一、可在早期检测癌症的新型装置（论文文献综述）
张国娟[1]（2021）在《石墨烯基电化学适配体传感器的构建及其对疾病标记物的检测》文中指出石墨烯（Gr）由于其固有的大比表面积、超高导电性和催化性在电化学生物传感、能源储备、电池催化、环境污染物吸附等领域展示潜在的应用价值。贵金属纳米材料因其良好的生物相容性、超高的催化性和导电性,与Gr纳米材料的复合表现出更好的理化性能,已成为构建电化学传感器的理想材料之一。由于两者材料的复合不仅增强电化学信号响应,同时丰富传感器的结合位点,从而固定大量的识别适配体,最终提高电化学传感器的选择性、灵敏性等性能。由此,本论文合成四种卟啉功能化的石墨烯-贵金属纳米复合材料,分别用于设计不同类型的适配体传感策略,实现了疾病标记物（Disease Marker）的检测应用。主要内容有以下四方面:（1）基于四羧基苯基卟啉功能化的石墨烯金纳米颗粒复合材料构建的电化学适配体传感器检测肌红蛋白。首先,基于四羧基苯基卟啉（TCPP）功能化Gr负载的金纳米复合材料（TCPP-Gr/Au NPs）开发一种敏感的电化学适配体传感器,用于选择性检测肌红蛋白（Mb）。由于TCPP-Gr/Au NPs良好的导电性,固有的大比表面积和出色的机械性能,可以作为Mb电化学适配体检测的增强材料,同时,它为Mb适配体提供有效的抛锚基质。该传感器在2.0×10-11 M至7.7×10-7 M的线性范围内实现Mb的敏感检测,检出限为6.7×10-12 M。此外,该方法具有灵敏度高、价格低和特异性高的优点,所以我们的研究能为Gr基材料在生物医学和生物传感器的应用提供新的视野。（2）基于血红素功能化石墨烯钯纳米复合材料的电化学适配体传感器检测前列腺特异性抗原。本研究描述了检测前列腺特异性抗原（PSA）电化学适配体传感器的构建过程和特性研究。该PSA适配体传感器是基于血红素（hemin）功能化Gr钯纳米复合材料（H-Gr/Pd NPs）所构建的,该材料集Gr的高电导率,Pd NPs出色的电导率和催化性能等优势与一体。其中,置于Gr上的hemin既可作为保护剂,又可作为原位探针（Ep为-0.36 V）,而Pd NPs通过Pd和氨基之间的配位键为DNA-生物素的固定提供大量结合位点。通过生物素-链霉亲和素固定PSA适配体可实现灵敏而特异性的PSA测定。所设计的PSA适配体传感器在0.025-205 ng/m L的PSA范围内具有线性响应,检出限8.0 pg/m L。PSA在加标血清样品中的回收率为95.0%至100.3%。因此,该PSA电化学适配体传感器有望成为PSA实际临床检测的替代方法。（3）基于血红素/石墨烯@PdPtNPs的双信号免标记电化学适配体传感器对粘蛋白1的灵敏检测。本研究基于H-Gr@PdPtNPs构建免标记的双信号适配体传感器用于粘蛋白1（MUC1）的检测。Hemin与Gr的复合提高Gr的水溶性,充当原位探针,而且H-Gr负载的PdPtNPs复合材料能够对H2O2的分解有协同催化作用。不仅如此,PdPtNPs为dsDNA（由MUC1适配体和其互补链杂交而得）的绑定提供丰富的结合位点。当检测体系中加入MUC1时,由于MUC1适配体和MUC1特异性结合导致dsDNA结构被打开,部分MUC1适配体从电极表面脱落下来,致使hemin的DPV信号和H2O2的计时电流信号升高。在最优条件下,构建的双信号免标记电化学适配体传感器对MUC1的检测表现出良好的线性关系,线性范围分别是8.0 pg/m L-80 ng/m L和0.80pg/m L-80 ng/m L,检出限分别是2.5 pg/m L和0.25 pg/m L。检测人血清样品中的MUC1回收率是95.0%-104.2%。