一、采用控制酶解法从罗非鱼肉中制备血管紧张素转化酶抑制肽（论文文献综述）
逯冠宏[1]（2021）在《牡蛎多肽提取工艺的建立及其对RAW264.7巨噬细胞免疫调节作用的研究》文中认为牡蛎是典型的暖水性无脊椎双壳贝类,是微量元素、必需脂肪酸、蛋白质、糖原、氨基酸等多种营养素的良好来源。除了这些营养物质外,牡蛎具有多种生物活性和药用价值,是具有保健作用的药食同源食品,尤其是经过蛋白酶水解后制备的牡蛎蛋白水解物或牡蛎多肽,具有降血压、降血糖、抗肿瘤、抗氧化、生殖保健、增强免疫力等多种重要的生物活性。但目前多数的牡蛎以生鲜方式或简单的生产加工方式售卖,牡蛎资源并没有得到充分有效的开发,造成了资源的浪费。因此,近年来大量营养学和医学领域研究学者将目光投入到对牡蛎生物活性的研究和利用上,为牡蛎高附加值活性物质的利用以及牡蛎多肽功能食品的研发提供了技术支撑,是未来牡蛎加工产业的发展方向。具有免疫调节作用的多肽称为免疫活性肽,具有低分子量、低毒、低敏、无副作用和易于被人体吸收等多种优势,因此研究免疫活性肽已经成为相关领域的一个研究热点。本文以牡蛎为原料,选取木瓜蛋白酶、风味蛋白酶和动物蛋白酶通过酶解法和超滤制备三种牡蛎多肽,在小鼠巨噬细胞RAW264.7上对其免疫活性进行初步评价,以此筛选出制备免疫活性肽最佳的水解酶。进一步通过单因素和响应面实验对酶解的p H值、加酶量、温度、底物浓度和时间以水解度为指标进行优化,建立提取多肽的最佳工艺。实验结果表明,动物蛋白酶酶解牡蛎多肽（AOP）比木瓜蛋白酶酶解牡蛎多肽（POP）和风味蛋白酶酶解牡蛎多肽（FOP）,能显着提高RAW264.7细胞的增殖率（P<0.01）,500μg/m L浓度的AOP对细胞的增殖率为（110±1.775）%;并发现三种牡蛎多肽在低浓度500μg/m L时均能激活巨噬细胞,极显着增强巨噬细胞吞噬中性红的活力（P<0.01）,对吞噬活性影响由大到小依次是AOP>FOP>POP;同时AOP酶解多肽在500μg/m L和50000μg/m L时巨噬细胞NO的释放量也是三者中最高的,呈浓度依赖性上升。以上结果说明AOP具有最佳的免疫增强活性。进一步确定AOP最佳提取工艺为加酶量3000U/g、底物浓度20%、酶解温度51℃、酶解时间4h和p H值7.6。利用最佳提取工艺制备牡蛎多肽粗提液,超滤分离获得纳滤浓缩液,之后真空冷冻干燥获得AOP冻干粉,并对其理化性质进行检测分析,实验结果显示,AOP的紫外最大吸收峰出现在220nm处,傅里叶红外光谱显示AOP具有多肽的特征吸收峰;利用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）分析相对分子量分布,结果显示分子量<1000Da的多肽占比54.3%;液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）鉴定出多种多肽序列,我们对AOP中含量相对较高的前16个序列进行检索和分析,发现7种肽序列均来自铜锌超氧化物歧化酶（Cu/Zn-SOD）,该物质已经被证实是一种参与机体抗氧化免疫反应的酶类,另外一种来自HSC70蛋白的肽序列,具有提高机体免疫力,参与免疫调节的作用;氨基酸分析结果显示疏水性氨基酸分别占AOP中水解氨基酸的28.45%、游离氨基酸的17.3%。通过AOP对细胞增殖的影响、吞噬中性红的能力、NO释放量的影响以及相关细胞因子（IL-6、i NOS、IL-1β、TNF-α）基因的表达量影响,研究不同浓度AOP对细胞免疫调节作用的影响,结果表明250μg/m L和1250μg/m L两种浓度的AOP能够促进RAW264.7细胞的增殖、增强其对中性红的吞噬能力和促进释放NO、上调i NOS m RNA、IL-6 m RNA、IL-1βm RNA、TNF-αm RNA基因的表达水平。进一步采用Western blot法研究其免疫调节机制,结果表明AOP能够通过激活p38、JNK MAPK信号通路,促进相关免疫细胞因子的分泌,从而调节免疫活性。综上所述,本研究建立了牡蛎多肽的提取工艺,经超滤分离得到牡蛎多肽AOP,初步研究表明AOP能够增强RAW264.7细胞的免疫活性,为牡蛎功能性食品的开发和利用提供了新思路。
李雅思[2]（2021）在《大黄鱼ACE抑制肽的制备及其抑制机制初探》文中指出本文以大黄鱼鱼肉为原料,通过单因素和正交实验确定了制备高血管紧张素转换酶（ACE）抑制活性酶解产物的最佳酶解条件,然后用葡聚糖凝胶G-25色谱仪（Sephadex G-25）对酶解产物进一步分离纯化,并用Nano-LC-ESI-Q-Orbitrap-MS/MS技术鉴定分离组分中多肽的氨基酸序列,筛选出符合ACE抑制特征的肽段进行合成,最后对其活性较高的ACE抑制肽与ACE进行分子对接,探究其抑制机理。（1）以水解度（DH）和ACE抑制率为评价指标,通过单因素实验和正交实验,优化了制备大黄鱼鱼肉酶解物（NHs）的条件,并对酶解产物的ACE抑制率、水解度和氨基酸组成进行了分析。结果表明,最适蛋白酶为中性蛋白酶,在料液比8 g/100 mL、酶添加量4000 U/g、酶解温度50℃、酶解时间7h、pH值7.0的条件下制得的酶解产物富含疏水性氨基酸和酸性氨基酸,且其ACE抑制率为 81.60%,IC50 值为 0.27 mg/mL。（2）通过对NHs的分子量分布的测定,确定了 ACE抑制活性与分子量之间的关系,然后采用葡聚糖凝胶G-25分离纯化大黄鱼鱼肉酶解液,对分离纯化得到的具有较高ACE抑制活性的组分进行分子量测定,并用Nano-LC-ESI-Q-Orbitrap-MS/MS技术测定其氨基酸序列,从中筛选出具有AEC特征的肽段。结果表明:NHs主要由小分子多肽组成,分子量分布在4300 Da以下,经Sephadex G-25纯化后共得到4个组分,其中组分3（F3）具有最强的ACE抑制率,其抑制率为84.06%,比纯化前的81.60%提高了 1.03倍。通过抗高血压肽的结构特征从F3中筛选出10条平均局部置信度得分（ALC）≥99%的寡肽。（3）通过体外测量10条合成肽的ACE抑制率,从中筛选出活性较高的肽段,再使用Discovery Studio 2016 Client软件对活性较高的ACE抑制肽与ACE进行分子对接,探究其抑制机制。研究结果表明,合成的肽段中以寡肽LLAGGW、YVGGW、LGYSF 的 ACE 抑制率最高,其 IC50值分别为 0.49 mg/mL、0.39 mg/mL、0.57 mg/mL;分子对接结果表明,ACE的活性口袋S1中的两个氨基酸残基His353和Glu384是影响ACE结合的重要氨基酸,且氢键和疏水作用力是影响ACE结合的关键作用力,ACE活性中心Zn701也是影响ACE活性的关键氨基酸。
杨云梅[3]（2019）在《家蚕丝素蛋白ACE抑制肽的制备及性能研究》文中提出高血压是一种慢性疾病,能够诱发心脑血管疾病,严重危害了人们的身体健康。临床上已用卡托普利、依那普利和福辛普利等化学合成药物治疗高血压,但这些药物通常会产生副作用如味觉障碍和干咳等。血管紧张素转化酶抑制肽由于来源于天然蛋白,具有安全性高、无副作用、易吸收和抑制效果良好等特点,现已成为热点领域之一。丝素蛋白广泛存在于家蚕丝中,疏水性氨基酸含量高,是制备ACE抑制肽的潜在蛋白质资源,目前关于丝素蛋白ACE抑制肽的研究较少,特别是关于其降血压分子机制方面的研究未见报道。本文以桑蚕丝素蛋白为原料,利用酶法制备丝素蛋白ACE抑制肽,通过超滤、离子交换色谱、葡聚糖凝胶分离色谱和液相色谱-质谱联用分离和鉴定丝素蛋白ACE抑制肽,并利用分子对接和Lineweaver-Burk双倒数作图法对丝素蛋白ACE抑制肽的降血压的机理进行了探讨。结果表明:酶法制备丝素蛋白ACE抑制肽的最佳水解用酶是碱性蛋白酶;影响丝素蛋白ACE抑制肽活性的各因素大小依次为:底物浓度>加酶量>酶解时间>p H;最佳酶解条件为:酶解温度45℃、酶解时间61.66min、p H8.54、底物浓度4.95%、加酶量3140.23U/g。经超滤分离后,MW<5 k Da组分具有最强的ACE抑制活性;紫外光谱分析表明MW<5 k Da组分能够改变ACE的结构。体外消化试验表明,丝素蛋白ACE抑制肽具有良好的酸、热稳定性和抗肠道酶消化能力。MW<5 k Da组分依次经DEAE-52交换色谱、Sephadex G-50凝胶分离色谱、Sephadex G-15凝胶分离色谱和液相色谱分离后成功得到了一个活性最高组分(IC50值为0.00625 mg/m L),经液-质联用色谱分析,发现丝素蛋白ACE抑制肽的分子量范围为162.13～542.37 Da,主要由2～4肽组成,预测了5种ACE抑制肽的氨基酸序列,它们分别为SG或GS、SV或DA、YT、EECY和PAL。分子对接结果表明,SG主要与ACE口袋S1活性中心部位的Glu384、Ala354、Tyr523和S2口袋活性中心部位的His353、His513、Lys511和Tyr520氨基酸残基相互作用;GS主要与ACE口袋S1活性中心部位Tyr523、Ala354和Glu384相互作用;SV主要与ACE的S1口袋活性中心部位Ala354和S2口袋活性中心部位Tyr520、Gln281、His513和His353氨基酸残基相互作用;DA主要与ACE的S1口袋活性中心部Ala354和S2口袋活性中心部位的His353和Gln281氨基酸残基相互作用以及与Zn2+附近的氨基酸残基His383和His387相互作用;YT主要与ACE的氨基酸残基Glu123、Asn85、Tyr62、Ser517和Arg124相互作用;PAL主要与ACE氨基酸残基Tyr360和Arg522相互作用;EECY主要与ACE的氨基酸残基Arg522、Glu123、Lys118和Arg124相互作用;在这些肽中,PAL的IC50值最小,为0.0018mg/ml。Lineweaver-Burk双倒数作图法研究结果表明,SG（ki=3.033±0.512 mmol/L）和EECY（ki=3.845±0.716mmol/L）是竞争性抑制剂,DA（ki=9.600±0.602 mmol/L）、SV（ki=3.492±0.106 mmol/L）和GS（ki=6.458±0.644 mmol/L）是非竞争性抑制剂,PAL（ki=0.617±0.056 mmol/L）和YT（ki=1.146±0.044 mmol/L）是反竞争性抑制剂,其中,PAL的ki最小,与ACE亲和力最强。
