性哮喘反复发作的重要病理生理基础，它与哮喘肺功能损害及气道高反应性密切相关。细胞外基质（ECM）的沉积和降解的失衡是导致气道壁结构异常、间质增生和肺实质破坏的重要原因，ECM主要由基质金属蛋白酶（MMPs）来降解,其中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）是锌依赖性蛋白酶，MMP-9催化集团区含有3个重复的类Ⅱ型纤维连接蛋白结合区，决定了它对明胶和弹力纤维的底物特异性，主要降解Ⅳ型以及Ⅴ型胶原。近来研究表明MMP-9在支气管哮喘患者的气道炎症和气道重塑中发挥重要作用。动物分组、模型建立、给药情况及数据统计处理同第一部分。动脉血血清中MMP-9、TIMP-1含量检测：采用双抗体夹心法ABC-ELISA法测定MMP-9、TIMP-1含量，具体方法如下。①建立标准曲线：设标准孔8孔，每孔中加入样品稀释液100μl，第一孔加入标准品100μl，混匀后用加样器吸出100μl，移至第二孔，如此反复行对倍稀释至第七孔，最后，从第七孔中吸出100μl弃去，使之体积为100μl，第八孔为空白对照。②加样：待测样品孔中每孔加入待测样品100μl。③将反应板充分混匀后放置37℃120分钟。④洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。⑤每孔中加入第一抗体工作液50μl，将反应板充分混匀后置37℃60分钟。⑥用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。⑦每孔加酶标抗体工作液100μl，将反应板置37℃60分钟。⑧用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次。每孔加入底物工作液100μl，置37℃暗处反应5-10分钟。每孔加入1滴终止液混匀，在492nm处测吸光值。以标准品2000、500、250、125、62、31、0ng/ml之OD值在半对数纸上作图，画出标准曲线，根据样品OD值在该标准曲线上查出MMP-9的含量，TIMP-1方法同MMP-9。第五部分天贝汤对支气管哮喘大鼠肺组织表面相关凋亡基因蛋白Fas和Bcl-2表达的影响动物分组、模型建立、用药情况及数据统计处理同前。动物完全麻醉后，取肺组织，加入Trizol充分匀浆，提取总RNA，采用RT-PCR法检测各组大鼠肺组织中相关凋亡基因蛋白Fas和Bcl-2表达的变化。统计学方法：数据采用均数±标准差（—x±s）表示，用SPSS统计软件处理，统计方法采用单因素方差分析及LSD检验。显着差异水平以0.05和0.01为标准。结果：1.天贝汤对哮喘大鼠支气管-肺组织病理学的影响肺组织肉眼形态观察:正常对照组:肺组织颜色淡红，肺组织柔软而富有弹性，表面光滑。哮喘模型组:肺组织过度膨胀，部分肺组织颜色变深，呈暗红色，质地稍硬，表面有呈颗粒状的瘀点。天贝汤各剂量组和小青龙组肺组织颜色稍暗，膨胀不明显，无瘀斑瘀点。光镜观察：正常对照组：大鼠支气管内及其周围无明显的炎性细胞浸润，支气管壁完整光滑，细胞排列规整，平滑肌层厚度正常，支气管粘膜规整，管腔内无脱落上皮细胞。模型组：支气管管壁及伴行的动脉周围有大量嗜酸性粒细胞、单核细胞及淋巴细胞为主的炎性细胞浸润，管腔内容物增多，微血管渗漏，可见管腔内炎性分泌物增多，有的小支气管甚至被粘液栓及炎性细胞所堵塞。杯状细胞增生，气道上皮指状增生，平滑肌层增厚，排列紊乱，支气管粘膜水肿增厚，上皮脱落，上皮下纤维化，支气管粘膜皱壁增多、延长。高剂量组：嗜酸性粒细胞及淋巴细胞等炎性细胞浸润明显减少，几乎消失，水肿明显消失，管壁和平滑肌层厚度接近正常对照组,逐渐恢复，支气管粘膜规整，支气管管腔内偶见脱落上皮细胞及粘液。中剂量组：嗜酸性粒细胞及淋巴细胞等炎性细胞浸润有所减少，管壁和平滑肌层厚度有所减少，气管管壁结构层次清楚，支气管管腔内偶见脱落上皮细胞及黏液，管腔渗出物逐渐吸收。低剂量组：支气管周围嗜酸性粒细胞及其他炎性细胞浸润略微减少，管壁和平滑肌层厚度略减少，管腔内偶见脱落上皮细胞及黏液。小青龙组：黏膜下层见轻度充血水肿及少量炎症细胞，管腔内见炎性渗出物，粘膜增生，支气管腔内少量脱落细胞和粘液。2.各组大鼠体重和被激发时的表现的变化体重：激发后各组大鼠体重均增。空白组大鼠体重与其余各组有差异，高于其余各组（p<0.01）；高、中、低剂量组，小青龙组及模型组之间无统计学意义（p>0.05）。被激发时的表现：空白组大鼠表现活泼好动，动作灵敏，毛色光滑，呼吸平稳。模型组大鼠在吸入OVA后不久即出现过敏症状如：躁动不安，搔抓、舔肢体、打喷嚏等，继而大鼠反应迟钝，出现呼吸急促，呼吸困难（明显的腹式呼吸），伴轻度紫绀，部分大鼠可闻及响亮的呼气相喘鸣音和不规则呼吸。与哮喘模型组比较，高、中剂量组症状减轻，无呼吸急促，无紫绀，无呼气相喘鸣音；低剂量组和小青龙组呼吸稍急促，无紫绀，喘鸣音减轻。在高中低剂量组比较中，高剂量组较低剂量组比较有明显好转，没有呼吸急促和呼吸困难症状，大鼠毛色光泽较好，精神也较好。3.对哮喘大鼠支气管NF－κB表达的影响与正常对照组比较，模型组NF－κB表达明显增加，差异具有显着性意义（P<0.01）。