总而言之,该免标记的传感器不仅降低实验成本,为MUC1的临床诊断提供新的思路。（4）基于血红素/巯基-β-环糊精@钯铂纳米花复合材料和Exo I三重放大策略的比率型电化学传感器准确检测CA125。基于血红素/巯基-β-环糊精@钯铂纳米花复合材料（H-Gr/SH-β-CD@Pd Pt NFs）和Exo I扩增辅助策略,设计三重放大比率型传感器用于CA125的定量测定。在此,hemin仍然充当防止Gr沉淀的保护剂,并为传感器提供内参比信号。Pd Pt NFs作为催化增强剂提高电子转移速率,放大hemin的信号。在加入CA125后,由于适配体和CA125之间的特异性结合,富集槲皮素（QUE）的dsDNA被打开,导致QUE解吸。这些QUE通过SH-β-CD的主客体识别作用而富集在材料修饰电极上,致使QUE的直接电子转移而表现出强的电化学信号,但是由于c DNA片段在Gr材料上的非特异性吸附导致原位探针hemin信号的降低,形成比率信号。此外,Exo I对CA125的循环可扩增QUE信号,放大比率信号,降低背景干扰。基于这些特性,提出三重放大的比率信号电化学生物传感器用于CA125检测。测试表明该测定方法具有更宽的线性范围,范围为6.0×10-4至1007 ng/m L,较低的检出限为0.14 pg/m L,在人血清样品中CA125的回收率为99.2%至104.4%。所以,这项工作将为开发三重扩增和比率信号策略用于临床诊断中其他Tumor Marker的检测提供新机会。（5）总结研究成果,针对研究中存在的问题和改进方向,进行探讨和展望。
齐硕[2]（2021）在《肝癌演进关键节点光声多模跨尺度成像、边界界定、关键分子功能在体可视化及早诊早治的实验研究》文中进行了进一步梳理研究背景根据世界卫生组织国际癌症研究机构的数据统计,2020年全球新发肝癌病例数为91万例,因肝癌死亡病例数为63万例,目前肝癌属于全球发病第六位、死亡原因第三位的恶性肿瘤。且肝癌病人的整体5年生存率不足18%,主要是临床上的影像学检查手段主要聚焦于形态学诊断,缺乏从分子、细胞层面对早期肝癌进行精准诊治的技术手段。随着分子影像诊断技术的发展,光声成像应运而生。因其涵盖了声学成像的高穿透深度及光学成像的高分辨率,尤其是近红外二区（NIR-Ⅱ）光声成像的更大穿透深度等优势,在位置较深、血供丰富的肝癌组织中成像具有很大的应用前景。近年来,肝癌光声成像研究主要聚焦于肝癌形成以后的研究,但关于早期肝癌演进过程中局部血管新生、血流、血氧等变化的研究很少。基于上述临床问题,本研究拟对肝癌演进关键节点进行光声多模成像及关键分子功能在体可视化研究,以实现真正意义上的肝癌早诊早治。目的拟通过光声多模成像设备探索肝癌演进过程中分子、细胞层面的变化情况;随后制备新型NIR-Ⅱ肝癌特异性光声纳米探针并进行早期肝癌关键分子功能在体可视化诊疗的研究。方法本研究将利用光声多模成像设备光声断层成像（PACT）及声学分辨率光声显微成像（AR-PAM）监测裸鼠皮下从HepG2肝癌细胞种植到早期肝癌形成过程中局部血管、血流、血氧层面的变化趋势,探索早期肝癌形成的时间点;基于上述研究的肝癌模型,通过将聚多巴胺包裹铂粒子、PEG修饰及外接CXCR4靶点,合成了一种具有NIR-Ⅱ光声及光热性能的肝癌特异性靶向纳米探针Pt@PDA-c,验证其体外表征及细胞层面的性能后,在裸鼠肝癌模型实施关键分子的功能在体可视化及非侵入NIR-Ⅱ光热治疗。结果本研究使用光声多模成像设备（AR-PAM及PACT）初步探索出裸鼠皮下从HepG2肝癌细胞种植到早期肝癌形成过程中的血管新生、血红蛋白浓度及血氧饱和度升高的时间平均为120～168小时;成功制备了肝癌特异性靶向纳米探针Pt@PDA-c,验证了其合适的粒径（150 nm）、良好的光声成像、光热治疗性能、良好的生物相容性及稳定性等;验证其细胞层面的疗效后,在裸鼠皮下及原位小肝癌模型成功实施了关键分子CXCR4的功能在体可视化、非侵入NIR-Ⅱ光热消融治疗及疗效评估的研究。结论本研究探索了裸鼠皮下肝癌细胞种植到早期肝癌形成的时间为120～168小时;基于肝癌特异性靶向纳米探针Pt@PDA-c,实施了精准的非侵入肝癌光声诊断及光热治疗,为纳米医学在光声诊疗中的应用推广提供了新的思路。