袁玲[4]（2019）在《罗非鱼皮明胶源血管紧张素转换酶抑制肽的制备及活性分析》文中研究表明高血压是脑中风、冠心病、心肌梗塞和糖尿病等心血管疾病的风险因子,该疾病已经成为最常见的危险性疾病之一。目前,临床上常用的一些降血压药物虽然具有很强的降血压作用,但同时也会产生一定的副作用,比如过敏、皮疹、咳嗽、味觉异常、白细胞减少以及具有药物依赖性等。然而,食源性ACEI肽是一种极具开发潜力的多肽类物质,它不仅具有降血压活性,而且安全性高、无其他毒副作用,已经成为生物活性肽领域研究的热点之一。罗非鱼皮明胶经蛋白酶水解后即可获得安全性高、低毒副作用的具有降低血压的小分子多肽。本文以罗非鱼的副产物罗非鱼皮为研究对象,利用蛋白酶水解鱼皮明胶制备ACEI肽,并对明胶水解产物进行了初步分离纯化、结构鉴定,获得了ACEI活性较高的小分子多肽。主要研究结果如下:1.以罗非鱼皮为原料,利用两种蛋白酶对其进行水解,将水解得到的明胶水解产物再经过连续模拟胃肠消化,并测定各个消化阶段产物的水解度及ACEI活性。同时,考虑体外肠吸收的影响,采用Caco-2细胞单层模型制备得到ACEI肽。再通过Sephadex G-25凝胶过滤柱、反向高效液相色谱对其进行分离纯化,经过高分辨质谱鉴定得到VGLPNSR和QAGLSPVR两种新型ACEI肽,其分子量分别为741.4133Da和826.4661Da。2.将鉴定得到的两种新型ACEI肽进行化学合成用于其体外和体内降血压活性的研究。以不同浓度的ACEI肽溶液与固定浓度底物HHL的反应来进行VGLPNSR和QAGLSPVR的体外ACEI活性的测定。测定得到VGLPNSR和QAGLSPVR的回归方程分别为:y=26.30ln（x）-65.56（R2=0.9919）和y=26.40ln（x）-61.53（R2=0.977）,并根据回归方程计算得到其IC50值分别为80.90和68.35μM。通过原发性高血压（SHR）大鼠模型研究了VGLPNSR和QAGLSPVR的体内降压活性,以卡托普利为阳性对照,分别测定了给药前后SHR大鼠的收缩压（SBP）和舒张压（DBP）。研究结果表明,二者均能显着降低SHR大鼠的SBP和DBP,且都在给药3小时后达到降压幅度最大值。3.运用酶动力学Lineweaver-Burk图模型来判断新型ACEI肽VGLPNSR和QAGLSPVR的抑制作用类型,并结合分子对接软件SYBYL-X 2.1.1研究ACEI肽与ACE酶之间的结构活性关系。实验结果发现,本研究鉴定的两种ACEI肽的均为非竞争性抑制剂。对接模拟结果表明,VGLPNSR与Ser526,Asp415,Gly386,Ile388,Val380和Gln369氨基酸残基发生氢键相互作用,QAGLSPVR与Asp465,Asp415,Val380和His410氨基酸残基发生氢键相互作用。二者均没有与ACE活性位点中的关键氨基酸残基相互作用。即两种关键肽和ACE之间的相互作用是非竞争性的,与酶动力学的测定结果相同。
董晓泽[5]（2019）在《日本黄姑鱼皮活性肽的制备及其免疫作用研究》文中进行了进一步梳理近年来,海洋生物活性肽以其安全无毒优良特点在食品保健品领域崭露头角,日本黄姑鱼（Nibea japonica）营养丰富,味道鲜美,在其食品生产及精制过程中产生的鱼皮、鱼鳞等副产品具有高附加利用价值;本课题以日本黄姑鱼皮为原料,优化日本黄姑鱼皮活性肽的酶解制备工艺,研究其体内外免疫活性,以期为进一步研究其应用提供基础。本课题采用蛋白酶水解法,以酶解产物对RAW 264.7细胞相对增殖率的影响为指标,通过筛选蛋白酶实验、单因素实验、响应面实验优化日本黄姑鱼皮活性肽的酶解制备工艺,并对酶解产物进行超滤分离,采用MTT细胞增殖实验筛选活性最高的分子量区间肽命名为日本黄姑鱼皮活性肽（Nibea japonica skin active peptides,NJSAP）;通过MTT细胞增殖实验、观察细胞形态变化、中性红吞噬实验、一氧化氮（NO）分泌量的测定、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、白介素-12（IL-12）分泌量的测定来考察NJSAP在体外作用于RAW 264.7细胞的免疫活性;通过腹腔注射建立环磷酰胺诱导小鼠免疫抑制模型,模型建立成功后,灌胃100、200、400 mg/kg的NJSAP连续25天,通过记录小鼠体重变化、计算脏器指数变化、ConA诱导脾淋巴细胞转化实验、迟发型变态反应实验、测定半数溶血值(HC 50)、测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力、测定血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）含量、测定血清中总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活力、过氧化氢酶（CAT）活力以及HE染色小鼠脾脏来考察NJSAP在体内免疫活性。结果显示:酶解日本黄姑鱼皮最适蛋白酶为中性蛋白酶,最佳酶解条件是pH为7,温度45.5℃,时间5.5 h,加酶量1500 U/g,液料比10:1（mL/g）,在此酶解工艺下所得酶解产物作用于RAW 264.7的相对增殖率为57.47%,并且经超滤分离得到<3kDa的组分活性最高;12.5500μg/mL浓度范围内的NJSAP能使RAW 264.7细胞的相对增殖率增高,NJSAP还能使RAW 264.7细胞伸出伪足出现分化,并且促进RAW264.7细胞吞噬能力以及分泌NO、TNF-α、IL-6、IL-12的能力;不同剂量的NJSAP能使免疫低下的小鼠体重、脏器指数明显上升;小鼠足跖厚度差值及脾淋巴细胞显着增强,说明NJSAP可促进小鼠细胞免疫;半数溶血值显着性增加,说明NJSAP可促进小鼠体液免疫;腹腔巨噬细胞吞噬能力明显增加,说明NJSAP能促进小鼠的特异性免疫;血清中TNF-α、IgG、IgA、IgM含量、T-AOC、含量及SOD、CAT活力明显增加,血清中MDA含量降低,HE染色显示小鼠脾脏有所恢复。综上所述,NJSAP具有一定的免疫活性,并能提高小鼠的免疫力,这为进一步研究NJSAP提供了理论基础。
郑亚军[6]（2016）在《油棕粕谷蛋白-2血管紧张素转化酶抑制肽制备与降血压活性研究》文中进行了进一步梳理高血压是导致心脏病、动脉硬化、心肌梗塞等疾病的主要诱因,威胁着世界上四分之一成年人的健康。食源性降血压肽因疗效稳定、无毒副作用、可添加到饮食中降低血压等优点而受到广泛关注。棕榈油是世界上产量和贸易量第一的植物油。油棕粕是棕榈油生产中的副产物,蛋白质含量为14.5%～19.6%,是丰富的植物蛋白质资源。油棕粕蛋白质的营养价值较高,功能特性较好,且具有抗氧化、降血脂等生物活性,开发潜力较大,但目前油棕粕仅被作为饲料或肥料,在食品中的应用极少。前期研究表明,油棕粕蛋白质具有抑制血管紧张素转化酶的活力,具备开发为降血压多肽的潜力。本研究从油棕粕中分离出五种组分蛋白,通过比较这些蛋白质的营养价值、血管紧张素转化酶（Angiotensin-Ⅰ converting enzyme,ACE）抑制活性、功能特性和抗氧化性,筛选出谷蛋白-2为适于制备降血压多肽的原料蛋白。采用超高压辅助复合酶解技术制备ACE抑制肽,用中心旋转响应面法优化酶解工艺参数;应用凝胶色谱分离、反向高效液相色谱等技术分离和纯化出ACE抑制肽,并系统分析了这些肽的结构特征、理化性质和体内降血压活性;从抑制动力学、对人脐静脉内皮细胞功能的影响、对ACE和ACE2及内皮素-1的影响、缓解细胞氧化压力、修复细胞损伤等方面探讨了降血压机理,主要研究结果如下:采用连续提取法从油棕粕中提取清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白-1和谷蛋白-2,结果表明,谷蛋白-2占总蛋白的33.32%± 1.56%,是油棕粕蛋白质的主要成分。油棕粕谷蛋白-2（PKEG）中必需氨基酸组成合理、疏水性氨基酸和芳香族氨基酸的含量较高,体外消化吸收率为65.87%,生物效价为63.03,营养价值较高。在5种组分蛋白质中,PKEG的ACE抑制活性最高,且具有较强的抗氧化活性,是制备降血压肽的良好原料。酶解实验表明,超高压预处理（300 MPa、35℃、20 min）可以显着提高PKEG的水解度和ACE抑制活性。最佳的酶解工艺参数为:复合蛋白酶（Alcalase2.4L:风味蛋白酶=1:1）用量 0.97g/100g,在 49.09℃、pH6.68 条件下酶解 6.45h,PKEG的水解度为20.96%,ACE的抑制率达61.44%。该酶解工艺可以显着提高PKEG的抗氧化性、体外消化吸收率、生物效价、溶解性、乳化性、起泡性和热稳定性,拓宽了其在食品工业中的用途。采用超滤和Sephadex G-15凝胶色谱技术,从油棕粕谷蛋白-2酶解产物（PKEGH）中分离出4个组分,其中组分PKEGH-Ⅲ-E的ACE抑制活性最强。动物实验表明,连续给药6周后,PKEGH-Ⅲ-E可显着降低自发性高血压大鼠（SHR）的收缩压、舒张压,而对SHR的正常体重增长、心率无显着性影响,无毒副作用。连续采用凝胶色谱柱层析、反相高效液相色谱及ESI-LC-MS/MS技术,从PKEGH-Ⅲ-E 中分离出 4 种 ACE 抑制纯肽,鉴定为 Ala-Asp-Val-Phe-Asn-Pro-Arg、Val-Val-Leu-Tyr-Lys、Leu-Pro-Ile-Leu-Arg 和 Val-Ile-Glu-Pro-Arg,分子量分别为817.41、620.39、610.42 和 612.36 Da,ACE 抑制 IC50 值分别为 0.397、0.331、0.476和 0.387 mg/mL。酶促动力学研究表明,VVLYK、LPILR和VIEPR属于抑制剂类型,而ADVFNPR为前体药类型;ADVFNPR和VIEPR对ACE的抑制模式是非竞争性抑制模式,而LPILR和VVLYK是混合型抑制模式。4种ACE抑制肽对人体消化酶的水解作用、巴氏杀菌处理、K+、Ca2+、Mg2+等金属离子均有较好的稳定性,可以添加到食品中预防或治疗高血压病,使用范围广泛。细胞试验表明,VVLYK、ADVFNPR、LPILR和VIEPR可以将内皮细胞的生长阻滞于S期（DNA合成期）从而抑制细胞的增殖,但无细胞毒性;荧光实时定量PCR试验表明,VVLYK等多肽可以显着抑制人脐静脉内皮细胞内ACE mRNA、ET-1 mRNA的表达量,同时升高ACE2 mRNA的表达量,从而抑制ACE和ET-1的合成、促进ACE2的合成和。VVLYK等4种多肽具有较强的超氧阴离子和羟基自由基清除能力,能有效降低H202等氧化剂诱导的细胞损伤,缓解细胞氧化压力,其降血压机理可能是通过抑制人脐静脉内皮细胞增殖、抑制ACE和ET-1的合成、促进ACE2的合成、缓解细胞氧化压力、减少细胞氧化损伤而发挥降低血压作用。
