一、牛精清蛋白及其作用（论文文献综述）
郑永富[1]（2017）在《奶牛X-Y精子特异性表达蛋白的筛选》文中研究表明研究奶牛X、Y精子特异性蛋白,可以为奶牛的性别控制、胚胎性别鉴定及性控疫苗研发技术提供理论依据。研究采用流式细胞仪分选西门塔尔奶牛精子,利用人工授精技术验证奶牛X、Y精子的分离效果,比较Trizol、TCA-丙酮、尿素盐酸胍三种蛋白裂解法,获得最优精子蛋白裂解效果;同时优化蛋白双向电泳关键参数,建立奶牛X、Y精子特异性蛋白双向电泳体系,筛选X-Y精子特异性表达蛋白,利用蛋白Q Exactive mass spectrometer质谱鉴定和生物信息学预测获得差异蛋白的定性和功能分析。结果如下:（1）流式细胞仪分离精子获得纯度达96%西门塔尔奶牛X、Y精子,实验室检测奶牛X精子、Y精子、常规精子组活率的精子活率（43.81%、41.49%、46.16%）与精子顶体完整率（56.54%、58.21%、58.10%）差异均不显着;X精子组19头青年母牛人工授精获得13头雌性犊牛,Y精子组20头青年母牛人工授精得到14头雄性犊牛,性别符合率为100%。（2）采用Trizol裂解法对3.0×107个精子裂解获得蛋白条带16个多于TCA-丙酮法（10个条带）和尿素盐酸胍法（7个条带）。采用改进后IEF（等电聚焦）程序、pH4-7的IPG胶条、银染图谱获得更多独立蛋白点,其效果优于改进前IEF程序、p H3-10的IPG胶条、考染图谱。（3）X、Y精子检测到特异性表达蛋白点25个,其中X精子上有10个,Y精子上有15个;特异选取3个X精子和3个Y精子特异性表达蛋白点质谱鉴定结果,位于X精子2个蛋白分别为推定组蛋白H2B（histone H2B type 2-F-like）和推定14-3-3Z蛋白（14-3-3 protein zeta/delta isoform X1）,均位于细胞核内,无跨膜结构,位于Y精子特异性表达蛋白点为推定载脂蛋白A-I序列（apolipoprotein A-I preproprotein）,位于细胞膜外,但无跨膜结构。其它3个未命名蛋白序列分别为暂未命名蛋白序列1、暂未命名蛋白序列2无没有发现跨膜,暂未命名蛋白序列3具有跨核膜的结构。结论:流式细胞分选奶牛的X、Y精子可以达到性控有效性;利用稳定、高效的双向电泳程序获得X精子特异性表达蛋白10个,Y精子特异性表达蛋白15个;质谱鉴定6个特异性表达蛋白其序列均为亲水性,具有抗原决定簇,它们与精子生成、获能、代谢和信号转导有关,推定组蛋白H2B、载脂蛋白A-I与奶牛雄性不育相关,但6个蛋白序列均不能完全满足疫苗候选蛋白条件。
冯佳时[2]（2011）在《精子处理方法及β-巯基乙醇对牛体外受精的影响》文中研究指明体外受精是一项在基础研究和应用研究领域都有着广泛应用的技术。体外受精技术在研究受精和合子早期发育机理、治疗人类不育症及提高家畜尤其是奶牛和肉牛生产力方面有重要作用。但其相对较低的生产效率和稍差的胚胎和胎儿生存能力阻碍了体外受精技术在奶牛和肉牛产业中的广泛应用。本试验旨在通过以下几个方面的研究进一步完善牛体外受精胚胎生产体系,主要结果如下：1.体外高氧环境下培养的卵母细胞和胚胎会产生过量的活性氧（Reactive Oxygen Species, ROS）,从而对细胞造成损伤,ROS被认为是体外胚胎生产效率低下的主要原因之一。β-巯基乙醇（β-mercaptoethanol,β-ME）是一种低分子量的硫醇类物质,添加到细胞培养液中可以促进细胞内谷胱甘肽（Glutathione, GSH）的合成而降低ROS对细胞的损伤。试验研究了在成熟液和胚胎培养液中添加β-ME对牛卵母细胞体外成熟、受精、早期胚胎发育的影响,结果表明：（1）在牛卵母细胞体外成熟培养液中添加0μM（对照）、50μM和100μM的p-ME,随着β-ME浓度的升高卵母细胞的成熟率有提高的趋势,但三组间无显着差异（P>0.05）。在卵裂率方面三个试验组间也无显着差异（P>0.05）。（2）在成熟液和胚胎培养液中添加0μM（对照）、50μM和100μM的β-ME对囊胚率无显着影响（P>0.05）。50μM和100μM组胚胎的发育速度显着高于对照组,但两试验组之间差异不显着（P>0.05）。因此,研究认为牛卵母细胞体外成熟液中添加β-ME,随着β-ME浓度的提高,其对成熟率有提高的趋势,对卵裂率和囊胚率无显着影响,但显着提高了胚胎发育速度。2.研究了不同的精子纯化获能方法、精卵共孵育时间和公牛品种对体外受精的影响,结果表明：（1）试验研究了Percoll法和BO液上浮法两种精子分离纯化获能方法对体外受精结果的影响。Percoll法为用Percoll密度梯度离心法分离纯化冻精并接着用以TALP为基础液的受精液受精卵母细胞；BO上浮法为用BO上浮液分离纯化精子并用以BO受精液受精卵母细胞。两种方法对比,Percoll法能显着提高IVF的卵裂率（P<0.05）,但二者在囊胚率方面无显着差异（P>0.05）。（2）试验分别应用两头荷斯坦奶牛冻精与两头肉牛（利木赞和西门塔尔）冻精对本地黄牛卵母细胞进行体外受精,两种冻精相比,荷斯坦奶牛的冻精显着提高了卵母细胞的体外卵裂率（P<0.05）,但二者在囊胚率方面差异不显着（P>0.05）。（3）试验分别研究了不同长度的体外精卵共孵育时间对体外受精结果的影响。结果表明,精卵共孵育9h和12h与对照组6h相比能显着提高卵裂率（P<0.05）,但三者在囊胚率方面无显着差异（P>0.05）。因此,研究认为,应用Percoll法分离纯化精子并用TALP受精液受精卵母细胞能获得更高的卵裂率；在本试验条件下,9h的精卵体外孵育时间已经能够获得良好的卵裂率和囊胚率；荷斯坦奶牛冻精比肉牛（利木赞和西门塔尔）冻精能获得更好的体外受精效果。