李成盼[3]（2021）在《早期肿瘤行为片上建模研究》文中研究指明癌症是全球的主要死亡原因,严重威胁人类健康。癌症是一种阶段性演进的复杂疾病,涉及肿瘤早期生长和晚期转移。处于肿瘤早期的患者,通过手术、化疗、放疗等手段的干预可以取得较好的预后。然而,大部分肿瘤患者在早期通常没有明显的临床不适症状,初次就诊时己处于肿瘤晚期。由于缺乏有效的转移肿瘤治疗方案,导致患者生存率极低。因此,全面了解原发肿瘤早期发展以及转移肿瘤的早期形成,对于肿瘤的治疗具有重要意义。当前,研究体内肿瘤行为的常规方法是肿瘤成像,然而成像仪器仅能检测大小为毫米量级以上的肿瘤,从肿瘤发生至肿瘤生长为毫米尺度这一过程中（本文定义为肿瘤早期）,由于无法成像,肿瘤的发展及肿瘤细胞的行为仍不清楚。类似地,肿瘤在经血管远端转移并定植的过程中,肿瘤细胞经内渗、外渗及定植形成转移肿瘤的动态过程也因难以跟踪而少有报道。传统的二维细胞培养模型无法复现体内的肿瘤微环境,动物模型又与人存在种属差异且无法可视化。因此,构建新型体外肿瘤模型十分必要。近年来,随着微流控技术的发展,在芯片上模拟肿瘤行为成为可能。然而,当前的片上肿瘤尺寸依然较大（直径大于300 μm）,不仅不能揭示肿瘤极早期行为,也很少涉及转移肿瘤的形成过程。据此,本文设计制作了微流控芯片,分别用于原发肿瘤早期（直径小至30μm）发展以及转移肿瘤（继发肿瘤）早期形成的建模研究,主要研究内容如下:首先,设计制作了一款微流控芯片,将原代内皮细胞及细胞外基质混合注入芯片中进行动态培养以构建血管芯片。主要结果显示,内皮细胞通过自组装形成了片上微血管网络,内皮细胞密度及流动影响着微血管网络的结构,血管内皮生长因子能够诱导血管出芽。其次,基于研制的血管芯片,整合芯片外制备的肿瘤球,研究了原发肿瘤的早期发展。主要结果表明,血管生成和成纤维细胞能够促进原发肿瘤生长和肿瘤细胞迁移,肿瘤尺寸越小,肿瘤细胞迁移能力越强。肿瘤的演进会导致肿瘤周围血管异常,如血管密度低、管径不一、杂乱无章等。此外,本研究首次片上复现了肿瘤细胞上皮间质转化的动态过程以及血管拟态的形成。最后,设计制作了另一款微流控芯片,将肝细胞、肝星状细胞、原代内皮细胞及细胞外基质混合注入芯片中进行三维动态共培养,以构建血管化肝脏微环境。基于该芯片,研究了转移肿瘤的早期发展过程,可视化展示了乳腺癌细胞内渗进入血管、外渗出血管并定植生长的动态过程。主要结果显示,转移肿瘤的形成会影响转移部位的细胞功能。本文不但体外模拟了早期肿瘤行为,也展示了肿瘤细胞的转移定植过程,为原发肿瘤早期发展及转移肿瘤早期形成的研究提供了新思路。本研究对肿瘤芯片构建、肿瘤药物筛选以及肿瘤诊断治疗具有重要的参考价值。
肖萍萍[4]（2021）在《肽核酸功能化的纳米通道生物传感器高灵敏检测肿瘤外泌体MicroRNA》文中进行了进一步梳理肿瘤早期发现是提高治愈率的关键,而肿瘤标志物检测是肿瘤早期发现的有利方法之一,因此寻找合适的肿瘤标志物并进行监测对肿瘤的早期发现及预后评估具有重要意义。研究发现,人类血清或血浆中存在的高度稳定miRNAs可调控癌基因表达,可作为肿瘤抑制因子和启动因子,调节肿瘤增殖、血管生成和转移,被作为新一代肿瘤标志物。