黄嘉成[7]（2016）在《沙丁鱼血管紧张素转化酶抑制肽的制备、分离纯化及功效研究》文中研究表明沙丁鱼（Sardina melamosticta）是我国东南沿海重要的鱼类资源之一。其显着特点是:产量高、繁殖快、价格低廉,是一类具有很大开发潜力的鱼类资源。本文以沙丁鱼为原料,通过酶解的方法制备沙丁鱼辅助降血压肽,并进行了成分分析和体内功效研究。首先,利用不同的酶解组合对沙丁鱼肉进行酶解,以血管紧张素转化酶（ACE）抑制率为指标,筛选出最佳的酶解组合,并对酶解工艺进行了优化;然后,采用超滤、柱层析的方法对酶解液进行分离纯化,所得ACE抑制活性较强的组分进行反相高效液相色谱（RP-HPLC）和氨基酸组成分析;最后,选用原发性高血压大鼠（SHR）和正常血压的京都大鼠（WKY）,对酶解液的体内降血压功效及生理生化影响进行了测定。研究结果如下:1)最佳酶解组合:木瓜蛋白酶+碱性蛋白酶。最佳酶解工艺:用木瓜蛋白酶进行第一步酶解,反应温度65°C、pH 7.5、反应时间2.25h、酶添加量4000U/g、料液比30%（W/V）;用碱性蛋白酶进行第二步酶解,反应温度65°C、pH 10.0、反应时间2.0h、酶添加量5000U/g。工艺优化后,沙丁鱼蛋白的水解度（DH）从16.70%提高到28.44%,其酶解液（C=20.0mg/m L）的ACE抑制率则从65.40%提高到73.44%。2)超滤后,得到分子量小于5kDa的透过液。再经过葡聚糖凝胶Sephadex G-25和G-15两步柱层析,最终得到3个ACE抑制活性较强的组分P2-1、P2-2和P3-2（C=1.0mg/mL）,其ACE抑制率分别为69.48%、70.42%和75.43%。根据P2-1、P2-2和P3-2的RP-HPLC和氨基酸组成分析结果,推测ACE抑制活性的强弱与其氨基酸组成和疏水性强弱有关。3)单次灌胃后沙丁鱼ACE抑制肽后,SHR的收缩压（SBP）出现一定程度的下降（P<0.01、P<0.05或P>0.05）,但不能保持稳定。经连续4周期灌胃后,SHR的SBP下降明显（P<0.05或P<0.01）,并能保持稳定。测定两种大鼠的脏器系数、组织及血清丙二醛（MDA）、血清ACE活力和血管紧张素II（ANG-II）浓度,发现酶解液仅对SHR产生显着的生理生化影响（P<0.01或P<0.05）,而不会对WKY大鼠的生理生化指标产生明显影响（P>0.05）。此外,灌胃化学合成降压药卡托普利,会影响WKY的SBP及部分生理生化指标（P<0.01、P<0.05或P>0.05）。以沙丁鱼为原料开发辅助降血压功能食品,制得的产品活性较强,且未发现安全性问题和化学类降压药的副作用,具有很大的开发价值和应用前景。
刘旺旺[8]（2016）在《羊胎盘提取残留物高质化利用研究》文中研究指明羊胎盘含有多种生物活性物质,具有抗氧化、降血糖、抗菌抗病毒和提高机体免疫力等多种生理功效。我国羊胎盘资源丰富,但是对羊胎盘的利用率不足3%,因此,以羊胎盘为原料进行综合开发利用具有积极的现实意义和广阔的市场前景。本文以羊胎盘提取残留物高质化利用为目的,首先对提取水溶性物质后的羊胎盘残余物进行营养价值分析,然后采用产蛋白酶微生物黑曲霉、米曲霉、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌对其进行发酵酶解并对产物的生物活性进行研究,得到了抗氧化和免疫活性肽的最佳制备工艺并对产物的稳定性和各组分的含量与活性进行研究。主要结果如下:（1）羊胎盘提取水溶性物质后的残余物进行营养价值分析:羊胎盘提取残余物是一种优质的蛋白,其蛋白质功效比（PER值）为1.27,干基总蛋白含量为97.67%,其中氨基酸含量依次为:谷氨酸（10.24%）、甘氨酸（9.51%）、天门冬氨酸（6.56%）、精氨酸（5.65%）、亮氨酸（5.46%）、脯氨酸（5.41%）。氨基酸组成合理,其第一限制性氨基酸为异亮氨酸和缬氨酸,两者的氨基酸评分均为0.71。（2）采用4种产蛋白酶微生物发酵羊胎盘提取残余物制备具有抗氧化和免疫增殖活性的酶解产物。结果表明,四种微生物在各自适宜的发酵温度和发酵pH条件下以黑曲霉的多肽产率29.67%最多,依次是枯草芽孢杆菌27.58%,地衣芽孢杆菌26.04%,米曲霉24.3%;考察产物的生物活性,其中以黑曲霉发酵产物的抗氧化活性最高,枯草芽孢杆菌发酵产物的免疫细胞增殖活性最高。（3）黑曲霉发酵酶解羊胎盘提取残留物制备抗氧化肽的最优工艺条件为:接种量5%、发酵温度30℃、料液pH 5.6、碳源2.8%、发酵时间76.4 h,所得的发酵液DPPH·清除率83.78%,多肽得率为30.90%;枯草芽孢杆菌发酵羊胎盘提取残留物制备免疫活性肽的最优工艺即料液发酵温度37℃、pH 5.4、碳源1.7%、发酵时间43.5h,进行验证试验,测得酶解产物的刺激指数达到了24.38%,多肽得率27.89%。（4）研究发酵产物多肽的活性和体外的稳定性,分别研究了产物的量效关系,pH值的影响,干燥方式、体外模拟消化。抗氧化肽的自由基清除率随着浓度的升高逐渐增大,相同浓度下对自由基的清除能力要稍高于（谷胱甘肽）GSH的清除能力。免疫活性肽蛋白浓度在6.25-200μg/mL范围内对小鼠脾脏淋巴细胞具有明显的增殖作用,在低于100μg/mL浓度时,随着发酵液蛋白浓度的增加,刺激指数随之增加,在浓度100μg/mL浓度时淋巴细胞的增殖率达到23.25%。抗氧化肽在pH5-8范围内,活性较稳定,过酸或者过碱的环境中产物活性下降;干燥方法对产物的活性没有产生太大影响,黑曲霉酶解产物的活性保持分别为97.6%和91.7%,对枯草芽孢杆菌酶解产物免疫保持90%以上。模拟胃液、肠液中,发酵酶解产物的抗氧化活性保持率优于免疫活性;当胃液消化150 min时,产物对DPPH·清除率为50.88%,对·OH清除率为50.39%,其活性保持率分别为64.45%和58.46%;当肠液消化300 min时,其清除率保持分别为53.87%和63.18%,活性保持率分别为68.28%和73.13%,模拟胃液和肠液消化中免疫活性保持活性保持了44.61%和52.89%。（5）以抗氧化性和体外免疫性为考察指标,对产物各超滤组分的体外生物活性进行了分析探究。结果表明,具有较高抗氧化能力的组分YT-Ⅰ（<3 KDa）、YT-Ⅱ（3 KDa-10 KDa）占黑曲霉发酵酶解蛋白总量的61.4%超过50%,可见分子量少于10 kDa的低分子蛋白组分对羊胎盘提取残余物的抗氧化活性起着主要的贡献,多肽含量分布满足函数关系方程的曲线y=0.0006X2-0.0932X+3.1345;枯草芽孢杆菌的发酵酶解组分中MT-Ⅰ（<3 KDa）、MT-Ⅱ（3 KDa-10 KDa）占总量的85%,MT-Ⅱ（3 KDa-10 KDa）对酶解产物的免疫增殖能力起到重要作用,MT-Ⅰ（<3 KDa）具有较高的抗氧化活性,MT-Ⅱ（3 KDa-10 KDa）与MT-Ⅰ（<3KDa）在免疫细胞增殖方面具有一定的协同增殖效应。
张颖[9]（2016）在《牛、羊乳酪蛋白源DPP-Ⅳ抑制肽的制备、鉴定及抑制机理研究》文中认为糖尿病（DM）是全球范围内增长速度最快和发病率最为广泛的疾病之一,近年来,以肠促胰岛素为作用靶点的抗糖尿病药物—二肽基肽酶Ⅳ （DPP-Ⅳ）抑制剂的研究备受关注。从食物蛋白中寻找天然、无副作用且功能多样的DPP-Ⅳ抑制活性多肽类物质,是解决DPP-Ⅳ抑制药物副作用的一个重要突破口。本文以牛和羊乳酪蛋白（CN）为研究对象,首先采用生物信息学方法预测了两种不同来源酪蛋白中潜在DPP-Ⅳ抑制序列及生物活性潜能,再采用生物酶水解技术制备乳酪蛋白多肽验证两物种间真实的DPP-Ⅳ抑制活性及组成特性差异,然后将蛋白水解物经超滤、二维硅胶薄层色谱或反相高效液相色谱、液质联用等手段分离并鉴定出其所含有效活性肽序列；在此基础上,应用酶动力学、分子模拟等技术手段阐述了DPP-Ⅳ抑制多肽的抑制特性及抑制机理,并探讨了乳酪蛋白DPP-Ⅳ抑制肽对胃肠消化吸收的耐受性及对胰岛细胞的功能。主要研究内容和结果如下：（1）采用生物信息学方法预测比较了牛、羊乳两种不同来源酪蛋白中潜在的DPP-Ⅳ抑制序列及其生物活性潜能。牛、羊乳四种酪蛋白的一级氨基酸序列中均含多个DPP-Ⅳ抑制片段,羊乳酪蛋白中DPP-Ⅳ抑制肽在各酪蛋白组分中出现的概率PC值为κ-CN> β-CN> αs1-CN> αs2-CN,对应牛乳的PC值为β-CN> κ-CN> αs1-CN> αs2-CN;而对于抑制潜能PI值,羊乳酪蛋白的PI值为κ-CN> β-CN> αs1-CN> αs2-CN,对应牛乳PI值为k-CN> αs1-CN>β-CN> βαs2-CN。总酪蛋白DPP-IV抑制潜能PIΦ综合考虑了四种酪蛋白在牛、羊乳中组成比例及各自PI值的差异,无论来自于高（PIΦ,8.04 10-6 μM-1g-1）还是低（PIΦ,8.25 10-6μM-1g-1） αs1-CN基因品种的羊乳PIΦ都比牛乳（PIΦ,7.7310-6 μM-1g-1）具有微弱的DPP-Ⅳ抑制潜能优势。另外,通过胰蛋白酶模拟水解羊乳酪蛋白,从其释放的肽片段中筛选出两条具有良好DPP-Ⅳ抑制活性的序列GPFPILV和HPINHR,IC50分别达163.7和452.2μM。（2）应用5种商业蛋白酶分别水解牛、羊乳酪蛋白制备活性多肽,比较研究各种蛋白酶酶解物的体外DPP-Ⅳ抑制活性及组成特性差异。结果表明,牛、羊乳原始酪蛋白均没有DPP-Ⅳ抑制能力,酶解产物却具有显着不同的DPP-Ⅳ抑制活性,DPP-Ⅳ抑制活性和水解度之间没有直接对应关系。羊乳酪蛋白比牛乳具有更好的蛋白酶消化特性,其制备所得大部分酶解物的DPP-Ⅳ抑制活性也优于牛乳。筛选出胰蛋白酶作为水解牛或羊乳酪蛋白制备DPP-Ⅳ抑制多肽的最佳用酶,最佳水解时间为3 h。双酶联合酶解并没有显着提高羊乳酪蛋白水解物的生物活性。羊乳酪蛋白胰蛋白酶水解物比牛乳具有更低的IC50值（羊0.801 mg/mL vs牛0.887 mg/mL）,其<5kDa比>5 kDa超滤组分具有更强DPP-IV抑制活性,虽各组分均表现为竞争/非竞争混合型DPP-IV抑制方式,然而其抑制特点和抑制常数Ki值有显着不同。（3）针对乳酪蛋白水解物的超滤组分,采用硅胶薄层色谱和/或高效液相色谱等技术进一步分离,其中高活性子组分再通过液质联用技术鉴定所含肽序列。首次利用二维薄层色谱（第一维和第二维薄层展开剂分别为氯仿：甲醇：25%氨水（2：2：1）和正丁醇：乙酸：水（4：1：1））或一维薄层色谱（薄层展开剂为氯仿：甲醇：25%氨水（2：2：1））/高效液相色谱联用的方法分离、分析蛋白功能水解物中的活性组分,其具有良好的蛋白水解物适用性,并且和后续质谱鉴定技术能够匹配和衔接。LC-MS/MS质谱鉴定出MHQPPQPL, SPTVMFPPQSVL, INNQFLPYPY和YPVEPF四条高效的乳酪蛋白源DPP-IV抑制新序列,特别是INNQFLPYPY的IC50达40.08μM。（4）对分析和鉴定出的有效DPP- Ⅳ抑制肽的抑制特性及抑制机理做了进一步研究。酶抑制动力学分析表明鉴定出的食源蛋白DPP-Ⅳ抑制肽表现出反竞争抑制、非竞争抑制、竞争抑制、竞争/非竞争混合抑制多种抑制模式;反竞争或非竞争抑制肽具有良好的结构稳定性,可看作为DPP-Ⅳ酶的真正抑制剂,而含有第二位Pro的竞争或竞争/非竞争混合抑制肽则可被不等程度降解。分子模拟数据显示这些肽会主要通过氢键和疏水相互作用方式结合在DPP-Ⅳ酶的不同氨基酸位点上。另外,这些DPP-Ⅳ抑制肽之间共存时对DPP-Ⅳ具有明显的相互影响作用,且与抑制肽浓度相关,并且对猪和人两种不同生物来源DPP-Ⅳ酶具有不一致的敏感性和抑制特性,但整体对猪源DPP-Ⅳ酶的抑制活性值要显着高于人源DPP-Ⅳ。（5）探讨了牛、羊乳酪蛋白DPP-Ⅳ抑制肽对胃肠消化吸收后的耐受和稳定性以及对胰岛细胞的功能。经胃肠模拟消化后,牛、羊乳酪蛋白酶解产物的DPP-Ⅳ抑制活性基本维持稳定；其中所含有效序列MHQPPQPL、HPINHR和YPVEPF不存在消化道酶酶切位点,而INNQFLPYPY和GPFPILV则显示出不稳定的抗消化道酶水解能力。小肠上皮细胞对活性肽INNQFLPYPY、 INNQF和MHQPPQPL有完全不同的摄入能力和吸收速度。另外,牛、羊乳酪蛋白水解物对胰岛β-细胞有明显增殖作用,但在两物种间没有显着差异；然而,牛乳酪蛋白水解物对β-细胞的促胰岛素分泌作用显着强于羊乳对应物。