与模型组比较，NF－κB在各治疗组阳性表达减少，高剂量组降低最明显（P<0.01），其次为中剂量组、小青龙组、小剂量组；与小青龙组对比，高剂量组NF－κB含量低，二者差异具有显着意义﹙p<0.01﹚。4.对支气管哮喘大鼠动脉血清中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、组织基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的影响。与正常对照组相比，模型组大鼠MMP-9、TIMP-1含量明显升高，差异具有显着性意义﹙p<0.01﹚，证明哮喘模型建立成功；与模型组比较，各治疗组MMP-9含量均降低，高剂量组降低最明显﹙p<0.01﹚，其次为中剂量组、小青龙组，低剂量组次之。与小青龙组相比，高剂量组含量低，二者差异具有显着意义﹙p<0.01﹚。5.对支气管哮喘大鼠相关基因蛋白Fas mRNA、Bcl-2mRNA表达的影响。与正常对照组比较，模型组Bcl-2mRNA表达明显增多（P﹤0.01），Fas mRNA表达明显减少﹙p<0.05﹚；与模型组比较，各治疗组Bcl-2mRNA表达减少，高剂量组减少最明显﹙p<0.01﹚，其次为中剂量组、小青龙组、小剂量组，与小青龙组比较高、中、低剂量组无统计学意义；与低剂量组比较，高剂量组Bcl-2mRNA表达强度低，二者差异具有显着意义﹙p<0.05﹚。与模型组比较，Fas mRNA在各治疗组表达有所增多,高剂量组增多最明显﹙p<0.05﹚，其次为中剂量组、小青龙组、小剂量组，但均无统计学意义；与小青龙组比较高、中、低剂量组均无统计学意义。与低剂量组比较，高、中剂量组、小青龙组均无统计学意义。结论：1.哮喘发病与痰、风等致病因素有关。风盛痰阻、气道挛急是哮喘发作的主要病机，治疗以宣肺降气、化痰平喘及调理脏腑并举。2.天贝汤具有宣肺降气、化痰平喘及调理脏腑的作用，对哮喘有确切的治疗作用。3天贝汤治疗哮喘的作用机制3.1对气道重塑的影响。对支气管-肺组织病理学观察结果显示，模型组支气管粘膜上皮部分脱落，黏膜下层充血水肿，嗜酸性粒细胞等炎细胞浸润，黏膜下平滑肌显着增生肥厚。与正常对照组相比，模型组出现气道重塑。经天贝汤治疗后，气管管壁结构逐渐恢复，炎症明显减轻，水肿明显消失，增生的平滑肌细胞基本恢复正常。提示天贝汤具有抑制哮喘豚鼠气道重塑，从而发挥平喘作用。其机制可能是通过减少气道EOS浸润，减少炎症介质分泌、释放，减轻炎性细胞渗出，抑制杯状细胞和平滑肌细胞增生，从而减轻气道炎症反应，抑制气道重塑。3.2天贝汤能降低支气管哮喘大鼠肺组织中NF－κB的含量，从而从细胞因子角度解释天贝汤对气道炎症的抑制作用。3.3天贝汤抑制气道重塑和细胞外基质沉积的作用可能与其降低动脉血清中MMP-9、TIMP-1含量有关。3.4天贝汤抑制气道炎症和气道重塑的作用可能与其降低肺组织中Bcl-2mRNA表达，增加Fas mRNA表达有关。4.天贝汤对实验性哮喘大鼠的平喘作用，具有剂量依赖关系，并且部分优于经典方剂小青龙汤，其机制有待于进一步深入研究。天贝汤通过多途径、多层次、多靶点抑制气道炎症和气道重塑，具有广阔的应用前景。
林光常[8]（2011）在《冷哮丸对哮喘豚鼠模型作用机制的实验研究》文中指出1目的本课题以卵蛋白（OVA）致敏和攻击复制豚鼠哮喘模型,探讨冷哮丸对豚鼠哮喘模型在乙酰胆碱（Ach）激发后所致呼气阻力和气管螺旋条对组织胺反应性的影响；外周血和肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸性粒细胞（EOS）数量、肺组织形态学观察；以及对血清免疫球蛋白E（IgE）,血清和BALF中IL-4、IL-5、一氧化氮（NO）、内皮素-1（ET-1）等指标的影响,从免疫反应、气道炎症反应、气道重塑和气道反应性等方面探讨该方的平喘作用机制。2方法2.1材料2.1.1实验动物：普通级豚鼠60只,雄性,体重250±50g,湖北省实验动物研究中心提供,实验动物许可证号：SCXK（鄂）2008—0005。2.1.2药剂制备：冷哮丸由麻黄、生川乌、细辛、蜀椒、白矾、牙皂、半夏曲、陈胆星、杏仁、甘草、紫菀、款冬花共12味中药组成,按1：1：1：1：1：1：1：1：1：1：2：2比例,加10倍量的水煎煮2h,医用纱布过滤,滤渣加入6倍量的水煎煮1h,过滤,两次滤液合并,低温放置24h,过滤并水浴浓缩至原生药含量1.6g/m1,置低温冰箱中（4℃）备用。由湖北中医药大学国医堂制剂室制备。地塞米松片,0.75mg/片。临用时以蒸馏水稀释至相应药物浓度灌胃。剂量：地塞米松1mg/g;中药冷哮丸小剂量组4mg/g;中药冷哮丸中剂量组8mg/g;中药冷哮丸大剂量组16mg/g。2.1.3主要试剂：卵白蛋白（OVA）, Sigma公司；乙酰胆碱,上海科丰化学试剂责任公司；磷酸组胺,上海喜润化学工业有限公司；IgE放免试剂盒,北方生物技术研究所生产；NO测定试剂盒,南京建成生物工程研究所；豚鼠IL-4试剂盒,豚鼠IL-5试剂盒,深圳晶美生物工程有限公司；ET-1放免试剂盒,北京东亚放射免疫所。