而外泌体中miRNAs由于受到囊泡脂质膜的保护,可免于血液中RNase的降解,与血液中游离miRNAs相比具有更高的丰度和稳定性,因此外泌体miRNAs可视为癌症早期诊断的理想分子标志物。因此,构建高特异、高灵敏的外泌体miRNAs传感器对于实现癌症早期诊断具有重大意义。近年来,纳米生物传感器由于特异性高、分析速度快、操作简易等优势,广泛应用于疾病相关分子标志物检测。纳米通道生物传感器则是近年发展起来的一种新型生物传感器,由于纳米通道的尺寸控制在纳米尺度范围内,因此通道具有高比表面积,有利于通道表面进行高效率的功能化修饰,同时又由于纳米限域效应,在狭小的纳米空间内,提高了检测底物与配体相互作用的几率,并可以根据需要来控制通道的内径大小以及修饰的功能团,使其对检测底物具有高的特异性、灵敏度和快速性。因此仿生纳米通道在生物分子的分析检测等领域备受关注。基于此研究背景,本论文构建了一种肽核酸（PNA,peptide nucleic acid）功能化纳米通道生物传感器,实现对肿瘤外泌体miRNAs检测。PNA由于其不带电荷,与miRNA结合的稳定性和特异性都大为提高,展示出良好的亲合性和稳定性。通过杂交前后纳米通道表面的电荷变化,进而实现对肿瘤外泌体miRNAs的灵敏、特异、快速检测。纳米通道内的高比表面积、纳米限域效应及PNA电中性的特性,使得PNA与miRNA杂交效率大大提高,对目前肿瘤外泌体miRNAs检测的突出问题如识别效率较低、特异性不理想、操作时间长等予以解决。该工作分为以下两个部分:第一章:PNA功能化纳米通道生物传感器的构建及miRNA检测首先是采用不对称化学蚀刻的方法制备聚对苯二甲酸乙二醇酯（Polyethylene terephthalate,PET）锥形纳米通道,探针PNA共价修饰在通道表面,并通过一系列表征实验证明PNA功能化纳米通道生物传感器的成功构建。进一步将该传感器用于PBS缓冲液中miRNA的检测,该传感器不仅可高度区分靶标miRNA-10b与单碱基错配及非互补序列,且检测限可低至75 aM。终上所述,我们构建的PNA功能化纳米通道生物传感器能够实现对miRNA较高特异、灵敏检测,该传感器可尝试进一步用于肿瘤外泌体中miRNA的检测。第二章:PNA功能化纳米通道生物传感器用于肿瘤外泌体miRNA检测利用PNA功能化纳米通道生物传感器用于胰腺癌细胞来源外泌体和正常胰腺细胞来源外泌体中miRNA-10b的检测。其中检测胰腺癌细胞来源外泌体miRNA-10b的电信号响应比检测正常胰腺细胞来源外泌体中miRNA-10b高四倍,经统计学分析后,两者信号差异较为显着（P<0.001）,证明该方法可以有效的区分胰腺癌肿瘤来源外泌体与正常对照组;同时,我们利用金标准qRT-PCR检测以上提取的外泌体总RNA,并与纳米通道传感器的检测信号比较,结果表明纳米通道传感器与金标准qRT-PCR方法具有较高的一致性。最后,将传感器用于检测临床血浆样本中外泌体miRNA-10b,发现癌症患者血浆中的外泌体miRNA-10b含量普遍要高于健康个体,证明该方法有望应用于临床癌症的早期筛查。
王秀丽[5]（2021）在《新型循环肿瘤细胞识别界面的设计及应用研究》文中指出循环肿瘤细胞（CTCs）的直径约10-20μm,是从肿瘤患者的原发或转移性肿瘤部位自然脱落后在血液中循环的癌细胞,它是诱发癌症转移与死亡的主要原因。作为一种新型的“液体活检”技术,CTCs分析提供了避免癌症诊断必须采取侵入性组织活检的可能性。因此,CTCs作为一种无侵入性的癌症检测靶标,已成为近年来的研究热点。CTCs的数目以及特异性表面蛋白标志物的表达水平均与癌症的发生和发展呈现一定的相关性。然而,由于CTCs的稀缺性和大量血细胞的存在（每毫升全血中约有1-100个CTCs和数十亿个红细胞及数百万个白细胞）,高纯度富集和灵敏检测CTCs面临巨大挑战。