韩冬雪[10]（2015）在《发酵牛肉火腿中ACE抑制肽的提取和鉴定》文中研究表明发酵火腿加工过程中其内部会发生强烈的蛋白质水解作用，积累大量的自由氨基酸和多肽，这些产物对发酵火腿的最终品质和生物活性有着十分重要的意义。因此，本实验旨在研究发酵火腿中多肽的生物活性。1.根据本实验室开发的发酵牛肉火腿制作方法，选择优质的牛里脊肉，用地衣芽孢杆菌和清酒乳杆菌对牛里脊肉进行发酵。发酵好的肉块经过干制、冷熏、切片和包装后，便制成了实验的原料，即实验室开发的发酵牛肉火腿。2.结合国内外对不同原料中多肽的提取方法，选择出了两种可能适合发酵火腿中多肽的提取方法，并对这两种提取方法中的几个关键步骤进行研究。结合RP-HPLC法和ACE抑制活性测定，综合分析适合发酵牛肉火腿ACE抑制肽的提取方法。结合实际情况，选择出提取步骤简单、经济实用、提取的多肽ACE抑制活性最强的方法，确定为最适于发酵火腿ACE抑制肽的提方法，应用于后续研究中。3.以市售的A、B、C和D四种火腿为原料进行提取，用RP-HPLC检测，发现提取物中含有多肽。测定这四种火腿多肽提取物的ACE抑制活性，结果表明这些多肽均没有显示出ACE抑制活性。而本实验室开发的发酵牛肉火腿多肽提取物是具有ACE抑制活性的，活性达80%。4.发酵牛肉火腿中提取的ACE抑制肽的热处理、室温储存和模拟胃肠道消化稳定性研究。结果表明，发酵牛肉火腿中提取的ACE抑制肽，在50、72、85和100℃处理5min和100℃处理5、10、20和40min后，处理组和对照组的ACE抑制活性无显着差异。在室温下储存2天，处理组和对照组ACE抑制活性也无显着差异（P>0.05），但储存至3天，它的ACE抑制活性显着低于对照组（P <0.05），其后储藏时间对提取物的ACE抑制活性无显着影响。ACE抑制肽经体外模拟胃肠道消化后，其抑制活性与对照组无显着差异。5.提取实验室开发的发酵牛肉火腿中ACE抑制肽，利用RP-HPLC对提取物进行检测和分离，收集疑似为具有ACE抑制活性的特殊峰，即峰A和B。ACE抑制活性测定结果显示，峰A和B的ACE抑制活性分别为69和33%。采用制备型反向高效液相色谱对这两个峰进行分离，冻干后重溶于去离子水中，用于氨基酸序列鉴定。经质谱鉴定，组分A中的多肽可能是环肽，由四个亮氨酸（Leu）或异亮氨酸（Ile）呈环状连接，组分B中的多肽可能为亮氨酸（Leu）或异亮氨酸（Ile）脱水缩合而成的二肽。
二、采用控制酶解法从罗非鱼肉中制备血管紧张素转化酶抑制肽（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、采用控制酶解法从罗非鱼肉中制备血管紧张素转化酶抑制肽（论文提纲范文）
（1）牡蛎多肽提取工艺的建立及其对RAW264.7巨噬细胞免疫调节作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩写词表 |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 生物活性肽的研究进展 |
| 1.1 生物活性肽 |
| 1.1.1 抗氧化肽 |
| 1.1.2 抗高血压肽 |
| 1.1.3 抗癌生物活性肽 |
| 1.1.4 抗糖尿病肽 |
| 1.1.5 免疫调节活性肽 |
| 1.2 生物活性肽免疫调节的研究 |
| 1.2.1 生物活性肽对巨噬细胞的影响 |
| 1.2.2 生物活性肽对炎症介质的影响 |
| 1.3 生物活性肽与免疫活性调节机制相关的通路 |
| 1.3.1 MAPK通路 |
| 1.3.2 NF-κB通路 |
| 第二章 生物活性肽的制备与分离研究进展 |
| 2.1 生物活性肽的制备工艺研究 |
| 2.1.1 酶解法 |
| 2.1.2 微生物发酵法 |
| 2.1.3 化学合成法 |
| 2.2 生物活性肽的分离纯化 |
| 2.2.1 超滤法 |
| 2.2.2 色谱法 |
| 2.3 牡蛎的研究现状 |
| 2.3.1 氨基酸、多肽、蛋白质 |
| 2.3.2 微量元素与维生素 |
| 2.3.3 多糖 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 牡蛎多肽的初筛及提取工艺的优化 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 主要试剂与材料 |
| 1.1.2 主要仪器与设备 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 牡蛎的预处理 |
| 1.2.2 牡蛎多肽的制备 |
| 1.2.3 超滤法分离粗提液 |
| 1.2.4 RAW264.7 细胞培养 |
| 1.2.5 制备牡蛎免疫活性肽最佳酶种的筛选 |
| 1.2.6 水解度的测定 |
| 1.2.7 单因素法优化蛋白酶酶解牡蛎的提取工艺 |
| 1.2.8 响应面法优化蛋白酶酶解牡蛎的提取工艺 |
| 1.2.9 数据统计分析 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 制备免疫活性肽最佳酶种的筛选 |
| 1.3.2 单因素实验结果 |
| 1.3.3 响应面实验 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 牡蛎多肽AOP理化性质的检测 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要试剂与材料 |
| 2.1.2 主要仪器与设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 紫外全波长扫描 |
| 2.2.2 傅里叶红外光谱分析 |
| 2.2.3 相对分子质量分布测定 |
| 2.2.4 LC-MS/MS多肽鉴定 |
| 2.2.5 水解氨基酸组成分析 |
| 2.2.6 游离氨基酸分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 紫外扫描结果 |
| 2.3.2 傅里叶红外光谱分析结果 |
| 2.3.3 相对分子质量分布结果 |
| 2.3.4 LC-MS/MS多肽序列鉴定结果 |
| 2.3.5 水解氨基酸组成结果 |
| 2.3.6 游离氨基酸组成结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 牡蛎多肽AOP对 RAW264.7 细胞免疫活性的影响及调节机制的研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 主要试剂与材料 |
| 3.1.2 主要仪器与设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 AOP对 RAW264.7 细胞增殖率的影响 |
| 3.2.2 AOP对 RAW264.7 细胞吞噬中性红的影响 |
| 3.2.3 AOP对 RAW264.7 细胞分泌NO的影响 |
| 3.2.4 AOP对 RAW264.7 细胞分泌细胞因子的影响 |
| 3.2.5 AOP对 RAW264.7 细胞激活MAPK信号通路的检测 |
| 3.2.6 数据统计分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 AOP对 RAW264.7 细胞增殖率的影响 |
| 3.3.2 AOP对 RAW264.7 吞噬能力的影响 |
| 3.3.3 AOP对 RAW264.7 细胞分泌NO的影响 |
| 3.3.4 细胞中总RNA的提取 |
| 3.3.5 AOP对 RAW264.7 细胞的细胞因子基因表达水平的影响 |
| 3.3.6 AOP对 RAW264.7 细胞MAPK信号通路的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（2）大黄鱼ACE抑制肽的制备及其抑制机制初探（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 符号说明 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 概述 |
| 1.2 课题来源 |
| 1.3 降血压药物研究现状 |
| 1.4 ACE抑制肽概述 |
| 1.4.1 生物活性肽简介 |
| 1.4.2 ACE抑制肽的研究进展 |
| 1.4.3 ACE抑制肽的作用机制及其活性评价方法 |
| 1.4.4 ACE抑制肽的制备方法 |
| 1.4.5 ACE抑制肽的分离纯化方法 |
| 1.4.6 ACE抑制肽的构效关系研究进展 |
| 1.5 大黄鱼研究现状 |
| 1.6 课题研究内容 |
| 1.6.1 ACE抑制肽的制备 |
| 1.6.2 ACE抑制肽的分离纯化 |
| 1.6.3 ACE抑制肽的分子对接 |
| 1.7 研究意义 |
| 1.8 课题创新点 |
| 第2章 大黄鱼ACE抑制肽的提取 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与试剂 |
| 2.3 实验仪器与设备 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 大黄鱼鱼肉酶解产物制备 |
| 2.4.2 酶解条件优化 |
| 2.4.3 ACE抑制率的测定 |
| 2.4.4 ACE抑制肽IC_(50)值的测定 |
| 2.4.5 水解度的测定 |
| 2.4.6 氨基酸组成分析 |
| 2.5 结果与讨论 |
| 2.5.1 酶解大黄鱼蛋白源的筛选结果 |
| 2.5.2 单因素酶解实验结果 |
| 2.5.3 正交优化酶解实验结果 |
| 2.5.4 氨基酸组成分析 |
| 2.6 本章小结 |
| 第3章 大黄鱼ACE抑制肽的分离纯化与鉴定 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与试剂 |
| 3.3 实验仪器与设备 |
| 3.4 实验方法 |
| 3.4.1 分子量分布的测定 |
| 3.4.2 葡聚糖凝胶(Sephadex G-25)分离纯化 |
| 3.4.3 组分F3 结构鉴定 |
| 3.4.4 质谱数据处理 |
| 3.5 结果与讨论 |
| 3.5.1 分子量分布 |
| 3.5.2 Sephadex G-25 分离 |
| 3.5.3 F3 中ACE抑制肽的筛选与结构鉴定 |
| 3.6 本章小结 |
| 第4章 基于分子对接的抑制机理研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与试剂 |
| 4.3 实验仪器与设备 |
| 4.4 实验方法 |
| 4.4.1 ACE抑制肽的合成 |