2.1.4主要仪器：JSC-OK双头式多功能型超声波雾化器；RJE压力换能器；LMS-2B型二道生理记录仪；DH-140型动物人工呼吸机；ThermoLabsystems Multiskan MK3酶标分析仪；722型光栅分光光度计；Olympus BX50F-3双显微镜（含自动照相装置NikonE990）；VEX380型-80℃低温冰箱。2.2方法2.2.1动物模型复制以卵蛋白致敏和攻击复制豚鼠哮喘模型。实验第1天,配制100g/L卵蛋白生理盐水,豚鼠腹腔注射1ml卵蛋白生理盐水以致敏；第15天将致敏豚鼠置于15升透明玻璃罩内,给予1%卵蛋白生理盐水雾化吸入。以后每隔24h以1%卵蛋白生理盐水诱喘,共4次。正常对照组用同样方法以等量生理盐水进行腹腔注射及雾化吸入。2.2.2动物分组将豚鼠随机分为6组：①正常对照组,②哮喘模型组,③西药对照组（地塞米松治疗组）,④冷哮丸大剂量组,⑤冷哮丸中剂量组,⑥冷哮丸小剂量组,每组10只。2.2.3实验检测项目2.2.3.1实验一冷哮丸对哮喘豚鼠气道反应性的影响。①一般情况观察：包括各组豚鼠的行为、饮食、体重、排便、皮毛及死亡等情况。②乙酰胆碱（Ach）支气管激发试验：于第23 d治疗结束后2h,用3%戊巴比妥钠30 mg/kg腹腔注射麻醉,仰面固定于木板上,切开颈部皮肤暴露颈静脉及气管,用静脉留置针行颈外静脉穿刺置管,行气管切开、气管插管,连DH-140型动物人工呼吸机行辅助通气。每只豚鼠分别给予成倍增加的乙酰胆碱（0、12.5、25、50、100、200μg/kg）,每次进液量200μ1,两个相邻给药点间隔5min。采用AniRes2003动物肺功能分析系统连续动态测定呼气阻力（expiratory resistance, Re）,计算各给药时间点的Re与基础的Re比值（以百分数表示）,以Re的变化代表气道反应性。③组织胺气道反应性测定：豚鼠麻醉后,纵向剪开颈部皮肤及皮下组织,暴露气管,取中段气管软骨环,剪开形成3 mm宽的气管螺旋条。用细线将螺旋条一端固定于浴槽底部,另一端连与压力换能器。对螺旋条施以2g的起始张力,平衡1h后,间隔2-3min依次加入10-6-10-3mol/L的组织胺进行刺激,连续记录气管螺旋条的张力变化。2.2.3.2实验二冷哮丸对哮喘豚鼠外周血和BALF中EOS数量及肺组织形态学的影响。于第23d麻醉动物,分离颈动脉,取颈动脉血lml作白细胞分类和EOS计数。其余全血离心,取血清,放置-20℃低温冰箱中保存待检。对采血后的豚鼠进行肺泡灌洗,并回收肺泡灌洗液（BALF）,瑞氏染色后行EOS计数,肉眼及光镜观察豚鼠肺组织形态学变化。2.2.3.3实验三、四、五冷哮丸对哮喘豚鼠血清总IgE、血清和BALF中NO、IL-4、IL-5、ET-1的影响。按豚鼠IgE、NO、IL-4、IL-5、ET-1等相关试剂盒说明进行操作测定。2.3统计学方法数据均以x±s表示,采用SPSS17.0统计软件进行数据处理,组间数据比较采用方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。3结果3.1实验一：冷哮丸对哮喘豚鼠气道反应性的影响3.1.1一般情况结果：正常对照组豚鼠无任何不适反应,平均体重增加,毛色光泽。哮喘模型组豚鼠普遍精神较差,活动减少,反应迟钝,进食及饮水量明显下降,毛色失去光泽,出现不同程度的呼吸次数增加,张口等呼吸困难症状,在整个喂养过程中体重增加不明显。哮喘模型组1只豚鼠哮喘严重发作经抢救无效死亡。各用药组豚鼠情况均较哮喘模型组明显改善。3.1.2各组豚鼠在不同浓度Ach激发后Re增长率比较：在Ach浓度为50μg/kg、100μg/kg、200μg/kg时,哮喘模型组Re的增长率与正常对照组比较,差异有显着统计学意义（P<0.01）。在Ach浓度为50μg/kg、100μg/kg、200μg/kg时,地塞米松治疗组、冷哮丸大、中、小剂量组与哮喘模型组Re的增长率比较,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。地塞米松治疗组与冷哮丸大剂量组之间,及其与正常对照组之间Re的增长率比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。3.1.3各组豚鼠气管螺旋条对组织胺的反应性比较：当浴槽中组织胺浓度达到10-5-10-3mol/L时,各组豚鼠气管螺旋条产生剂量依赖性收缩。哮喘模型组豚鼠气管螺旋条张力明显高于正常对照组（P<0.05）。地塞米松治疗组和冷哮丸大、中、小剂量组哮喘豚鼠的气管螺旋条对组织胺的反应性均降低,各个浓度组织胺所诱导的气管螺旋条收缩张力与正常组类似（P>0.05）。3.2实验二冷哮丸对哮喘豚鼠外周血和BALF中EOS数量及肺组织形态学的影响3.2.1冷哮丸对豚鼠血及BALF中EOS计数的影响各组豚鼠血及BALF中EOS计数结果表明：正常对照组豚鼠血及BALF中白细包总数（white blood-cell count, WBC）、EOS绝对值及百分比均较低,模型组豚鼠血及BALF中WBC、EOS绝对值及百分比显着增加,与正常组比较,差异有显着统计学意义（P<0.01）。结果表明,哮喘可引起实验豚鼠外周血及BALF中炎性细胞总数,尤其是EOS增多,这是气道炎症反应的病理学基础。