同时,在肿瘤转移的过程中会伴有上皮-间质转化（EMT）的发生,这导致CTCs的异质性,即不同表型的肿瘤细胞的蛋白表达水平有明显差异,目前对异质性CTCs的识别检测研究还非常有限。此外,实现对捕获CTCs的完好释放,有利于对释放后CTCs的进一步功能分析及全面准确开展癌症研究。本论文将CTCs的识别捕获以及分析鉴定作为研究工作的核心,以人乳腺癌细胞（MCF-7和MDA-MB-231）及宫颈癌细胞（He La）为靶细胞,小鼠巨噬细胞（RAW264.7）为对照细胞,采用不同的策略构筑了新型的CTCs捕获界面,成功实现了对CTCs的高效捕获和灵敏检测,并进一步实现了CTCs的高效释放和释放后的细胞活力分析。本论文为CTCs捕获、分离以及识别检测研究提供了新的思路。本论文的主要研究工作如下:1.近红外光开关的Mo S2纳米片@明胶生物平台用于循环肿瘤细胞的捕获、检测与无损释放研究构建了一种近红外光（NIR）开关的生物平台用于CTCs的有效分离和下游分析。首先,在氧化铟锡（ITO）导电玻璃表面上修饰PEG-Mo S2 NFs@明胶纳米复合材料,然后通过适配体与明胶之间的酰胺化反应,将MUC1适配体修饰到界面作为识别元件,从而实现CTCs的特异性捕获。随后,将Mo S2 NFs作为NIR调节的控制元件,在NIR光（808 nm）照射下,基于Mo S2 NFs良好的光热效应,对捕获的CTCs细胞实现了高活性释放。该平台对CTCs的捕获与释放效率分别为89.5%和92.5%。此外,电化学生物平台还可以实现对CTCs的灵敏检测,细胞检测范围为50-106个/m L,检测限为15个/m L。释放的CTCs经连续培养5天,可观察到良好的细胞形态和增殖能力。本工作设计的生物平台是一个简单通用的系统,可用于识别、捕获、释放和检测不同类型的CTCs,在癌症的相关研究中具有潜在的应用前景。2.适配体功能化白细胞膜包覆UCNPs-Fe3O4@Si O2纳米生物探针用于异质性循环肿瘤细胞的有效分离与荧光检测开发了一种基于适配体与白细胞膜修饰的磁性上转换复合材料的纳米探针,实现了CTCs的有效分离和灵敏检测。设计的仿生免疫纳米生物探针具有以下特征:i)通过简单的静电作用将上转换（UCNPs）纳米材料与Fe3O4@Si O2粒子进行有效结合;ii)利用白细胞膜的包覆,减少血液样品中白细胞的干扰并实现CTCs的高纯度分离;iii)捕获的CTCs细胞经磁分离后,可利用UCNPs的荧光进行荧光成像分析。我们设计的免疫磁性纳米生物探针对CTCs的捕获率和纯度分别可达96.5%和95.3%。由于白细胞膜的包覆、适配体功能化以及磁分离和UCNPs荧光成像相结合,此纳米平台显示出对CTCs特异性识别、有效捕获、高效分离和高灵敏检测等特点。3.基于pH敏感染料的纳米生物平台对异质性循环肿瘤细胞的比色检测设计了一种用于异质性CTCs高效捕获和高灵敏度比色检测的纳米平台。该平台由两部分组成:多价适配体修饰的金纳米粒子作为捕获单元,负载适配体及pH响应染料百里香酚酞（TP）和姜黄素（CUR）的二硫化钼纳米片（Mo S2 NFs）作为检测单元,可同时检测异质性CTCs。以MCF-7和He La细胞为CTCs模型,利用多价探针的高亲和性,捕获单元能有效捕获CTCs。在碱性条件下（pH=12.5）,当MCF-7和He La细胞存在时,两种变色染料能显示出明显的颜色变化,为异质性CTCs的可视化同时检测提供了一种快速、灵敏的方法。由于Mo S2 NFs可以实现染料的高效负载以及染料良好的响应性能,该纳米平台对CTCs的检测具有高的灵敏度。该平台可从全血样品以及癌症病人的血样中,成功区分和定量检测出异质性CTCs,为异质性肿瘤细胞的捕获、识别与分析提供了新方法。