| 4.4.2 合成肽活性检测 |
| 4.4.3 ACE抑制肽与ACE分子对接 |
| 4.5 结果与讨论 |
| 4.5.1 合成肽的ACE抑制率 |
| 4.5.2 对接方法验证 |
| 4.5.3 活性位点分析 |
| 4.5.4 抑制机理分析 |
| 4.6 本章小结 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士期间的研究成果 |
（3）家蚕丝素蛋白ACE抑制肽的制备及性能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 高血压的概述 |
| 1.2 血管紧张素转化酶(ACE)及其抑制剂研究进展 |
| 1.2.1 血管紧张素转化酶及其对血压的调节作用 |
| 1.2.2 食源性ACE抑制多肽的种类及来源进展 |
| 1.2.3 ACE抑制肽的制备方法 |
| 1.2.4 ACE抑制肽的分离纯化 |
| 1.2.5 降血压肽的构效关系 |
| 1.3 分子对接研究ACE抑制肽的降压机理 |
| 1.4 家蚕丝素蛋白的研究进展 |
| 1.4.1 家蚕丝素蛋白的研究 |
| 1.4.2 家蚕丝素肽的研究 |
| 1.5 本研究的主要内容 |
| 第2章 丝素蛋白ACE抑制肽的制备及其工艺优化 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 试验材料与仪器 |
| 2.2.1 材料与试剂 |
| 2.2.2 仪器与设备 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 丝素蛋白的提取及其氨基酸分析 |
| 2.3.2 丝素蛋白酶解用酶的筛选 |
| 2.3.3 水解度的测定 |
| 2.3.4 ACE抑制活性的测定 |
| 2.3.5 ACE抑制肽浓度的测定 |
| 2.3.6 丝素蛋白酶解工艺优化 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 测定蛋白质的标准曲线 |
| 2.4.2 丝素蛋白氨基酸分析 |
| 2.4.3 蛋白酶的筛选 |
| 2.4.4 单因素影响试验结果与分析 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 丝素蛋白ACE抑制肽的超滤分离及其稳定性研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 试验材料与仪器 |
| 3.2.1 材料与试剂 |
| 3.2.2 仪器与设备 |
| 3.3 试验方法 |
| 3.3.1 超滤原液制备 |
| 3.3.2 超滤分离 |
| 3.3.3 RP-HPLC分析 |
| 3.3.4 ACE抑制活性的测定 |
| 3.3.5 ACE抑制肽的稳定性实验 |
| 3.3.6 丝素蛋白ACE抑制肽对ACE紫外光谱的影响 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 超滤对ACE抑制活性的影响 |
| 3.4.2 ACE抑制肽对ACE紫外光谱的影响 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 丝素蛋白ACE抑制肽的分离纯化及结构鉴定 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 试验材料与仪器 |
| 4.2.1 材料与试剂 |
| 4.2.2 主要仪器与设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 制备丝素蛋白超滤液 |
| 4.3.2 DEAE-52柱层析 |
| 4.3.3 Sephadex G-50凝胶分析 |
| 4.3.4 Sephadex G-15凝胶分析 |
| 4.3.5 RP-HPLC分析 |
| 4.3.6 ACE抑制活性的测定 |
| 4.3.7 液-质联用分析 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 DEAE-52纤维树脂分离丝素ACE抑制肽的纯化效果 |
| 4.4.2 凝胶层析分离丝素蛋白ACE抑制肽 |
| 4.4.3 RP-HPLC分析 |
| 4.4.4 液质联用分析 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 丝素蛋白ACE抑制肽降血压机理研究 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 丝素蛋白ACE抑制肽分子配体的三维模型构建 |
| 5.2.2 受体酶分子的模型构建 |
| 5.2.3 配体与受体分子的对接方法 |
| 5.2.4 ACE抑制肽的半数抑制浓度(IC50)的测定 |
| 5.2.5 丝素蛋白多肽对ACE抑制动力学研究 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 ACE三维构象与ACE抑制剂Lisinopril的结构分析 |
| 5.3.2 丝素蛋白ACE抑制肽与ACE活性中心对接模式及结合区域和结合能 |
| 5.3.3 不同多肽组分的半数抑制浓度 |
| 5.3.4 抑制作用类型 |
| 5.4 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 本研究受资助的项目 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（4）罗非鱼皮明胶源血管紧张素转换酶抑制肽的制备及活性分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 罗非鱼及其加工现状 |
| 1.1.1 罗非鱼简介 |
| 1.1.2 罗非鱼副产物的加工利用 |
| 1.1.3 鱼皮明胶 |
| 1.2 高血压 |
| 1.2.1 高血压的危害及现状 |
| 1.2.2 高血压的原因 |
| 1.3 食源性ACEI肽的概述 |
| 1.3.1 食源性ACEI肽的研究现状 |
| 1.3.1.1 乳蛋白来源的ACEI肽 |
| 1.3.1.2 鱼蛋白来源的ACEI肽 |
| 1.3.1.3 植物蛋白来源的ACEI肽 |
| 1.3.1.4 其他食品来源的ACEI肽 |
| 1.3.2 食源性ACEI肽的活性测定方法 |
| 1.3.3 食源性ACEI肽的制备方法 |
| 1.3.3.1 直接提取法 |
| 1.3.3.2 酶解法 |
| 1.3.3.3 发酵法 |
| 1.3.4 食源性ACEI肽的纯化方法 |
| 1.3.4.1 超滤 |
| 1.3.4.2 大孔吸附树脂 |
| 1.3.4.3 离子交换层析 |
| 1.3.4.4 凝胶色谱层析 |
| 1.3.4.5 反相高效液相色谱 |
| 1.4 分子对接在ACEI肽中的应用 |
| 1.5 研究意义及内容 |
| 1.5.1 研究意义 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 第二章 罗非鱼皮明胶水解产物的制备 |
| 2.1 材料与仪器 |
| 2.1.1 实验材料与试剂 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 ACE酶液的制备 |
| 2.2.2 ACE酶活力测定方法 |
| 2.2.3 细胞的培养 |
| 2.2.4 通过GI消化和Caco-2细胞制备TSG水解产物 |
| 2.2.4.1 体外模拟GI消化TSG |
| 2.2.4.2 利用Caco-2细胞制备TSG水解产物 |
| 2.2.5 TSG酶解产物水解度的测定 |
| 2.2.6 ACEI活性的测定 |
| 2.3 数据处理与分析 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 ACE酶活力的测定 |
| 2.4.2 TSG水解产物水解度(DH)的变化 |
| 2.4.3 TSG水解产物的ACEI活性分析 |
| 2.4.4 Caco-2细胞制备TSG水解产物的结果分析 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 ACEI肽的分离纯化及活性分析 |
| 3.1 材料与仪器 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 实验主要试剂 |
| 3.1.3 实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 葡聚糖凝胶Sephadex G-25分离纯化 |
| 3.2.2 ACEI肽的反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析 |
| 3.2.3 高分辨质谱鉴定ACEI肽 |
| 3.2.4 降压肽ACEI活性的测定 |
| 3.2.4.1 降压肽的体外ACEI活性的测定 |
| 3.2.4.2 ACEI肽的体内降血压实验 |
| 3.3 数据处理与分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 ACEI肽的凝胶柱层析分离结果 |
| 3.4.2 RP-HPLC分析组分P2 |
| 3.4.3 组分P2-10和P2-12的分子量分布及结构鉴定 |
| 3.4.4 降压肽的ACEI活性分析 |
| 3.4.4.1 ACEI肽的体外ACEI活性分析 |
| 3.4.4.2 ACEI肽对原发性高血压大鼠(SHR)血压的影响 |
| 3.4.5 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 ACEI肽对ACE的抑制动力学及结构活性关系研究 |
| 4.1 材料与仪器 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 实验主要试剂 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 马尿酸含量的测定 |
| 4.2.2 降压肽的ACEI动力学参数 |
| 4.2.3 分子对接 |
| 4.3 数据处理与分析 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 马尿酸标准曲线的绘制 |
| 4.4.2 ACEI肽的抑制动力学 |
| 4.4.3 关键肽与ACE之间的分子对接模拟 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 全文结论 |
| 5.2 创新点 |
| 5.3 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
（5）日本黄姑鱼皮活性肽的制备及其免疫作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1.1 海洋生物活性肽 |