江中良[3]（2010）在《LDL和多糖在猪精液冷冻保存中的作用研究》文中指出尽管人工授精和精液冷冻保存技术已经广泛应用于养牛业,但是用冷冻保存后的猪精液进行人工授精,其受胎率和产仔数都比较低,导致利用冷冻精液进行人工授精还不能应用于养猪生产。由于猪精液具有一次射精量大但精子密度小、猪精子头部的脂肪含量高和对冷冻解冻过程中的温度变化特别敏感等特点,导致猪精子易受到冷冻解冻损伤。研究证实,由冷冻解冻导致的损伤可以通过添加冷冻保护剂来控制。尽管甘油已经被广泛应用于各种细胞的冷冻保存,但在猪精液冷冻保存上,甘油在提高猪精子活率的同时也降低了精子的顶体完整性,所以不能大量使用。因此,寻找合适的冷冻保护剂是目前猪精液冷冻保存的主要研究内容之一。本试验通过在猪精液冷冻稀释液中添加不同的多糖和低密度脂蛋白（LDL）,研究多糖和LDL对猪精液冻后参数的影响,取得如下结果:1、在猪精液冷冻稀释液中添加不同浓度的绞股蓝多糖（GP）、红景天多糖（RPP）、枸杞多糖（LBP）和LDL进行试验,结果显示:3%的GP和4%的RPP可以使猪精子的冻后活率达到37.82%和42.66%（P<0.05）;高浓度的GP（4%,5%,6%）和RPP（6%,8%,10%）对精子细胞膜有较好的保护作用（P<0.05）;6%,8%和10%的RPP可以保护猪精子的顶体完整率（P<0.05）;精子冻后获能样变化随着RPP浓度的增加而逐渐上升（P<0.05）。在猪冷冻稀释液中添加8%和9%的LDL后,猪精子冻后活率分别达到42.25%和49.33%（P<0.05）;精子质膜完整率分别达到60.26%和62.68%（P<0.05）;与对照组相比,添加LDL可以明显提高猪精子的顶体完整率,但是在不同浓度的LDL处理组之间,猪精子冻后的顶体完整率没有明显差异;目前的研究还发现添加不同浓度的LDL对精子冻后获能样变化没有任何影响。2、为了更好的理解LDL对猪精子冻后特征的影响,计算机辅助分析系统被用于分析冻后猪精子的运动特征,所得结果显示:高浓度的LDL（8～10%）显着提高了猪精子冻后总运动精子比例（TMS,%）,达到42.25%、49.33%和43.21%;与对照组相比,在高浓度的LDL（8～10%）中,精子直线运动速度（VSL,um/s）分别达到40.35,44.18和36.71 um/s;精子在冻后的曲线运动速率（VCL,um/s）在稀释液中含有6%的LDL时最高,达到37.14 um/s（P<0.05）;但是各种浓度的LDL添加都不影响冻后精子头部的侧向振幅（ALH）。3、精细胞凋亡现象表现在DNA损伤、细胞内抗氧化物酶、线粒体及caspase等活性的改变。在0.25ml细管里,8%和9%的LDL显着降低了冻后猪精子的彗星比例（CR）,8～10%的LDL显着降低了尾部DNA的含量（TD）和尾距（TM,P<0.05）;不同浓度的LDL都可以提高猪精子冻后超氧化物歧化酶（SOD）活性,但是只有8～10%LDL可以提高过氧化氢酶（CAT）的活性（P<0.05）,而LDL对谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性没有明显影响;各种LDL浓度对冻后猪精子的线粒体活性均有保护作用（P<0.05）;在0.5ml的细管中,8～10%的LDL会提高猪精子冻后总运动精子比例（TMS,%）和精子直线运动速度（VSL,um/s）,降低了猪冻后精子里彗星的比例（CR）和尾部DNA的含量（TD）（P<0.05）只有SOD的活性受到8%和9%的LDL的刺激而上升（P<0.05）;添加10%LDL可以显着降低0.25和0.5ml中猪精子的caspases活性（P<0.05）。4、为了研究冷冻解冻对精子影响的分子机理,不同的RNA提取方法被用于提取冻后猪精子总RNA。结果表明,利用常温条件下和加热到45℃的Trizol试剂处理猪精子,均不能获得足够数量的RNA用于基因表达检测;如果把Trizol试剂加热到70℃,则可以获得足够数量的RNA用于基因表达检测,因此,猪精子RNA的提取与Trizol试剂的温度相关。5、利用总RNA检测冷冻解冻后的基因表达的结果表明:低密度脂蛋白受体（LDLR）存在于猪冷冻解冻后的精液中,但是LDL的添加并不能改变LDLR的表达; 9%～10%的LDL显着降低GADD45B的表达;SURVIVIN在猪冷冻解冻精液中的表达量很低,在处理组之间和处理组与对照组之间均没有差异;低浓度的LDL（6%～8%）对BCL-2基因的表达影响不明显,而9%和10%的LDL明显上调了BCL-2基因的表达;高浓度的LDL（9%～10%）明显降低了BAX的表达（P<0.05）,而低浓度的LDL（6%～8%）对BAX的表达没有显着影响。通过以上试验发现,LDL对冷冻解冻后猪精子的各种参数均有不同程度的积极影响,特别是LDL可以降低由于冷冻解冻导致的凋亡损伤和改变相关凋亡基因的表达,因此,LDL可以用于猪精液冷冻保存。
高其双,黄海军,陶弼菲,向敏,汪云,钱运国[4]（2009）在《添加肝素对猪睾丸细胞增殖的影响》文中认为猪睾丸细胞（ST细胞）主要用于猪瘟等病毒的培养。猪睾丸细胞增殖试验结果表明,通过在常规培养基中添加肝素用来培养ST细胞,可有效增加细胞密度,改善细胞生长状态,有望为ST细胞工厂化转瓶生产提供指导依据。