治疗组各组动物外周血和BALF中白细胞总数、EOS数与哮喘模型组比较,差异均有显着统计学意义（P<0.01）,其中地塞米松组和冷哮丸大剂量组EOS数与正常对照组比较,差异无统计学意文（P>0.05）,而冷哮丸中、小剂量组EOS数与正常对照组比较,差异仍有统计学意义（P<0.05）。说明冷哮丸能较好地控制哮喘的气道炎症性反应,而且存在剂量依赖关系。3.2.2肺组织肉眼观察正常对照组：肺组织呈淡红色,表面光滑,组织柔软富有弹性。哮喘模型组：肺组织呈暗红色,表面呈颗粒状,组织膨胀明显,部分组织颜色加深。药物治疗各组肺组织介于前二者之间。3.2.3肺组织HE染色光镜观察正常对照组：豚鼠肺组织支气管黏膜上皮排列整齐,黏膜下层及外膜层次清楚,无炎症反应,管腔清洁完整无分泌物。哮喘模型组：支气管黏膜上皮可见局灶性脱落,黏膜下层明显充血水肿,EOS灶状浸润,内夹少许淋巴细胞、浆细胞。高倍镜下见黏膜杯状细胞增生,数量增多,平滑肌增生肥大。黏膜下层炎症细胞灶状浸润。地塞米松组：支气管管壁结构完整,黏膜上皮部分恢复正常,黏膜下层轻度充血水肿,管腔未见分泌物。冷哮丸大剂量组：支气管管壁结构基本完整,黏膜上皮部分恢复正常,黏膜下层水肿明显减轻,支气管管腔恢复正常,未见炎性渗出物。冷哮丸中剂量组：管腔内见少许脱落的上皮细胞,粘膜增生,基层轻度肥厚。黏膜下层见轻度充血水肿及少量炎症细胞,管腔内仍见炎性渗出物。冷哮丸小剂量组：支气管管壁结构层次清楚,黏膜上皮逐渐恢复,管腔内可见部分炎性渗出物。3.3实验三冷哮丸对哮喘豚鼠血清总IgE、血清和BALF中NO的影响3.3.1冷哮丸对哮喘豚鼠血清IgE含量的影响与正常对照组比较,哮喘模型组豚鼠血清总IgE含量升高,差异有显着统计学意义（P<0.01）。各治疗组血清总IgE含量较模型组均明显降低（P<0.01）,各治疗组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。3.3.2冷哮丸对哮喘豚鼠血清和BALF中NO含量的影响哮喘模型组血清和BALF中NO含量明显升高,与正常对照组相比,差异有显着统计学意义（P<0.01）。给予地塞米松或不同剂量冷哮丸经治疗后,血清和BALF中NO含量均明显降低,与哮喘模型组比较,差异均有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。但治疗后,冷哮丸中、小剂量组血清和BALF中NO含量与正常对照组相比,差异仍有统计学意义（P<0.05）。3.4实验四冷哮丸对哮喘豚鼠血清和BALF中IL-4、IL-5的影响3.4.1冷哮丸对哮喘脉鼠血清和BALF中IL-4含量的影响哮喘模型组豚鼠血清和BALF中IL-4含量明显升高,与正常对照组比较,差异有显着统计学意义（P<0.01）。各治疗组豚鼠血清血清和BALF中IL-4含量明显下降,与哮喘模型组比较,差异均有显着统计学意义.（P<0.01）。3.4.2冷哮丸对哮喘豚鼠血清和BALF中IL-5含量的影响哮喘模型组豚鼠血清和BALF中IL-5含量明显升高,与正常对照组比较,差异有显着统计学意义（P<0.01）。各治疗组豚鼠血清和BALF中IL-5含量明显下降,与哮喘模型组比较,差异均有显着统计学意义（P<0.01）。3.5实验五冷哮丸对哮喘豚鼠血清和BALF中ET-1的影响3.5.1冷哮丸对哮喘脉鼠血清和BALF中ET-1L含量的影响哮喘模型组豚鼠血清和BALF中ET-1含量明显升高,与正常对照组比较,差异有显着统计学意义（P<0.01）。各治疗组豚鼠血清和BALF中ET-1含量明显下降,与哮喘模型组比较,差异均有显着统计学意义（P<0.01）,各治疗组间血清和BALF中ET-1含量比较,差异无显着统计学意义（P>0.05）。3.5.2对气道重塑的影响哮喘豚鼠支气管黏膜上皮局灶性脱落,黏膜下层明显充血水肿,EOS等炎症细胞灶状浸润,黏膜杯状细胞增生,数量增多,平滑肌增生肥大,显示哮喘模型组出现气道重塑病理改变。经冷哮丸治疗后,豚鼠的气道黏膜下层充血水肿,杯状细胞增生、平滑肌增生肥大等气道重塑病理也明显改善。4结论4.1以卵蛋白致敏加攻击方法,可以诱发豚鼠气道变态反应,成功复制哮喘豚鼠模型。4.2实验证实哮喘发病与风、寒、痰等密切相关。宿痰伏肺,遇寒触发,致气道挛急是哮喘发作的主要病机。4.3冷哮丸有温肺散寒,涤痰化饮,解痉平喘之功,对哮喘豚鼠有良好的治疗效果,其作用机制是多途径、多层次、多靶点综合作用的结果。4.3.1冷哮丸能明显抑制哮喘模型Ⅰ型变态反应。作用机制与冷哮丸降低血清：总工gE含量,下调IL-4、IL-5水平,抑制过敏介质的释放密切相关。4.3.2冷哮丸能有效控制哮喘豚鼠模型的气道炎症反应,作用机制与冷哮丸降低血及BALF中炎性细胞数量,减轻炎症浸润,并降低血清和BALF中IL-4、IL-5、NO水平有关。4.3.3冷哮丸能明显缓解哮喘模型气道重塑改变。作用机制与冷哮丸抑制气道炎症,阻断气道平滑肌和粘膜的增厚,降低血清和BALF中ET-1水平有关。4.3.4冷哮丸能明显降低哮喘模型气道高反应性。其作用机制与冷哮丸松弛气道平滑肌,控制气道炎症,抑制气道重塑等功能有关。