| 1.1.1 海洋生物活性肽的分类 |
| 1.1.2 海洋生物活性肽的作用 |
| 1.1.3 海洋生物活性肽的制备方法 |
| 1.2 免疫系统与免疫疾病 |
| 1.2.1 免疫系统 |
| 1.2.2 免疫疾病 |
| 1.3 日本黄姑鱼 |
| 1.4 研究目的和意义 |
| 1.5 研究内容 |
| 1.5.1 主要研究内容 |
| 1.5.2 研究技术路线 |
| 第二章 日本黄姑鱼皮活性肽的酶解制备工艺研究 |
| 2.1 材料与仪器 |
| 2.1.1 材料与试剂 |
| 2.1.2 仪器与设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 RAW264.7 细胞培养 |
| 2.2.2 日本黄姑鱼皮活性肽的制备流程 |
| 2.2.3 日本黄姑鱼皮活性肽酶解工艺的优化 |
| 2.2.4 数据处理 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 五种蛋白酶酶解结果 |
| 2.3.2 中性蛋白酶酶解单因素实验结果 |
| 2.3.3 中性蛋白酶酶解响应面实验结果 |
| 2.3.4 超滤结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 日本黄姑鱼皮活性肽对巨噬细胞RAW264.7 的免疫调节作用 |
| 3.1 材料与仪器 |
| 3.1.1 材料与试剂 |
| 3.1.2 仪器与设备 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 日本黄姑鱼皮活性肽的制备 |
| 3.2.2 细胞培养 |
| 3.2.3 RAW264.7 细胞增殖实验 |
| 3.2.4 细胞形态变化实验 |
| 3.2.5 中性红吞噬实验 |
| 3.2.6 NJSAP对 RAW264.7 细胞NO分泌量的影响 |
| 3.2.7 NJSAP对 RAW264.7 细胞TNF- α、IL-6、IL-12 分泌量的影响 |
| 3.2.8 数据处理 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 RAW264.7 细胞增殖实验结果 |
| 3.3.2 细胞形态变化结果 |
| 3.3.3 中性红吞噬实验结果 |
| 3.3.4 NJSAP对 RAW264.7 细胞NO分泌量的影响 |
| 3.3.5 NJSAP对 RAW264.7 细胞TNF- α、IL-6、IL-12 分泌量的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 日本黄姑鱼皮活性肽对环磷酰胺诱导免疫抑制小鼠免疫功能的影响 |
| 4.1 材料与仪器 |
| 4.1.1 材料与试剂 |
| 4.1.2 仪器与设备 |
| 4.1.3 实验动物 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 NJSAP的制备 |
| 4.2.2 细胞培养 |
| 4.2.3 实验小鼠的分组、造模及给药 |
| 4.2.4 小鼠体重的变化 |
| 4.2.5 脏器指数的变化 |
| 4.2.6 ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验 |
| 4.2.7 迟发型变态反应(Delayed type hypersensitivity,DTH) |
| 4.2.8 半数溶血值(HC50)的测定 |
| 4.2.9 腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验 |
| 4.2.10 血清中TNF- α含量的测定 |
| 4.2.11 血清中IgG、IgA、IgM含量的测定 |
| 4.2.12 血清中T-AOC、MDA含量及SOD、CAT活力的测定 |
| 4.2.13 脾脏HE染色 |
| 4.2.14 数据处理 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 小鼠体重的变化 |
| 4.3.2 脏器指数的变化 |
| 4.3.3 ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验结果 |
| 4.3.4 迟发型变态反应(Delayed type hypersensitivity,DTH)结果 |
| 4.3.5 半数溶血值(HC50)的测定结果 |
| 4.3.6 腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验结果 |
| 4.3.7 血清中TNF- α含量的测定结果 |
| 4.3.8 血清中IgG、IgA、IgM含量的测定结果 |
| 4.3.9 血清中T-AOC、MDA含量及SOD、CAT活力的测定结果 |
| 4.3.10 脾脏HE染色结果 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略语 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 |
（6）油棕粕谷蛋白-2血管紧张素转化酶抑制肽制备与降血压活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 油棕植物学特性及应用现状 |
| 1.1.1 油棕学特性 |
| 1.1.2 棕榈油及其副产物开发利用状况 |
| 1.2 油棕蛋白质研究进展 |
| 1.2.1 油棕粕与油棕蛋白质的营养价值 |
| 1.2.2 油棕蛋白质的组成和分类 |
| 1.2.3 油棕粕蛋白质的提取与分离 |
| 1.2.4 油棕粕蛋白质的功能特性与活性 |
| 1.3 食源性ACE抑制肽研究现状 |
| 1.3.1 高血压 |
| 1.3.2 血压调节机制及重要的调节因子 |
| 1.3.3 食源性ACE抑制肽的研究现状 |
| 1.4 本课题的立题意义及主要研究内容 |
| 1.4.1 立题意义 |
| 1.4.2 主要研究内容 |
| 第二章 油棕组分蛋白的分离纯化、理化性质、功能特性、抗氧化性及ACE抑制活性 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料与试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 油棕粕中各组分蛋白质的含量 |
| 2.2 油棕粕各组分蛋白质的氨基酸组成和营养价值分析 |
| 2.3 油棕粕各组分蛋白质的亚基组成和分子量 |
| 2.4 油棕粕组分蛋白的凝胶色谱分析 |
| 2.5 油棕粕组分蛋白的热力学性质 |
| 2.6 油棕粕各组分蛋白的乳化性、起泡性和黏度 |
| 2.7 油棕粕组分蛋白的抗氧化活性 |
| 2.8 对ACE活性的抑制能力 |
| 本章小结 |
| 第三章 油棕粕谷蛋白-2酶解工艺的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料与试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 酶的筛选 |
| 2.2 不同预处理对油棕粕蛋白水解度和ACE抑制活性的影响 |
| 2.3 蛋白酶水解油棕粕谷蛋白-2单因素试验 |
| 2.4 响应面中心设计法优化复合蛋白酶水解油棕粕蛋白 |
| 本章小结 |
| 第四章 酶解工艺对油棕粕谷蛋白-2的改性作用 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料与试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 酶解工艺对PKEGH氨基酸和营养价值的影响 |
| 2.2 不同水解度的PKEGH的SDS-PAGE分析 |
| 2.3 不同水解度PKEGH的RP-HPLC分析 |
| 2.4 酶解工艺对PKEG微观表面结构的影响 |
| 2.5 酶解工艺对PKEG热稳定性的影响 |
| 2.6 酶解工艺对PKEG功能特性的影响 |
| 2.7 PKEGH对ACE的抑制活性 |
| 2.8 PKEGH的抗氧化性 |
| 本章小结 |
| 第五章 油棕粕谷蛋白-2 ACE抑制肽的分离、体内降血压活性验证与结构鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料与试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 PKEGH的超滤分离和Sephadex G-25层析柱分离效果分析 |
| 2.2 PKEGH-Ⅲ在SHR体内的降血压活性 |
| 2.3 油棕粕谷蛋白-2 ACE抑制肽的凝胶色谱分离 |
| 2.4 油棕粕谷蛋白-2 ACE抑制肽的氨基酸序列鉴定 |
| 2.5 油棕粕谷蛋白-2 ACE抑制肽对SHR血压的影响 |
| 2.6 油棕粕谷蛋白-2 ACE抑制肽的活性和构效关系探讨 |
| 本章小结 |
| 第六章 油棕粕谷蛋白-2ACE抑制肽稳定性及抑制动力学研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料与试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 化学合成ACE抑制肽的活性 |
| 2.2 油棕粕谷蛋白-2 ACE抑制肽的抑制剂类型分析 |
| 2.3 油棕粕谷蛋白-2 ACE抑制肽的酶促动力学研究 |
| 2.4 油棕粕谷蛋白-2 ACE抑制肽对体内消化酶的稳定性 |
| 2.5 部分加工处理方式对油棕粕谷蛋白-2 ACE抑制肽稳定性的影响 |
| 本章小结 |
| 第七章 油棕粕谷蛋白-2降血压肽对人脐静脉内皮细胞的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料与试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 人脐静脉内皮细胞的形态学观察 |
| 2.2 对人脐静脉内皮细胞增殖的影响 |
| 2.3 对人脐静脉内皮细胞周期的影响 |
| 2.4 对人脐静脉内皮细胞内ET-1的影响 |
| 2.5 对ACE/ACE2 mRNA表达的影响 |
| 2.6 对人脐静脉内皮细胞内ET-1 mRNA表达的影响 |
| 2.7 对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用 |
| 2.8 对超氧根离子自由基的清除能力 |
| 2.9 对羟基自由基的清除能力 |
| 本章小结 |
| 全文结论、创新点与展望 |
| 一、全文结论 |
| 二、创新点 |