林金杏,阎萍[5]（2007）在《调节精子功能的外源性物质及其作用机理》文中研究表明在人工授精及体外受精过程中,需要对精液进行稀释等处理,处理过程中外源性物质的添加会从不同的方面影响精液的质量和精子的受精力。本文阐述了氨基多糖、甲基黄嘌呤、无机离子、生殖激素、细胞因子、维生素、蛋白质等外源性物质对精子生理功能的调节及其作用机理。
崔凯[6]（2007）在《马鹿精子体外获能与评价体系及其体外受精的研究》文中研究指明精子获能（sperm capacitation）是正常受精必须经过的生理过程。对精子获能及相关问题的研究自然成为生殖生物学领域不可或缺的部分。本研究以马鹿为试验对象，对精子在体外获能（sperm in vitro capacitation）及顶体反应（acrosome reaction，AR）过程中各种影响因素的作用进行了分析，从而筛选出了一套在实践中具有可操作性的马鹿精子体外获能培养体系和快速、准确评价精子获能水平的方案；在这些研究的基础上，进一步对马鹿体外受精（in vitro fertilization，IVF）和马鹿精子体外获能与AR中形态学、生理学变化进行了研究，旨在为鹿体外受精的深入研究提供思路，为生殖生物学等相关学科的基础理论研究提供数据和资料。对马鹿精子体外获能培养体系和评价体系的研究结果表明：1、温度对马鹿精子体外获能有显着的影响。低于马鹿体温的37℃和37.5℃不利于马鹿精子获能（P＜0.05）；适宜的体外获能温度范围为38～39.5℃；其中38.5℃时的获能效果最好。2、上浮法、孵育法和Percoll不连续梯度密度离心法均可使马鹿精子体外获能；但综合精子活力、弯尾率、AR率等指标，上浮法最优。3、鲜精与冻精均可在体外条件下被诱导获能。应用冻精后的异种穿卵率、AR率、活力和弯尾率均低于鲜精，但经比较，差异均不显着（p＞0.05）。4、培养基中Ca2+、Mg2+、K+、葡萄糖和丙酮酸钠的浓度都会影响到马鹿精子体外获能的水平。应用修正后的BO液培养马鹿精子，获能水平有显着的提高（p＜0.05）；但应用高离子强度液（high ionic strength medium，HIS）却未获得较好的获能效果（p＜0.01）。5、血清与牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）使用的种类不同、浓度不同均可影响马鹿精子体外获能的效果。10％公马鹿血清、15％胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）、6mg／mlBSA和9mg／mlBSA的使用效果较好，AR率均达到69.0％以上；培养液中BSA或FBS的浓度过高反而使获能水平下降。6、肝素的使用浓度和作用时间直接影响到马鹿精子体外获能的水平。0～200μg／ml的肝素中，对马鹿精子体外获能的适宜作用范围是20～30μg／ml（p＜0.05），其中以20μg／ml为最佳；在肝素浓度为20μg／ml时，处理时间0～120min中以15min为最佳（p＜0.05）；延长作用时间并未提高获能效果。7、孕酮（progesterone，P4）、γ-氨基丁酸（γ-aminobutyricacid，GABA）、钙离子载体A23187（calcium ionophore A23187，A23187）和钾离子载体缬安霉素（valinomycin，Val）均可于体外诱导马鹿获能精子AR；其最佳使用浓度和作用时间的组合分别为P4 10μmol／L×10min、GABA 0.5mmol／L×10min、A23187 0.1μmol／L×5min、Val 0.5μmol／L×5min，所获得AR率均在70％以上，其中以P4组的AR率为最高（78.44±4.3％）。8、以异种穿卵率（SPA值）为主要指标对比电子显微镜法（technique for electron microscopy，TEM）、三色染色法（triple-stain technique，TST）和考马斯亮蓝染色法（coomassie brilliant blue staining，CBB）对马鹿精子获能水平的评价效果，结果只有TST的结果与异种穿卵试验（sperm penetration of zona-free hamster egg assay，SPA）的结果一致；TEM法和CBB法的结果相似；在实践中SPA法对技术要求高，且无法一人独立完成，TST法具有简便易行和相对省时的优点。9、所筛选的马鹿精子体外获能培养体系为：应用修正后的BO基础液，添加6mg／mlBSA，使用上浮法，以肝素（20μg／ml，作用15min）诱导马鹿精子体外获能，培养条件为38.5℃、5％CO2，饱和湿度。经比较，应用该体系可显着提高SPA值和AR率（p＜0.01）。10、所筛选的马鹿精子体外获能评价体系为：用P4（10μmol／L×10min）对马鹿获能精子进行AR诱导，TST法评价顶体状态，辅以精子活力和弯尾率等指标，必要时再辅以SPA法。应用上述马鹿精子体外获能培养体系进行马鹿体外受精研究，结果表明：1、M199成熟液中FBS的浓度为10％、20％或用10％自制成年母鹿血清取代FBS，均可使马鹿卵子体外成熟（in vitro maturation，IVM）及体外受精，成熟率和受精率的差异均不显着（p＞0.05）；在受精卵早期培养中，存在20％FBS时获得了较高的2-细胞比率（p＜0.05）。2、应用输卵管上皮细胞单层（oviduct epithelial cell monolayers，COEM）共培养体系进行马鹿的体外受精及受精卵的发育培养，结果获得了60.0％的受精率，有66.7％的受精卵发生了卵裂，并有卵子发育至4-细胞阶段。