4.基于双信号放大的超灵敏电化学适配体传感体系用于循环肿瘤细胞上皮-间质转化的研究构建了一种基于DNA杂交链反应（HCR）技术的双信号放大的电化学适配体传感界面,实现了异质性CTCs的超灵敏检测和EMT不同阶段的监测。首先,利用电聚合的方式将聚多巴胺（p DA）修饰到玻碳电极（GCE）表面,然后通过酰胺化反应,将链霉亲和素（SA）引入到电极上。之后,利用生物素与SA之间的强相互作用,将biotin-AS1411适配体固定到GCE上以捕获异质性CTCs。最后,利用适配体对异质性CTCs特异性识别捕获,将亚甲基蓝（MB）和二茂铁（Fc）标记的适配体（MB-NC3S和Fc-SYL3C）的HCR组装体结合到靶细胞表面,实现了靶细胞的高效捕获及灵敏检测。同时,我们还动态监测了MCF-7细胞在EMT过程中的信号变化,为肿瘤细胞EMT过程分析提供了新思路。
沈陈兰[6]（2021）在《新型光学生物传感策略的开发及其在肿瘤标志物检测中的应用研究》文中研究表明恶性肿瘤是一种对人类生命威胁性极大的高危性疾病,其发病率和死亡人数都在逐年升高。肿瘤标志物对于肿瘤的早期诊断、鉴别诊断、疗效观察、复发监测和预后评估具有重要的参考价值,但目前临床使用的各类对肿瘤标志物的测定方法仍有一定局限性。生物传感器是利用生物活性物质作为识别元件,将识别到的靶标通过转换元件输出信号,达到检测目的的装置,它具有简便、高灵敏、高特异等优点,其中,光学生物传感器是运用最多的一种。等温扩增技术是一种在简单条件下可实现的可控的核酸扩增技术,有着高效、低价、简单、精确、快速等优点,可弥补已有的核酸扩增方法的一些缺陷。纳米材料因其独特的光学、稳定性、磁性、导电等特性,为生物传感的发展提供了新工具。本论文主要基于等温扩增和新型纳米材料,结合目前已开发的生物传感器的不足和临床检验诊断学的实际发展需求,构建了一系列高效、简单的光学生物传感新策略并应用于基因点突变、循环肿瘤细胞和特定核酸序列高灵敏、高特异性的检测,为临床肿瘤标志物的检测和生物传感器的研究提供了有力支持。主要研究内容如下:1.基于错配连接反应触发的级联链置换扩增反应构建的比色生物传感器用于PIK3CA基因点突变的检测低丰度肿瘤相关基因点突变高灵敏检测新方法的建立对肿瘤的早期诊断和个体化用药具有重要意义。在本研究中,我们将错配连接反应触发的级联链置换扩增反应（SDA）与G-四联体/Hemin DNAzymes催化反应相结合,提出了一种新型比色生物传感策略,用于灵敏、特异地检测PIK3CAH1047R基因点突变。在此工作中,我们对检测探针的错配碱基类型和突变互补位置进行了详细探讨,获得了对PIK3CAH1047R基因点突变检测的优越能力。错配连接反应可选择性地触发下游级联SDA产生大量的G-四联体序列,随后,大量的G-四联体与Hemin结合形成G-四联体/Hemin DNAzymes,催化底物产生比色信号实现对靶基因点突变的高灵敏检测。基于这种错配连接反应触发的级联SDA,所开发的策略展示出了对点突变良好的区分能力和信号放大效率。本工作中开发的生物传感策略可以检测到低至0.2%的PIK3CAH1047R突变。此外,本生物传感策略可用于分析添加到人类血清样本中的低丰度点突变基因。因此,这种比色生物传感器可能成为遗传分析和临床分子诊断的潜在替代工具。2.基于适配体修饰的磁珠和碳量子点/羟基氧化钴纳米片构建的新型三明治样荧光细胞传感器用于循环肿瘤细胞的检测作为“肿瘤液体活检”的一部分,循环肿瘤细胞（CTCs）中包含了大量的肿瘤信息,所以,高灵敏地检测CTCs对临床诊断和肿瘤治疗有很大帮助。