| 三、展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间已取得的成果 |
（7）沙丁鱼血管紧张素转化酶抑制肽的制备、分离纯化及功效研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 高血压的概述 |
| 1.1.1 高血压的定义、分类及现状 |
| 1.1.2 高血压的治疗及药物不良反应 |
| 1.1.3 血管紧张素转化酶（ACE）的作用机制 |
| 1.2 食源性ACE抑制肽的研究进展 |
| 1.2.1 食源性ACE抑制肽的研发现状 |
| 1.2.2 ACE抑制活性的测定方法 |
| 1.3 沙丁鱼的概述 |
| 1.3.1 沙丁鱼等鱼类蛋白质的简介 |
| 1.3.2 沙丁鱼等鱼类蛋白质的生物活性及开发现状 |
| 1.4 立题背景与研究内容 |
| 第二章 沙丁鱼ACE抑制肽的酶解工艺研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与设备 |
| 2.2.1 主要原料与试剂 |
| 2.2.2 主要仪器设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 原料的预处理 |
| 2.3.2 蛋白酶的筛选 |
| 2.3.3 酶活力的测定 |
| 2.3.4 水解度的测定 |
| 2.3.5 样品ACE抑制率的测定 |
| 2.3.6 酶解条件的优化 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 酶解沙丁鱼肉的蛋白酶组合筛选结果 |
| 2.4.2 木瓜蛋白酶的单因素实验和正交实验 |
| 2.4.3 碱性蛋白酶的单因素实验和正交实验 |
| 2.4.4 酶解工艺优化前后DH和ACE抑制率的对比 |
| 2.4.5 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 沙丁鱼ACE抑制肽的分离纯化 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与设备 |
| 3.2.1 主要原料与试剂 |
| 3.2.2 主要仪器设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 样品ACE抑制率的测定 |
| 3.3.2 沙丁鱼酶解液的超滤分离 |
| 3.3.3 葡聚糖凝胶Sephadex G-25和G-15的柱层析 |
| 3.3.4 组分RP-HPLC分析 |
| 3.3.5 氨基酸组成分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 超滤后酶解液ACE抑制活性的变化 |
| 3.4.2 凝胶柱层析分离纯化结果 |
| 3.4.3 组分P2-1、P2-2、P3-2 的RP-HPLC分析结果 |
| 3.4.4 组分P2-1、P2-2、P3-2 的氨基酸组成分析结果 |
| 3.4.5 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 沙丁鱼ACE抑制肽的体内降压效果研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与设备 |
| 4.2.1 主要原料与试剂 |
| 4.2.2 主要仪器与设备 |
| 4.2.3 其他 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 实验动物及饲养 |
| 4.3.2 血压的测量 |
| 4.3.3 脏器系数 |
| 4.3.4 脂质过氧化状态评价 |
| 4.3.5 血清ACE活性和ANG-II含量的测定 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 单次灌胃和长期灌胃的收缩压测量结果 |
| 4.4.2 脏器系数的统计 |
| 4.4.3 组织和血清中的MDA含量 |
| 4.4.4 血清ACE活力和ANG-II含量测定结果 |
| 4.4.5 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 5.3 创新 |
| 参考文献 |
| 在校期间论文发表情况 |
| 致谢 |
（8）羊胎盘提取残留物高质化利用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 胎盘的研究进展 |
| 1.1.1 胎盘的概述 |
| 1.1.2 胎盘的加工应用研究 |
| 1.1.3 胎盘提取物的应用研究进展 |
| 1.1.4 胎盘提取残留物的应用研究 |
| 1.1.5 胎盘应用中存在的问题 |
| 1.1.6 羊胎盘的应用研究 |
| 1.2 生物活性肽的研究进展 |
| 1.2.1 生物活性肽的概述 |
| 1.2.2 生物活性肽的活性功能 |
| 1.2.3 生物活性肽的制备方法 |
| 1.3 微生物发酵酶解蛋白质的研究进展 |
| 1.4 立项依据 |
| 1.5 主要研究内容及技术路线 |
| 1.5.1 主要研究内容 |
| 1.5.2 技术路线 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料与主要试剂 |
| 2.2 主要的仪器与设备 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 原料预处理 |
| 2.3.2 羊胎盘提取残余物的主要成分测定 |
| 2.3.3 羊胎盘提取残余物的氨基酸含量AAS测定 |
| 2.3.4 羊胎盘提取残余物发酵菌株的筛选 |
| 2.3.5 酶活力的测定 |
| 2.3.6 发酵酶解工艺的确定 |
| 2.3.7 羊胎盘提取残余物酶解物的营养特性与稳定性分析 |
| 2.3.8 羊胎盘提取残余物发酵酶解物在体外模拟消化系统中的稳定性分析 |
| 2.3.9 两种干燥方式制备羊胎盘提取残余物蛋白粉 |
| 2.3.10 羊胎盘提取残余物发酵酶解物的超滤处理 |
| 2.3.11 羊胎盘提取残余物发酵酶解物各组分的体外生物活性分析 |
| 2.3.12 测定方法 |
| 2.3.13 数据处理 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 羊胎盘提取残余物的营养价值评价 |
| 3.2 不同菌种对羊胎盘提取残余物发酵的酶解效果 |
| 3.2.1 不同微生物发酵羊胎盘提取残留物多肽产率、酶活与时间的关系 |
| 3.2.2 微生物发酵羊胎盘提取残留物产物的活性实验 |
| 3.2.3 发酵过程中对底物的侵蚀及酶解作用 |
| 3.3 黑曲霉发酵羊胎盘提取残余物制备抗氧化肽 |
| 3.3.1 黑曲霉发酵羊胎盘提取残留物制备抗氧化肽单因素实验 |
| 3.3.2 黑曲霉发酵羊胎盘提取残留物制备抗氧化肽响应面优化与分析 |
| 3.3.3 胎盘蛋白肽抗氧化活性的测定 |
| 3.3.4 黑曲霉发酵酶解产物稳定性的研究 |
| 3.3.5 胎盘多肽不同超滤组分的生物活性分析 |
| 3.4 枯草芽孢杆菌发酵羊胎盘提取残余物制备免疫活性肽 |
| 3.4.1 发酵羊胎盘提取残留物制备免疫活性肽的响应面优化及分析 |
| 3.4.2 胎盘蛋白肽免疫活性的测定 |
| 3.4.3 酶解产物稳定性的研究 |
| 3.4.4 不同超滤组分免疫活性分析 |
| 4 讨论与结论 |
| 4.1 讨论 |
| 4.1.1 不同微生物发酵对羊胎盘提取残余物的酶解分析 |
| 4.1.2 不同酶解方法对制备羊胎盘提取残余物生物活性酶解产物的分析 |
| 4.1.3 羊胎盘提取残余物发酵酶解产物的生物活性稳定性分析 |
| 4.1.4 羊胎盘提取残余物发酵酶解产物的分离纯化及含量分布 |
| 4.2 结论 |
| 4.3 论文创新点 |
| 5 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
（9）牛、羊乳酪蛋白源DPP-Ⅳ抑制肽的制备、鉴定及抑制机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 糖尿病与二肽基肽酶Ⅳ |
| 1.1.1 糖尿病概述 |
| 1.1.2 Ⅱ型糖尿病的治疗策略及药物 |
| 1.1.3 胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ) |
| 1.2 DPP-Ⅳ抑制剂 |
| 1.2.1 DPP-Ⅳ抑制剂的作用机理 |
| 1.2.2 化学合成DPP-Ⅳ抑制剂 |
| 1.2.3 化学合成DPP-Ⅳ抑制剂的安全问题 |
| 1.2.4 DPP-Ⅳ抑制剂体外的评价方法 |
| 1.3 生物活性肽及DPP-Ⅳ抑制肽 |
| 1.3.1 生物活性肽概述 |
| 1.3.2 生物活性肽制备方法 |
| 1.3.3 生物活性肽的分离纯化及分析方法 |
| 1.3.4 生物信息学分析与生物活性肽研究 |
| 1.3.5 生物活性肽的抗胃肠消化及吸收研究 |
| 1.3.6 食源性DPP-Ⅳ抑制活性肽 |
| 1.4 立题依据及意义 |
| 1.5 研究内容 |
| 第二章 生物信息学预测牛、羊乳酪蛋白DPP-Ⅳ抑制肽 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 主要试剂 |
| 2.2.2 主要设备 |
| 2.2.3 文献已报道DPP-Ⅳ抑制肽序列的搜集和分析 |
| 2.2.4 牛、羊乳酪蛋白一级序列的比较分析 |
| 2.2.5 生物信息学预测牛、羊乳酪蛋白中DPP-Ⅳ抑制序列及潜能 |
| 2.2.6 胰蛋白酶模拟水解牛、羊乳酪蛋白 |
| 2.2.7 乳酪蛋白源肽的化学固相合成 |
| 2.2.8 合成多肽的DPP-Ⅳ体外抑制活性的测定 |
| 2.2.9 数据处理及统计分析 |
| 2.3 结果和分析 |
| 2.3.1 DPP-Ⅳ抑制肽的结构特性 |
| 2.3.2 生物信息学预测比较牛、羊乳酪蛋白的DPP-Ⅳ抑制序列及潜能 |
| 2.3.3 DPP-Ⅳ抑制体外活性测定方法的优化 |
| 2.3.4 牛、羊乳酪蛋白的胰蛋白酶模拟水解及潜在DPP-Ⅳ抑制序列的筛选验证 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 乳酪蛋白DPP-Ⅳ抑制肽的酶法制备及组成特性 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 主要试剂 |
| 3.2.3 主要设备 |
| 3.2.4 乳酪蛋白的制备 |
| 3.2.5 牛、羊乳酪蛋白DPP-Ⅳ抑制水解产物的酶法制备 |
| 3.2.6 乳酪蛋白酶解产物水解度的测定 |
| 3.2.7 乳酪蛋白酶解产物DPP-Ⅳ抑制活性的测定 |
| 3.2.8 Tricine-SDS-PAGE电泳比较牛、羊乳酪蛋白酶解产物的组成 |
| 3.2.9 RP-HPLC分析牛、羊乳酪蛋白酶解产物组成 |