对照组中受精卵只发育至2-细胞期，无卵子继续发育至4-细胞。使用电感耦合等离子体发射光谱仪（inductive coupled plasma，ICP）与离子色谱仪，对马鹿精子体外获能和AR过程中培养液内Ca2+、Mg2+、Na+、K+、Cl-和总P的浓度进行检测，结果表明：在马鹿精子体外获能与AR过程中，这些离子均发生了浓度上的变化，精子细胞内外存在着离子的跨膜运动。对体外获能前后以及精液冷冻处理前后马鹿精子形态上变化的研究结果表明：1、马鹿精子与其他哺乳动物相似，在电镜下，由头部、颈部和尾部3部分组成。头部呈扁卵圆形，主要由精核构成，在其上有似帽状的顶体，顶体前端下折产生象鼻样下垂；颈部脆弱，尾部易从此处脱落；尾部由中段、主段和末段组成，轴丝的结构类型为“9+2”。2、电镜下观察，马鹿精子获能前，头部质膜和顶体完整；精子获能后，质膜膨胀，甚至断裂或丢失，顶体外膜以多种方式发生了囊泡化，进而顶体内膜裸露。3、电镜下观察，马鹿精子冷冻后，31.7±5.2％的质膜有膨胀现象出现：顶体的损伤较小，只有个别发生与获能组相似的顶体反应，比率为4.6±3.8％；解冻后精子体外获能，所观察到的超微结构变化与鲜精组基本相同。
任艳玲[7]（2006）在《孕酮、γ-氨基丁酸诱发马鹿精子顶体反应及对离子转运调节的研究》文中指出体外受精技术是继人工授精、胚胎移植技术之后,动物繁殖领域的第三次革命,具有广阔的发展前景和重要的现实意义。精子体外获能和顶体反应是体外受精的前提和基础,因此对精子体外获能和顶体反应进行研究有助于体外受精技术的深入开展。本研究以马鹿为试验对象,采用上浮法诱导马鹿精子体外获能,以孕酮（P4）和γ-氨基丁酸（GABA）诱导顶体反应,旨在摸索出P4与GABA诱发马鹿精子顶体反应的最适宜体系,并通过研究二者在诱发马鹿精子顶体反应过程中对Ca2+、Mg2+、Na+、K+、Cl-和总P等离子的转运调节,以期初步阐明二者诱发马鹿精子顶体反应的机制。试验结果表明: 1、0.5μmol/L～1000μmol/L的P4可提高获能马鹿精子的顶体反应率;其中,1μmol/L与10μmol/L P4可显着（P<0.05）促进马鹿精子发生顶体反应,并以10μmol/LP4处理组的顶体反应率最高,达到74.44±0.71%。 2、10μmol/L P4诱导获能马鹿精子顶体反应,在10～20min的处理时间内均获得了较高的顶体反应率（均72.41%以上）,并以处理10min的项体反应率最高（78.40%）。 3、0.05mmol/L～2.5mmol/L的GABA可提高获能马鹿精子的顶体反应率;以0.5mmol/L GABA处理组的顶体反应率最高（P<0.01）,达到77.94±6.53%。 4、0.5mmol/L GABA诱导获能马鹿精子项体反应,在1～30min内各时间的顶体反应率均达到70%以上:其中处理10min的顶体反应率最高,达到77.52+2.96%。 5、P4与GABA可协同诱导获能马鹿精子发生顶体反应,适宜的浓度组合为1μmaol/L P4+2.5mmol/L GABA。 6、P4与GABA均能促进获能马鹿精子的顶体反应,但均不能显着（P>0.05）促进未获能马鹿精子的顶体反应。 7、P4与GABA对马鹿精子获能均无显着作用（P>0.05）;延长获能孵育时间对GABA诱发的顶体反应有极显着影响（P<0.01）。 8、在P4诱导马鹿精子顶体反应的15min内,培养液中Ca2+、Mg2+、Na+、K+、Cl-和总P的浓度均发生了变化;其中Ca2+、Mg2+、Na+和总P的变化水平为显着（P<0.05）或极显着（P<0.01）;K+和Cl-出现波动,但无显着变化（P>0.05）;Ca2+出现两个阶段的内流,一个是60s内出现的快速、瞬时内流,另一个是180s后出现的缓慢、持续内流。 9、在GABA诱导马鹿精子顶体反应的15min内,培养液中Ca2+、Mg2+、Na+、K+、Cl-和总P的浓度均发生了变化,且变化水平均为显着（P<0.05）或极显着（P<0.01）;Ca2+在顶体反应初期出现短暂外流后均呈内流状态;Mg2+、Na+、K+和总P均呈内流趋势。
孙志杰,李青旺,赵红卫,孙秀柱,罗桂芬[8]（2004）在《牛精清蛋白及其作用》文中研究说明牛精清（bovineseminalplasmaBSP）蛋白家族共有四种蛋白质,分别为BSP A1、BSP A2、BSP A3、和BSP 30 KDa。BSP结构上由a和b两个功能区组成。a区是肝素结合位点,b区与磷脂胆碱结合。BSP主要由精囊腺和输精管的壶腹部分泌。在雄性生殖道内BSP保证精子的稳定,在雌性生殖道内BSP协同高密度磷脂蛋白、肝素诱导精子获能。
二、牛精清蛋白及其作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、牛精清蛋白及其作用（论文提纲范文）
（1）奶牛X-Y精子特异性表达蛋白的筛选（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 引言 |
| 1.1 哺乳类动物精子发生过程中的表达基因 |
| 1.2 X、Y精子特异性表达基因 |
| 1.2.1 X、Y精子特异性表达基因的概述 |
| 1.2.2 X、Y精子特异性表达基因的研究进展 |
| 1.2.3 筛选和鉴定精子发生过程中特异表达基因的方法 |
| 1.3 X、Y精子特异性表达蛋白 |
| 1.3.1 特异性表达蛋白及差异表达蛋白质 |