闫磊[9]（2010）在《清肺止咳糖浆治疗慢性支气管炎急性发作期的临床研究》文中指出目的:观察清肺止咳糖浆对慢性支气管炎急性发作期（痰热郁肺证型）的临床疗效,并探讨清肺止咳糖浆的作用机理,为临床用药提供科学依据。方法:选择符合中医和西医诊断标准的慢性支气管炎急性发作期中医证属痰热郁肺型诊断标准的病例80例,采用随机双盲分组方法,分为治疗组40例、对照组40例。治疗组采用清肺止咳糖浆治疗,每次15ml,每日三次,对照组采用强力枇杷露治疗,每次15ml,每日三次,疗程均为14天。观察两组患者在治疗前后的临床症状、体征、胸部X线、TNF-α、C反应蛋白,中医证候积分并进行对比。同时注意观察不良反应。结果:1、治疗组的总有效率为97.5%,对照组为95.0%,两组比较,经统计学处理,两组无差异（P>0.05）。2、清肺止咳糖浆对慢性支气管炎急性期患者治疗前后的主要症状和体征均能显着改善（P<0.05）,两组间比较,无统计学意义（P>0.05）。3、两组治疗前后白细胞计数及胸部X线检查无明显变化（P>0.05）。4、两组治疗后均能降低C反应蛋白和TNF-α,与两组治疗前相比,有统计学意义（P<0.05）;两组间比较,经统计学分析,两组疗效相似（P>0.05）。5、临床试验过程中,未发现明显毒副作用和不良反应。结论:临床研究证实清肺止咳糖浆可以显着改善慢性支气管炎急性发作期痰热郁肺证的临床症状、体征、中医证候,能够降低慢性支气管炎患者血清TNF-a、C反应蛋白的含量,具有清热化痰、止咳平喘之功,疗效确切,且安全性良好。
李彦军[10]（2010）在《从风论治过敏性哮喘的文献整理和实验研究》文中提出过敏性哮喘属于Ⅰ型变态反应性疾病,是机体受到抗原刺激后产生特异性免疫应答而引起组织损伤和／或生理功能紊乱的一种疾病,是临床常见病、多发病。该病散在于传统医学的多种疾病当中,也可表现为独立疾病。主要是外源性变态反应原引起的致组织损伤和生理功能紊乱。我国的过敏性哮喘发病率呈上升趋势,严重影响人们的身心健康。治疗和预防过敏性哮喘的发生具有重要的意义。此研究不仅为临床防治过敏性哮喘提供一定思路,而且也为中西医结合防治过敏性哮喘提供实验依据和新的途径。1目的通过文献研究确认风邪与过敏性哮喘病因病机及发病、治疗的相关性；通过实验研究获得以祛风药为君药的加味过敏煎防治过敏性哮喘的实验数据,阐释其抗过敏机制,为从风邪论治过敏性哮喘提供理论指导和实验依据。2方法2.1文献研究本研究采用文献资料法、逻辑分析法和统计学方法,对历代文献关于风邪致病以及过敏性哮喘发病相关文献进行梳理,探讨历代医家对风邪与过敏性哮喘病因病机及发病、治疗的相关性认识。（1）分析历代文献中哮喘的分类,筛选出属于过敏性哮喘的文献记载。（2）研究过敏性哮病因病机（3）研究过敏性哮喘发病症状（4）收集、整理古代文献中治疗哮喘的方剂,重点研究属于治疗过敏性哮喘的药物使用概率。2.2实验研究2.2.1实验动物清洁级SD大鼠,雄性36只,体重180—200g,由北京维通利华公司提供。随机分为正常对照组、哮喘模型组、加味过敏煎给药组,每组各12只。除正常对照组外,其他各组大鼠每只隔天腹腔注射1ml抗原液（含有卵蛋白100mg、氢氧化铝100mg、百日咳杆菌疫苗5×109个）致敏。正常对照组腹腔注射等量生理盐水。致敏14d后,给药治疗。给药组给予加味过敏煎治疗,正常对照组和哮喘模型组给予等量生理盐水。给药1h后,以卵蛋白雾化吸入激发哮喘,给药和激发连续14d。于末次激发后1小时开始试验取材。饲养条件：自然光照,室温（冬春季室温为17℃±2℃,夏秋季室温为25℃±2℃）。自由摄取水及饲料,饲料为普通鼠全价颗粒饲料（北京实验动物研究中心提供）。2.2.2检测方法血清免疫球蛋白E（IgE）含量测定采用酶联免疫吸附实验（ELISA）进行测定。2.2.3实验结果统计学分析方法用SPSS13.0统计分析软件处理数据。各组数据均采用均数±标准差（x±s）表示（P<0.05为差异显着,P<0.01为差异十分显着）。3结果3.1文献研究结果风邪与过敏性哮喘病因病机及发病、治疗具有密切关系。3.2实验研究结果哮喘模型组血清IgE水平与正常对照组相比显着升高（P<0.01）。加味过敏煎给药组可显着降低IgE水平（P<0.05）,与哮喘模型组相比具有显着差异。本实验研究结果显示,哮喘模型组动物血清中IgE水平显着升高,具备Ⅰ型变态反应特征。4结论4.1过敏性哮喘的发生与风邪的侵袭密切相关本研究采用文献资料法、逻辑分析法和统计学方法,对历代文献关于风邪致病以及过敏性哮喘发病相关文献进行梳理研究,认识到风邪与过敏性哮喘病因病机及发病、治疗具有密切关系。4.2加味过敏煎具有治疗过敏性哮喘的作用实验观察到加味过敏煎可以降低IgE水平,抑制哮喘过敏性炎症反应,表明过敏煎具有治疗过敏性哮喘的作用,其作用机理可能与抗炎性渗出、抗变态反应有关,其进一步的机制仍有待深入探讨。
二、冷哮丸对动物祛痰作用的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、冷哮丸对动物祛痰作用的影响（论文提纲范文）
（1）基于TCMATCOV平台的常用经典名方治疗新型冠状病毒肺炎潜在作用分析（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 数据来源 |
| 1.2 纳入与排除标准 |