| 3.2.10 牛、羊乳酪蛋白酶解产物的超滤分离 |
| 3.2.11 牛、羊乳酪蛋白酶解产物不同超滤组分的酶抑制特性分析 |
| 3.2.12 数据处理和统计分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 自制牛、羊乳酪蛋白蛋白质组成比较 |
| 3.3.2 牛、羊乳酪蛋白DPP-Ⅳ抑制活性肽的酶法制备 |
| 3.3.3 牛、羊乳酪蛋白水解产物组成特性的比较 |
| 3.3.4 牛、羊乳酪蛋白水解产物超滤组分的DPP-Ⅳ抑制活性分析 |
| 3.3.5 牛、羊乳酪蛋白水解产物超滤组分的DPP-Ⅳ抑制特性分析 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 DPP-Ⅳ抑制肽的分离分析和鉴定 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 主要试剂 |
| 4.2.3 主要仪器设备 |
| 4.2.6 高效液相色谱(RP-HPLC)验证二维薄层色谱分离效果 |
| 4.2.7 羊乳酪蛋白多肽的RP-HPLC半制备分离 |
| 4.2.8 羊乳酪蛋白多肽的LC-ESI-MS/MS分析 |
| 4.2.9 化学固相合成多肽及其DPP-Ⅳ抑制活性评价 |
| 4.2.10 牛、羊乳酪蛋白水解物DPP-Ⅳ抑制分离组分及活性序列的比较 |
| 4.2.11 TLC/RP-HPLC联用色谱方法分离蛋白水解物的适用性 |
| 4.2.12 数据统计分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.3 RP-HPLC验证二维薄层色谱分离效果 |
| 4.3.4 羊乳酪蛋白DPP-Ⅳ抑制活性肽的质谱鉴定 |
| 4.3.5 牛乳酪蛋白DPP-Ⅳ抑制活性肽的TLC/RP-HPLC联用分离及质谱鉴定 |
| 4.3.6 TLC/RP-HPLC联用色谱方法分离蛋白水解物活性组分的适用性 |
| 4.3.7 合成多肽的DPP-Ⅳ抑制活性评价及构效分析 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 DPP-Ⅳ抑制活性肽的抑制特性和抑制机理 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 主要材料 |
| 5.2.2 主要试剂 |
| 5.2.3 主要设备 |
| 5.2.4 DPP-Ⅳ抑制活性肽的理化性质分析 |
| 5.2.5 DPP-Ⅳ酶抑制动力学研究 |
| 5.2.6 DPP-Ⅳ酶对合成活性肽的降解作用 |
| 5.2.7 活性肽组合对DPP-Ⅳ酶抑制作用的相互影响 |
| 5.2.8 合成活性肽对猪和人源DPP-Ⅳ酶抑制作用的比较研究 |
| 5.2.9 分子对接 |
| 5.2.10 数据处理及统计分析 |
| 5.3 结果和分析 |
| 5.3.1 DPP-Ⅳ抑制肽的理化特性分析 |
| 5.3.2 DPP-Ⅳ抑制活性肽的酶抑制动力学分析 |
| 5.3.3 DPP-Ⅳ抑制肽对DPP-Ⅳ酶水解作用敏感性分析 |
| 5.3.4 不同抑制机制DPP-Ⅳ抑制肽之间的相互作用 |
| 5.3.5 合成肽对猪和人源DPP-Ⅳ酶抑制作用的比较研究 |
| 5.3.6 分子对接探讨抑制活性肽和DPP-Ⅳ酶的作用位点及方式 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 DPP-Ⅳ抑制肽的胃肠模拟消化吸收及对胰岛细胞功能研究 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 材料与方法 |
| 6.2.1 实验材料 |
| 6.2.2 主要试剂 |
| 6.2.3 主要设备 |
| 6.2.4 乳酪蛋白酶解产物和DPP-Ⅳ抑制肽的胃肠消化稳定性 |
| 6.2.5 DPP-Ⅳ抑制活性肽对小肠上皮细胞生长的影响 |
| 6.2.6 小肠上皮细胞对DPP-Ⅳ抑制活性肽的摄入 |
| 6.2.7 乳酪蛋白DPP-Ⅳ抑制水解产物对胰岛细胞的功能研究 |
| 6.2.8 数据统计分析 |
| 6.3 结果与讨论 |
| 6.3.1 乳酪蛋白酶解产物和DPP-Ⅳ抑制纯肽的抗胃肠消化研究 |
| 6.3.2 DPP-Ⅳ抑制活性肽对小肠上皮细胞生长的影响及其吸收性研究 |
| 6.3.3 乳酪蛋白水解产物对胰岛细胞的功能研究 |
| 6.4 本章小结 |
| 第七章 全文总结与展望 |
| 7.1 全文总结 |
| 7.2 创新点 |
| 7.3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 个人简介 |
（10）发酵牛肉火腿中ACE抑制肽的提取和鉴定（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 不同原料中多肽的提取方法研究现状 |
| 1.3 血管紧张素转化酶与高血压 |
| 1.4 国内外不同来源的生物活性肽研究现状 |
| 1.4.1 水产品生物活性肽研究现状 |
| 1.4.2 鸡蛋来源的生物活性肽研究现状 |
| 1.4.3 乳源的生物活性肽研究现状 |
| 1.4.4 蚕蛹源的生物活性肽研究现状 |
| 1.4.5 植物源的生物活性肽研究现状 |
| 1.4.6 动物源的生物活性肽研究现状 |
| 第二章 发酵牛肉火腿的制备及多肽提取方法的研究 |
| 2.1 试验材料与仪器 |
| 2.1.1 材料与试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 发酵剂的制备 |
| 2.2.2 火腿腌制液的制备 |
| 2.2.3 发酵牛肉火腿的加工 |
| 2.2.4 主要试剂的配置 |
| 2.2.5 发酵火腿中 ACE 抑制成分的提取方法 |
| 2.2.6 发酵火腿提取物中多肽的分离方法 |
| 2.2.7 RP‐HPLC 分析 |
| 2.2.8 体外 ACE 抑制活性测定 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 发酵牛肉火腿中 ACE 抑制成分初提方法的研究 |
| 2.3.2 发酵牛肉火腿的初提物中多肽分离方法的研究 |
| 2.3.3 RP‐HPLC 检测结果 |
| 2.3.4 发酵牛肉火腿多肽提取物的 ACE 抑制活性 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 几种火腿 ACE 抑制肽的提取及活性比较 |
| 3.1 试验材料与仪器 |
| 3.1.1 材料与试剂 |
| 3.1.2 主要仪器 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 发酵牛肉火腿中多肽的提取方法 |
| 3.2.2 几种火腿多肽提取物的 RP‐HPLC 检测 |
| 3.2.3 体外 ACE 抑制活性测定 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 几种火腿多肽提取物的 RP‐HPLC 检测结果 |
| 3.3.2 ACE 抑制活性测定结果 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 发酵牛肉火腿 ACE 抑制肽的稳定性研究 |
| 4.1 试验材料与仪器 |
| 4.1.1 材料与试剂 |
| 4.1.2 主要仪器 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 发酵牛肉火腿中多肽的提取 |
| 4.2.2 体外 ACE 抑制活性测定 |
| 4.2.3 发酵牛肉火腿 ACE 抑制肽的热处理稳定性分析 |
| 4.2.4 发酵牛肉火腿 ACE 抑制肽的常温储存稳定性分析 |
| 4.2.5 发酵牛肉火腿 ACE 抑制肽的消化稳定性分析 |
| 4.2.6 数据处理 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 热处理和时间对发酵火腿中多肽的 ACE 抑制肽活性的影响 |
| 4.3.2 室温储存对发酵火腿中多肽的 ACE 抑制肽活性的影响 |
| 4.3.3 体外消化对发酵火腿中多肽的 ACE 抑制活性的影响 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 发酵牛肉火腿 ACE 抑制肽的分离和鉴定 |
| 5.1 试验材料与仪器 |
| 5.1.1 材料与试剂 |
| 5.1.2 主要仪器 |
| 5.2 试验方法 |
| 5.2.1 发酵牛肉火腿中多肽的提取 |
| 5.2.2 多肽提取物的 RP‐HPLC 分离 |
| 5.2.3 体外 ACE 抑制活性测定 |
| 5.2.4 ACE 抑制肽的氨基酸序列鉴定 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 发酵牛肉火腿 ACE 抑制肽的 RP‐HPLC 分离 |
| 5.3.2 RP‐HPLC 分离组分的 ACE 抑制活性测定结果 |
| 5.3.3 分离组分中多肽的氨基酸序列测定结果 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 结论 |
| 6.1 主要结论 |
| 6.2 论文的创新性 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 个人情况 |
| 教育背景 |
| 科研经历 |
| 在学期间发表论文 |
四、采用控制酶解法从罗非鱼肉中制备血管紧张素转化酶抑制肽（论文参考文献）
- [1]牡蛎多肽提取工艺的建立及其对RAW264.7巨噬细胞免疫调节作用的研究[D]. 逯冠宏. 吉林大学, 2021(01)
- [2]大黄鱼ACE抑制肽的制备及其抑制机制初探[D]. 李雅思. 南昌大学, 2021
- [3]家蚕丝素蛋白ACE抑制肽的制备及性能研究[D]. 杨云梅. 江苏科技大学, 2019(03)
- [4]罗非鱼皮明胶源血管紧张素转换酶抑制肽的制备及活性分析[D]. 袁玲. 昆明理工大学, 2019(04)
- [5]日本黄姑鱼皮活性肽的制备及其免疫作用研究[D]. 董晓泽. 浙江海洋大学, 2019(02)
- [6]油棕粕谷蛋白-2血管紧张素转化酶抑制肽制备与降血压活性研究[D]. 郑亚军. 陕西师范大学, 2016(11)
- [7]沙丁鱼血管紧张素转化酶抑制肽的制备、分离纯化及功效研究[D]. 黄嘉成. 暨南大学, 2016(02)
- [8]羊胎盘提取残留物高质化利用研究[D]. 刘旺旺. 华南农业大学, 2016(03)
- [9]牛、羊乳酪蛋白源DPP-Ⅳ抑制肽的制备、鉴定及抑制机理研究[D]. 张颖. 中国农业大学, 2016(08)
- [10]发酵牛肉火腿中ACE抑制肽的提取和鉴定[D]. 韩冬雪. 黑龙江八一农垦大学, 2015(08)