| 1.3.2 X、Y精子特异性表达蛋白的研究进展 |
| 1.3.3 筛选和鉴定精子特异性表达蛋白的方法 |
| 1.4 基于XY精子性别特异性表达蛋白为基础的性控疫苗研究现状 |
| 1.5 研究目的及意义 |
| 1.5.1 研究目的 |
| 1.5.2 研究意义 |
| 第2章 流式分选奶牛XY精子的人工授精 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 材料来源及试验动物 |
| 2.1.2 主要药品试剂 |
| 2.1.3 常用试剂配制 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 流式细胞仪分选奶牛X、Y精子 |
| 2.2.2 细管冻精实验室检查 |
| 2.2.3 统计学分析 |
| 2.2.4 人工授精 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 流式分选精液验室检查 |
| 2.3.2 人工授精结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 奶牛精子蛋白双向电泳体系建立 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 奶牛精子样本确定与裂解方法的优选 |
| 3.2.2 奶牛精子蛋白双向电泳体系建立 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 精子蛋白制备方法的选择 |
| 3.3.2 关于牛精子蛋白质组学 2DE电泳平台的建立 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 X、Y精子特异性表达蛋白筛选和质谱鉴定 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 X、Y精子蛋白双向电泳 |
| 4.2.2 质谱鉴定结果 |
| 4.2.3 生物信息学预测结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 推定组蛋白H2B（histone H2B type 2-F-like） |
| 4.3.2 推定 1433 Z蛋白(1433 protein zeta/delta isoform X1) |
| 4.3.3 推定载脂蛋白A-I (apolipoprotein A-I preproprotein) |
| 4.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（2）精子处理方法及β-巯基乙醇对牛体外受精的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 牛体外受精技术研究进展 |
| 1.1 精子获能的研究进展 |
| 1.1.1 精子获能和顶体反应的条件和机理 |
| 1.1.2 牛精子获能的调控因素 |
| 1.2 精子的纯化与获能 |
| 1.2.1 精子的纯化 |
| 1.2.2 精子体外获能的主要途径 |
| 1.2.3 影响体外受精的因素 |
| 2 β-巯基乙醇在IVP应用中的研究进展 |
| 2.1 体外培养时ROS的产生 |
| 2.1.1 体外氧浓度 |
| 2.1.2 金属阳离子 |
| 2.1.3 可见光 |
| 2.1.4 胺氧化酶 |
| 2.2 ROS的生物学意义 |
| 2.3 ROS的清除 |
| 2.4 ROS与胚胎发育阻滞的关系 |
| 2.5 添加抗氧化剂克服胚胎发育阻滞现象 |
| 3 牛体外生产胚胎移植的研究进展 |
| 3.1 体外生产胚胎的前景 |
| 3.2 IVF胚胎移植研究进展 |
| 3.3 SCNT胚胎移植研究进展 |
| 3.4 小结 |
| 4 研究的目的和意义 |
| 第二章 试验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 主要试验设备 |
| 1.1.2 主要试剂和药品 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 卵巢的获得 |
| 1.2.2 卵母细胞的收集 |
| 1.2.3 卵母细胞的筛选与分级 |
| 1.2.4 卵母细胞的成熟培养 |
| 1.2.5 卵母细胞成熟判定 |
| 1.2.6 卵母细胞受精前的准备 |
| 1.2.7 精子的纯化与体外获能 |
| 1.2.8 卵母细胞的体外受精 |
| 1.2.9 受精卵的体外培养 |
| 1.2.10 胚胎移植 |
| 2 试验方案 |
| 2.1 试验设计 |
| 2.2 统计学分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 β-ME对牛卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.2 不同精子纯化、获能方法对卵裂率和囊胚率的影响 |
| 3.3 肉牛(利木赞和西门塔尔)和奶牛(荷斯坦)冻精对体外受精效果的影响初探 |
| 3.4 不同精卵共孵育时间对体外受精效果的影响 |
| 3.5 成熟液和胚胎培养液中添加不同浓度β-ME对体外受精效果、胚胎发育速度的影响及胚胎移植初探 |
| 4 讨论 |
| 4.1 β-ME对牛卵母细胞体外成熟及卵裂率、囊胚率和胚胎发育速度的影响 |