| 1.3 分析方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 诊疗指南中常用经典名方应用频次分析 |
| 2.2 常用经典名方对COVID-19疾病网络稳健性分析 |
| 2.3 重症期代表方剂核心靶点筛选 |
| 2.4 核心靶点基因富集分析 |
| 3 讨论 |
（2）五生饮水煎剂的有效成分含量测定和毒性试验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1.1 五生饮来源 |
| 1.2 五生饮方解 |
| 1.3 生半夏的化学成分、药理及毒理的研究 |
| 1.3.1 生半夏 |
| 1.3.2 生半夏主要化学成分研究 |
| 1.3.3 半夏的药理作用 |
| 1.3.4 半夏的毒理作用 |
| 1.4 生天南星化学成分、药理及毒理的研究 |
| 1.4.1 生天南星 |
| 1.4.2 生天南星主要化学成分研究 |
| 1.4.3 生天南星的药理作用 |
| 1.4.4 生天南星的毒理作用 |
| 1.5 白附子化学成分、药理及毒理的研究 |
| 1.5.1 白附子 |
| 1.5.2 白附子的主要化学成分研究 |
| 1.5.3 白附子的药理作用研究 |
| 1.5.4 白附子的急性和长期性毒理作用 |
| 1.6 川乌化学成分、药理及毒理的研究 |
| 1.6.1 川乌 |
| 1.6.2 生川乌的化学成分组成 |
| 1.6.3 川乌的药理作用 |
| 1.6.4 生川乌的毒理作用 |
| 1.7 黑豆 |
| 1.8 五生饮方中"生川乌-生半夏"相反药对思想的研究 |
| 1.8.1 经典中关于半夏川乌药对的应用的思想体现 |
| 1.8.2 生半夏生川乌药对研究 |
| 1.9 五生饮中黑豆对生川乌佐制作用的现代研究 |
| 1.10 五生饮类方的现代研究 |
| 1.11 五生饮方的现代实验及临床应用研究 |
| 第二章 五生饮水煎剂有效成分含量测定 |
| 2.1 五生饮水煎剂含量测定方法探索 |
| 2.1.1 色谱柱条件及供试品制备方法摸索 |
| 2.1.2 五生饮水煎剂不同时间段包煎含量测定 |
| 2.2 HPLC法测定五生饮水煎剂中三种单酯型乌头类生物碱的含量 |
| 2.2.1 实验材料与仪器 |
| 2.2.2 方法与结果 |
| 2.2.3 讨论 |
| 2.3 五生饮水煎剂稳定性初步研究 |
| 2.3.1 实验材料与仪器 |
| 2.3.2 方法与结果 |
| 2.3.3 讨论 |
| 第三章 五生饮水煎剂的急性毒理试验研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 药物与试剂 |
| 3.1.2 动物 |
| 3.1.3 仪器 |
| 3.2 五生饮水煎剂的急性毒理试验方法 |
| 3.2.1 预实验 |
| 3.2.2 五生饮水煎剂对大鼠急性毒性正式试验 |
| 3.2.3 统计学处理方法 |
| 3.3 五生饮水煎剂对大鼠的急性毒性试验结果 |
| 3.3.1 一般形态学结果 |
| 3.3.2 体重变化 |
| 3.3.3 肉眼解剖结果观察 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 五生饮水煎剂的亚急性毒性试验研究 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 受试药物 |
| 4.1.2 试剂 |
| 4.1.3 实验动物 |
| 4.1.4 实验仪器 |
| 4.2 五生饮水煎剂长期毒性试验方法 |
| 4.2.1 实验动物的分组 |
| 4.2.2 五生饮水煎剂的分组配置及剂量选择 |
| 4.2.3 五生饮水煎剂给药方式 |
| 4.2.4 一般指标观察 |
| 4.2.5 大鼠标本收集 |
| 4.2.6 血液学检测指标 |
| 4.2.7 血液生化检测指标 |
| 4.2.8 系统尸解 |
| 4.2.9 组织病理学检查 |
| 4.2.10 统计学检查 |
| 4.3 五生饮水煎剂的亚急性毒性试验结果 |
| 4.3.1 一般形态学结果 |
| 4.3.2 五生饮水煎剂对SD大鼠体重的影响 |
| 4.3.3 五生饮水煎剂对SD大鼠摄食量的影响 |
| 4.3.4 五生饮水煎剂对SD大鼠眼部影响 |
| 4.3.5 五生饮水煎剂对SD大鼠尿液中SG、pH值检查的影响 |
| 4.3.6 五生饮水煎剂对SD大鼠血常规的影响 |
| 4.3.7 五生饮水煎剂对SD大鼠凝血二项的影响 |
| 4.3.8 五生饮水煎剂对SD大鼠血液生化及电解质的影响 |
| 4.3.9 五生饮水煎剂对SD大鼠脏器系数的影响 |
| 4.3.10 五生饮水煎剂对SD大鼠病理组织学的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 统计学审核证明 |
| 致谢 |
（3）张晓云教授应用礞石滚痰丸合射干麻黄汤治疗重症哮喘经验总结（论文提纲范文）
| 1哮喘中医病因病机 |
| 2张晓云教授采用礞石滚痰丸合射干麻黄汤治疗重症哮喘验案 |