本研究运用适体修饰的磁珠（Apt@MBs）和碳量子点/氢氧化钴纳米片信号系统（CDs/CoOOH）开发了一种新型细胞传感器,用于超灵敏和特异性检测CTCs。首先,将氨基功能化的磁珠（MBs）与羧基修饰的MUC1适体（Apt）交联得到Apt@MBs。然后,将叶酸（FA）功能化的碳量子点（FA@CDs）组装到羟基氧化钴纳米片（CoOOH）上,得到荧光信号淬灭状态的FA@CDs/CoOOH。在检测系统中,Apt@MBs特异性识别并富集靶MCF-7细胞,形成Apt@MBs/MCF-7细胞复合物,随后,此复合物再与FA@CDs/CoOOH结合得到三明治样Apt@MBs/MCF-7细胞/FA@CDs/CoOOH复合物。最后,加入抗坏血酸（AA）可分解CoOOH释放CDs,大量CDs的荧光作为有效的信号输出。所开发的细胞传感器对MCF-7细胞的线性检测范围为10105 cell/m L,检测限（LOD）为5 cell/m L,这是由于Apt@MBs特异性的识别能力和有效的富集能力以及FA@CDs/CoOOH很好的抗干扰能力和信号放大能力。最重要的是,该细胞传感器可成功地将MCF-7细胞从白细胞样本中检测出来,展示出在超灵敏CTCs检测中潜在的临床应用价值。3.基于等温扩增和羟基氧钴纳米片/量子点双重信号放大策略的新型生物传感器用于PML/RARα融合基因的检测通过结合三链DNA杂交触发的链置换扩增（tri-HT SDA）和氢氧钴纳米片/量子点（CoOOH/QD）纳米材料放大,我们开发了一种检测PML/RARα融合基因（P/R）的新型生物传感器。我们首次使用等温扩增和纳米材料扩增两种方法相结合对特异性DNA序列进行检测。首先,将QD组装到CoOOH上得到CoOOH/QD,用PEI修饰CoOOH/QD后得到PEI/CoOOH/QD,然后,在PEI上修饰连接探针（LP）,最后,PEI/CoOOH/QD通过LP连接到Fe3O4/Au上,形成Fe3O4/Au@LP@PEI/CoOOH/QD信号系统。在检测系统中,两条检测探针可以识别P/R,形成三链DNA杂交结构,而后触发下游SDA。然后,通过连续的链置换延伸和剪切,获得了大量的tri-HT SDA产物（DNAzymes）。随后,得到的DNAzymes可以与LP杂交并将其裂解,释放出Fe3O4/Au@LP@PEI/CoOOH/QD中的PEI/CoOOH/QD到体系上清液中。最后,抗坏血酸分解CoOOH释放QD,从而产生有效的信号输出。由于tri-HT SDA特异性的识别功能及高效的扩增能力和CoOOH/QD良好的抗干扰性和较强的信号放大能力,该生物传感器在P/R检测中具有较宽的线性检测范围（10 fM10 nM）和较低的LOD（5.50 f M）,在临床工作中对特异性DNA序列的灵敏检测具有一定的应用潜力。
彭颖[7]（2021）在《Thomsen-Friedenreich单克隆抗体（A78-G/A7）在甲状腺乳头状癌中的作用靶点研究》文中研究表明[目的]在课题组前期研究发现Thomsen-Friedenreich抗原（TF-Ag）在甲状腺乳头状癌（Papillary Thyroid Carcinoma,PTC）中呈现高表达的基础上,探索Thomsen-Friedenreich抗体（TF-Ab）对PTC的作用靶点,为进一步探索TF-Ab在PTC治疗效应中的机制和研发PTC靶向治疗药物提供理论依据和实验基础。