| 4.2 精卵共孵育时间对体外受精结果的影响 |
| 4.3 公牛品种对体外受精结果的影响的初探 |
| 4.4 精子分离纯化及受精方法对体外受精结果的影响 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 附表 |
| 附图 |
| 致谢 |
（3）LDL和多糖在猪精液冷冻保存中的作用研究（论文提纲范文）
| 第一章 文献综述 |
| 猪精液冷冻保存研究进展 |
| 1.1 猪精细胞的特殊性 |
| 1.2 精液冷冻保存原理 |
| 1.3 精液冷冻保存的重要性 |
| 1.4 猪精液冷冻保存研究进展 |
| 1.4.1 人工授精的发展历史 |
| 1.4.2 猪精液冷冻保存的必然性 |
| 1.4.3 猪精液冷冻保存的相关国际会议 |
| 1.4.4 猪精液冷冻包装类型 |
| 1.4.5 精液冷冻稀释液 |
| 1.4.6 冷冻保护剂 |
| 1.4.7 降温与平衡时间 |
| 1.4.8 冷冻方法 |
| 1.4.9 渗透压的变化 |
| 1.4.10 解冻温度与时间 |
| 1.4.11 冻前离心对猪精子的影响 |
| 1.4.12 冻后精子获能 |
| 1.4.13 受精与体外试验 |
| 1.5 冷冻过程对精细胞的损伤 |
| 1.5.1 精子活力的改变 |
| 1.5.2 细胞溶质浓度改变导致精子损伤 |
| 1.5.3 冰晶造成的机械性损伤 |
| 1.5.4 细胞膜的损伤 |
| 1.5.5 DNA 的损伤 |
| 1.5.6 活性氧（ROS）对精子的损伤 |
| 1.5.7 线粒体损伤 |
| 1.6 猪精液冷冻保存的国内研究进展 |
| 1.7 猪精液冷冻保存研究方向 |
| 试验研究 |
| 第二章 精液冷冻稀释液的筛选 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 主要仪器设备与试剂 |
| 2.2.2 多糖与LDL 提取 |
| 2.2.3 精液采集 |
| 2.2.4 精液稀释液配制 |
| 2.2.5 精液冷冻与解冻 |
| 2.2.6 精子质量评价 |
| 2.2.7 统计分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 不同多糖与LDL 对猪精子冻后活率的影响 |
| 2.3.2 不同多糖与LDL 对猪精子冻后质膜完整率的影响 |
| 2.3.3 不同多糖与LDL 对猪精子冻后顶体完整率的影响 |
| 2.3.4 不同多糖与LDL 对猪精子冻后获能样变化的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 LDL 与猪精子冻后凋亡样变化研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 仪器设备与试剂 |
| 3.2.2 精液采集、冷冻与解冻 |
| 3.2.3 冻后精子运动特征评价 |
| 3.2.4 冻后精子DNA 完整性检测 |
| 3.2.5 冻后精子酶活性检测 |
| 3.2.6 冻后猪精子线粒体完整性测定 |
| 3.2.7 Caspases 活性检测 |
| 3.2.8 数据统计 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 LDL 对猪精子冻后运动特征的影响 |
| 3.3.2 LDL 对猪精子冻后DNA 完整性的影响 |
| 3.3.3 LDL 对猪精子冻后SOD、CAT 和GSH-Px 活性的影响 |
| 3.3.4 LDL 对主精子冻后线粒体活性的影响 |
| 3.3.5 LDL 对猪精子Caspases 活性的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 LDL 在猪精液冷冻保存中分子机理的初步研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 仪器设备与试剂 |
| 4.2.2 精液采集、冷冻与解冻 |
| 4.2.3 RNA 分离与cDNA 合成 |
| 4.2.4 实时定量PCR 检测 |
| 4.2.5 数据统计 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 RNA 提取 |
| 4.3.2 LDL 对猪精液冻后LDLR 基因表达的影响 |
| 4.3.3 LDL 对猪精液冻后GADD458 基因表达的影响 |
| 4.3.4 LDL 对猪精液冻后SURVIVIN 基因表达的影响 |
| 4.3.5 LDL 对猪精液冻后BCL-2 基因表达的影响 |
| 4.3.6 LDL 对猪精液冻后BAX 基因表达的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 进一步研究的方向 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（4）添加肝素对猪睾丸细胞增殖的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 细胞培养基。 |
| 1.2.2 ST细胞增殖培养。 |
| 1.2.3 ST细胞转瓶培养。 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 添加肝素对ST细胞形态的影响 |