（4）1、喘敏脱治疗哮喘主要药效学研究 2、新霉胺原料药的有机溶剂残留与水溶液稳定性研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 喘敏脱的主要药效学研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 组胺引喘实验 |
| 2.3.2 对小鼠气道内酚红分泌量的影响 |
| 2.3.3 小鼠耳廓肿胀实验 |
| 2.3.4 大鼠足肿胀实验 |
| 2.3.5 喘敏脱对氨水引起小鼠咳嗽的影响 |
| 3 结果分析 |
| 3.1 药动学和药效的关系 |
| 3.2 阳性药的选取的依据 |
| 3.3 中成药的合理筛选 |
| 3.4 祛痰和平喘作用并不冲突 |
| 3.5 小儿过敏性哮喘的特殊性 |
| 4 讨论 |
| 4.1 支气管哮喘研究背景 |
| 4.2 支气管哮喘的病因病机 |
| 4.2.1 支气管哮喘的病因 |
| 4.2.2 支气管哮喘的发病机制 |
| 4.2.2.1 气道免疫-炎症机制 |
| 4.3 西药治疗哮喘的研究 |
| 4.4 复方中药治疗哮喘的研究 |
| 第二章 新霉胺原料药的有机溶剂残留与水溶液稳定性研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 试药 |
| 2 实验方法与结果 |
| 2.1 有机溶剂残留测定 |
| 2.1.1 色谱条件 |
| 2.1.2 溶液的配置 |
| 2.1.3 专属性 |
| 2.1.4 系统适应性 |
| 2.1.5 线性关系及检测限，定量限 |
| 2.1.6 精密度 |
| 2.1.7 回收率 |
| 2.1.8 重复性实验 |
| 2.1.9 样品含量测定 |
| 2.2 水溶液稳定性的研究 |
| 2.2.1 色谱条件 |
| 2.2.2 标准曲线的绘制 |
| 2.2.3 精密度试验 |
| 2.2.4 稳定性试验 |
| 2.2.5 定量限 |
| 2.2.6 准确度 |
| 2.2.7 pH对新霉胺稳定性的影响 |
| 2.2.8 经典恒温法预测新霉胺水溶液在室温的稳定性 |
| 3.结果分析 |
| 3.1 进样方法的选择 |
| 3.2 程序升温汽化进样 |
| 3.3 定量方法的选择 |
| 3.4 分流比的选择 |
| 3.5 检测器的选择 |
| 3.5.1 载气流速与漂移管温度的选择 |
| 3.5.2 Gain值的选择 |
| 3.6 流动相的选择 |
| 4 讨论 |
| 4.1 药品中有机溶剂残留量及其测定意义 |
| 4.2 药物进行稳定性研究的意义 |
| 4.3 新霉胺质量研究 |
| 5 总结 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 在校期间发表的论文 |
| 致谢 |
（5）论甘草之补（论文提纲范文）
| 1 补心 |
| 1. 1 养心复脉 |
| 1. 2 养心宁神 |
| 2 补肺 |
| 3 补脾 |
| 3. 1 补中益气 |
| 3. 2 升阳举陷 |
| 3. 3 健脾化积 |
| 3. 4 健脾祛湿 |
| 4 缓肝 |
| 5 调肾 |
| 6 助阳化阴 |
| 6. 1 辛甘化阳 |
| 6. 2 酸甘化阴 |
（6）含反药配伍的甘遂半夏汤中甘遂不同入药方式对癌性腹水大鼠模型宜忌条件探讨（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 综述一 甘遂、甘草及其同用古今考 |
| 综述二 十八反不同入药方式研究概述 |
| 实验研究 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 数据分析 |
| 1. 甘遂半夏汤(生甘草、醋甘遂)组 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 2. 甘遂半夏汤(生甘草、生甘遂)组 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 3. 甘遂半夏汤(炙甘草、醋甘遂)组 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 4. 甘遂半夏汤(炙甘草、生甘遂)组 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 5. 所有组别 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附录 |
（7）天贝汤对支气管哮喘大鼠气道炎症和气道重塑的影响的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 一、现代医学对哮喘的认识 |
| 二、祖国医学对哮喘的认识 |
| 实验一 天贝汤对支气管哮喘大鼠肺组织核因子-κB（NF-κB）的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 分析讨论 |
| 结论 |