| 2.2 添加肝素对ST细胞增殖的影响 |
| 2.3 添加肝素对ST细胞上转瓶培养的影响 |
| 3 讨论 |
（6）马鹿精子体外获能与评价体系及其体外受精的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略语表 |
| 1 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 什么是精子获能与AR |
| 1.3 精子获能的研究方法 |
| 1.4 精子体外获能的影响因素 |
| 1.4.1 温度 |
| 1.4.2 pH和渗透压 |
| 1.4.3 精子体外获能方法 |
| 1.4.4 动物种类 |
| 1.4.5 精液来源 |
| 1.4.6 培养基成分 |
| 1.5 精子获能的评价 |
| 1.5.1 HAM |
| 1.5.2 AR |
| 1.5.3 SPA |
| 1.6 AR的诱导因子 |
| 1.6.1 P_4 |
| 1.6.2 GABA |
| 1.6.3 A23187 |
| 1.6.4 Val |
| 1.6.5 其他 |
| 1.7 AR评价方法 |
| 1.7.1 TEM法 |
| 1.7.2 相差显微镜检查法 |
| 1.7.3 TST法 |
| 1.7.4 CBB法 |
| 1.7.5 CTC法 |
| 1.7.6 Hoechst与特异植物凝集素结合法 |
| 1.7.7 顶体酶释放检测法 |
| 1.8 精子获能与AR中的生理学变化 |
| 1.8.1 精子获能期间胞内离子的变化 |
| 1.8.2 AR过程中胞内离子的变化 |
| 1.9 精子获能与AR中的形态学变化 |
| 1.10 卵母细胞体外成熟与体外受精 |
| 1.10.1 卵母细胞的成熟机理 |
| 1.10.2 卵母细胞的收集 |
| 1.10.3 卵母细胞体外成熟的影响因素 |
| 1.10.4 精子体外获能 |
| 1.10.5 体外受精与受精卵的体外培养 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 精液来源 |
| 2.1.2 试验动物来源 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.1.4 主要试剂和药品 |
| 2.1.5 主要操作用液 |
| 2.2 精子体外获能 |
| 2.2.1 诱导精子体外获能的方法 |
| 2.2.2 诱导获能精子发生AR的方法 |
| 2.2.3 精子质量检测和获能水平的评价方法 |
| 2.2.4 实验设计 |
| 2.3 体外受精 |
| 2.3.1 体外受精程序 |
| 2.3.2 COEM的制备方法 |
| 2.3.3 实验设计 |
| 2.4 体外获能与AR过程中生理学变化 |
| 2.4.1 离子的检测方法 |
| 2.4.2 实验设计 |
| 2.5 体外获能与AR过程中形态学变化 |
| 2.5.1 电子显微镜检查样本的制备方法 |
| 2.5.2 精子的测量方法 |
| 2.5.3 实验设计 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 马鹿精子体外获能培养体系的筛选 |
| 3.1.1 评价马鹿精子体外获能方法的筛选 |
| 3.1.2 诱导马鹿获能精子发生AR的方法 |
| 3.1.3 温度对马鹿精子体外获能的影响 |
| 3.1.4 培养方法对马鹿精子体外获能的影响 |
| 3.1.5 鲜精与冻精在马鹿精子体外获能中的差异 |
| 3.1.6 培养基中几种离子和能源物质浓度对马鹿精子体外获能的影响 |
| 3.1.7 BSA和血清对马鹿精子体外获能的影响 |
| 3.1.8 肝素对马鹿精子体外获能的影响 |
| 3.1.9 马鹿精子体外获能最佳培养体系 |
| 3.2 马鹿体外受精研究 |
| 3.2.1 血清对体外受精的影响 |
| 3.2.2 COEM对体外受精的影响 |
| 3.3 马鹿精子体外获能与AR过程中的生理学变化 |
| 3.3.1 Ca~(2+)变化 |
| 3.3.2 Mg~(2+)变化 |
| 3.3.3 Na~+变化 |
| 3.3.4 K~+变化 |
| 3.3.5 Cl~-变化 |
| 3.3.6 总P变化 |
| 3.4 马鹿精子体外获能与AR过程中的形态学变化 |
| 3.4.1 正常马鹿精子形态 |
| 3.4.2 马鹿精子获能前后的形态学变化 |
| 3.4.3 马鹿精子冷冻前后的形态学变化 |
| 4 分析与讨论 |
| 4.1 马鹿精子体外获能培养体系 |
| 4.1.1 温度 |
| 4.1.2 获能方法 |
| 4.1.3 鲜精与冻精 |
| 4.1.4 体外获能培养基 |
| 4.1.5 BSA与血清 |
| 4.1.6 肝素 |
| 4.2 马鹿精子体外获能评价体系 |
| 4.2.1 精子获能的评价 |
| 4.2.2 AR诱导因子 |
| 4.3 马鹿体外受精研究 |
| 4.3.1 血清对体外受精的影响 |
| 4.3.2 COEM对体外受精的影响 |
| 4.4 马鹿精子体外获能与AR过程中的生理学变化 |
| 4.4.1 Ca~(2+) |
| 4.4.2 Mg~(2+) |
| 4.4.3 Na~+ |
| 4.4.4 K~+ |
| 4.4.5 Cl~- |
| 4.4.6 P |
| 4.5 马鹿精子体外获能与AR过程中的形态学变化 |
| 4.5.1 马鹿精子形态结构特点与其机能的关系 |
| 4.5.2 马鹿精子体外获能后超微结构变化及其机制探讨 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图1 马鹿精子获能/AJR前后TST染色图片 |
| 附图2 马鹿体外受精图片 |
| 附图3 马鹿精子SPA图片 |
| 附图4 马鹿精子获能与冷冻前后超微结构 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（7）孕酮、γ-氨基丁酸诱发马鹿精子顶体反应及对离子转运调节的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 1 前言 |
| 2 文献综述 |
| 2.1 精子获能 |
| 2.1.1 精子获能的发现 |
| 2.1.2 精子体外获能的研究进展 |
| 2.1.3 精子体外获能的方法 |
| 2.2 顶体反应 |
| 2.2.1 顶体结构 |
| 2.2.2 顶体反应的形态学过程 |
| 2.2.3 顶体反应过程中离子变化 |
| 2.2.4 顶体反应过程中膜脂类变化 |
| 2.2.5 顶体反应的信号传导途径 |
| 2.2.6 顶体反应的评价方法 |
| 2.3 顶体反应的诱导因子 |
| 2.3.1 孕酮(P_4) |
| 2.3.2 γ-氨基丁酸(GABA) |
| 2.3.3 项体反应的其它诱导因子 |
| 2.4 本研究的目的与意义 |
| 3 材料与方法 |
| 3.1 精液来源 |
| 3.2 主要仪器设备 |
| 3.3 主要试剂、药品 |
| 3.3.1 精子获能／顶体反应试剂、药品 |
| 3.3.2 染色药品 |
| 3.3.3 ICP与离子色谱仪检测药品 |
| 3.4 主要操作液 |
| 3.4.1 精子体外获能培养液 |
| 3.4.2 P_4与GABA配制 |
| 3.4.3 染色与固定液 |
| 3.4.4 ICP检测液 |
| 3.4.5 离子色谱仪检测液 |
| 3.5 试验方法 |
| 3.5.1 诱发马鹿精子体外获能 |
| 3.5.2 诱发获能马鹿精子顶体反应 |
| 3.5.3 顶体反应的检测 |
| 3.5.4 顶体反应的判断标准 |
| 3.5.5 顶体反应率的计算方法及数据处理 |
| 3.5.6 离子浓度检测 |
| 3.6 试验方案 |
| 3.6.1 P_4诱发获能马鹿精子顶体反应研究方案 |
| 3.6.2 GABA诱发获能马鹿精子顶体反应研究方案 |
| 3.6.3 P_4与GABA的协同作用 |
| 3.6.4 P_4诱发未获能马鹿精子顶体反应及对马鹿精子获能的作用 |
| 3.6.5 GABA诱发未获能马鹿精子顶体反应及对马鹿精子获能的作用 |
| 3.6.6 离子浓度检测取样方案 |
| 4 结果 |
| 4.1 P_4诱发获能马鹿精子顶体反应 |
| 4.1.1 P_4作用浓度的筛选 |
| 4.1.2 P_4作用时间的筛选 |
| 4.2 GABA诱发获能马鹿精子顶体反应 |
| 4.2.1 GABA作用浓度的筛选 |
| 4.2.2 GABA作用时间的筛选 |
| 4.3 P_4与GABA的协同作用 |
| 4.4 P_4诱发未获能马鹿精子顶体反应及对马鹿精子获能的作用 |
| 4.5 GABA诱发未获能马鹿精子顶体反应及对马鹿精子获能的作用 |
| 4.6 P_4／dGABA诱发获能马鹿精子顶体反应中对几种离子转运的调节 |
| 4.6.1 P_4诱发获能马鹿精子顶体反应过程中对几种离子转运的调节 |
| 4.6.2 GABA诱发获能马鹿精子顶体反应过程中对几种离子转运的调节 |
| 5 分析与讨论 |
| 5.1 P_4诱发获能马鹿精子顶体反应 |
| 5.2 GABA诱发获能马鹿精子顶体反应 |
| 5.3 P_4与GABA的协同作用 |
| 5.4 P_4诱发未获能马鹿精子顶体反应及对马鹿精子获能的作用 |
| 5.5 GABA诱发未获能马鹿精子顶体反应及对马鹿精子获能的作用 |
| 5.6 P_4与GABA诱发获能马鹿精子顶体反应中对几种离子转运的调节 |
| 5.6.1 P_4诱发获能马鹿精子顶体反应过程中对几种离子转运的调节 |
| 5.6.2 GABA诱发获能马鹿精子顶体反应过程中对几种离子转运的调节 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
| 独创性声明 |
| 学位论文版权使用授权书 |
四、牛精清蛋白及其作用（论文参考文献）
- [1]奶牛X-Y精子特异性表达蛋白的筛选[D]. 郑永富. 塔里木大学, 2017(07)
- [2]精子处理方法及β-巯基乙醇对牛体外受精的影响[D]. 冯佳时. 华中农业大学, 2011(08)
- [3]LDL和多糖在猪精液冷冻保存中的作用研究[D]. 江中良. 西北农林科技大学, 2010(10)
- [4]添加肝素对猪睾丸细胞增殖的影响[J]. 高其双,黄海军,陶弼菲,向敏,汪云,钱运国. 现代农业科技, 2009(20)
- [5]调节精子功能的外源性物质及其作用机理[J]. 林金杏,阎萍. 畜牧与兽医, 2007(06)
- [6]马鹿精子体外获能与评价体系及其体外受精的研究[D]. 崔凯. 东北林业大学, 2007(06)
- [7]孕酮、γ-氨基丁酸诱发马鹿精子顶体反应及对离子转运调节的研究[D]. 任艳玲. 东北林业大学, 2006(10)
- [8]牛精清蛋白及其作用[J]. 孙志杰,李青旺,赵红卫,孙秀柱,罗桂芬. 黄牛杂志, 2004(01)