| 实验二 天贝汤对支气管哮喘大鼠动脉血清中基质金属蛋白酶9和组织基质金属蛋白酶抑制物1含量的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 分析讨论 |
| 结论 |
| 实验三 天贝汤对支气管哮喘大鼠肺组织表面 Fas 和 Bcl-2 mRNA 表达的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 分析讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）冷哮丸对哮喘豚鼠模型作用机制的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语表 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 实验一 冷哮丸对哮喘豚鼠气道反应性的影响 |
| 实验二 冷哮丸对哮喘豚鼠外周血和BALF中EOS数量及肺组织形态学的影响 |
| 实验三 冷哮丸对哮喘豚鼠血清总IgE、血清和BALF中NO的影响 |
| 实验四 冷哮丸对哮喘豚鼠血清和BALF中IL-4、IL-5的影响 |
| 实验五 冷哮丸对哮喘豚鼠血清和BALF中ET-1的影响 |
| 讨论与结论 |
| 1 哮喘的中医学认识 |
| 1.1 哮喘的命名 |
| 1.2 哮喘的病因病机 |
| 1.3 哮喘的中医治则治法 |
| 2 现代医学对哮喘的认识 |
| 2.1 哮喘的定义 |
| 2.2 哮喘的致病机制 |
| 2.3 哮喘之危险因子 |
| 2.4 医理小结 |
| 2.5 治疗方式 |
| 3 健康心理学对哮喘的观点 |
| 4 对哮喘豚鼠模型的评价 |
| 5 冷哮丸的选用依据与药理作用分析 |
| 5.1 冷哮丸的选用依据 |
| 5.2 冷哮丸的药理作用 |
| 6 冷哮丸治疗哮喘的机制探讨 |
| 6.1 对哮喘变态反应的影响 |
| 6.2 对哮喘气道炎症反应的影响 |
| 6.3 对气道重塑的影响 |
| 6.4 对哮喘气道高反应性的影响 |
| 7 结论 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 博士学位期间发表的学术论文及着作 |
| 致谢 |
（9）清肺止咳糖浆治疗慢性支气管炎急性发作期的临床研究（论文提纲范文）
| 英文缩略语 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 一.祖国医学对慢性支气管炎的认识与研究进展 |
| 二.现代医学对慢性支气管炎的认识与研究进展 |
| 临床研究 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士期间发表的论文 |
（10）从风论治过敏性哮喘的文献整理和实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词 |
| 前言 |
| 第一部分 综述 |
| 综述一 古代医学文献中关于哮喘的论述 |
| 综述二 过敏性哮喘现代研究进展 |
| 综述三 过敏性疾病中医治疗概况 |
| 第二部分 理论研究—从风论治过敏性哮喘的文献整理 |
| 1 关于风邪的研究 |
| 2 过敏性哮喘的源流及其病变特点 |
| 3 从风论治过敏性哮喘 |
| 古医籍中治疗哮喘的216首方剂 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究—加味过敏煎对SD大鼠血中IgE变化影响的实验研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 《现代中药药理临床应用手册》书中 七类主要抗过敏中药药物归经 |
四、冷哮丸对动物祛痰作用的影响（论文参考文献）
- [1]基于TCMATCOV平台的常用经典名方治疗新型冠状病毒肺炎潜在作用分析[J]. 唐璇,佟琳,郭非非,唐仕欢,杨洪军. 中国中药杂志, 2020(13)
- [2]五生饮水煎剂的有效成分含量测定和毒性试验研究[D]. 姚奇志. 广州中医药大学, 2017(01)
- [3]张晓云教授应用礞石滚痰丸合射干麻黄汤治疗重症哮喘经验总结[J]. 刘芽青,宋洋,金伟,罗燕. 亚太传统医药, 2017(01)
- [4]1、喘敏脱治疗哮喘主要药效学研究 2、新霉胺原料药的有机溶剂残留与水溶液稳定性研究[D]. 冷宇. 华中科技大学, 2016(11)
- [5]论甘草之补[J]. 杨柏灿. 中医杂志, 2016(06)
- [6]含反药配伍的甘遂半夏汤中甘遂不同入药方式对癌性腹水大鼠模型宜忌条件探讨[D]. 王宏蕾. 北京中医药大学, 2013(S1)
- [7]天贝汤对支气管哮喘大鼠气道炎症和气道重塑的影响的实验研究[D]. 徐丽. 辽宁中医药大学, 2012(06)
- [8]冷哮丸对哮喘豚鼠模型作用机制的实验研究[D]. 林光常. 湖北中医药大学, 2011(05)
- [9]清肺止咳糖浆治疗慢性支气管炎急性发作期的临床研究[D]. 闫磊. 黑龙江省中医研究院, 2010(04)
- [10]从风论治过敏性哮喘的文献整理和实验研究[D]. 李彦军. 北京中医药大学, 2010(11)