[方法]（1）Thomsen-Friedenreich单克隆抗体（mAb A78-G/A7）在甲状腺癌细胞株中的潜在作用探索:利用免疫荧光法检测筛选出TF-Ag阳性表达率较高的甲状腺癌细胞株,以500μg/μl原浓度的mAb A78-G/A7按照梯度浓度（1/10,1/20,1/40,1/60,1/80）干预BCPAP、8305C细胞后进行黏附实验筛选出mAb A78-G/A7治疗BCPAP、8305C细胞的最低有效使用浓度,以mAb A78-G/A7最低有效使用浓度干预BCPAP、8305C细胞后使用CCK8试剂盒检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡、Transwell实验检测细胞侵袭及细胞迁移,观察mAb A78-G/A7干预对BCPAP、8305C细胞株是否存在抑癌效应。（2）Thomsen-Friedenreich单克隆抗体（mAb A78-G/A7）在裸鼠PTC异种移植瘤中的治疗作用研究:收集PTC患者新鲜肿瘤组织样本,构建裸鼠PTC异种移植瘤模型。将来源于同一患者的肿瘤组织移植到不同的裸鼠上,对比分析移植瘤的生长特性、血液供应情况、苏木素-伊红染色（Hematoxylin-Eosin Staining,HE染色）及TF-Ag表达情况,评价来源于同一患者肿瘤组织构建成的不同移植瘤之间进行对照研究的可靠性;进一步将来源于同一患者肿瘤组织构建形成的不同裸鼠PTC异种移植瘤随机纳入Ctrl组（每周两次瘤体多点原位注射0.9%生理盐水）、0.5μg/μl治疗组（每周两次瘤体多点原位注射0.5μg/μl mAb A78-G/A7）及2.5μg/μl治疗组（每周两次瘤体多点原位注射2.5μg/μl mAb A78-G/A7）,各组组内又进一步划分为治疗1周组及治疗2周组,每次注射前均对瘤体进行拍照、测量及记录,观察mAb A78-G/A7干预对裸鼠PTC异种移植瘤的治疗效应。（3）抗TF-Ag单克隆抗体（mAb A78-G/A7）治疗对PTC差异表达基因影响的研究:通过RT2 Profiler PCR Arrays检测手段筛选出PTC肿瘤组织较癌旁组织的差异表达基因（N=2）,采集更多组织样本QRT-PCR验证及筛选得出PTC肿瘤组织较癌旁组织稳定差异表达的基因（N=6）,生物信息学技术挖掘TCGA数据库分析PTC肿瘤组织较癌旁组织的差异表达基因,取QRT-PCR验证筛选出的稳定差异表达基因和生物信息学技术筛选出的稳定差异表达基因之间的交集,视为PTC的差异表达基因;基于Illumina测序平台分析mAb A78-G/A7干预对PTC细胞真核转录组的影响,将测序结果与PTC差异表达基因进行比较,筛选出mAb A78-G/A7治疗PTC可能的基因靶点;进一步通过QRT-PCR、Western-Blotting和免疫组化技术验证mAb A78-G/A7治疗PTC可能的基因靶点。（4）临床样本探讨分析PTC患者TF-Ag及天然TF-Ab表达特征,探索TF-Ab中和TF-Ag、发挥潜在抑癌作用的证据:采用免疫荧光检测分析临床PTC患者肿瘤组织样本中TF-Ag表达情况,并对TF-Ag表达情况和患者病例样本特征（多灶、淋巴结转移、病理长径、TSH及Tg表达水平）进行相关性分析;采用ELISA检测对应血清样本中天然TF-Ab表达特征,并将TF-Ag与TF-Ab进行相关性分析,探索TF-Ab可中和TF-Ag的证据;将天然TF-Ab表达特征与部分预后相关临床指标及PTC差异表达基因作相关性分析,挖掘天然TF-Ab表达特征在PTC早期无创筛查及判断预后方面存在的潜在价值并为TF-Ab在PTC中的抑癌作用提供证据。[结果]（1）Thomsen-Friedenreich单克隆抗体（mAb A78-G/A7）在甲状腺癌细胞株中的潜在作用探索:BCPAP作为TF-Ag表达阳性率相对较高（79.460+2.033）的PTC细胞株被选做实验细胞株,8305C作为TF-Ag表达阳性率相对较高（30.880±0.699）的ATC细胞株被作为辅助对照细胞株以观察TF-Ab在不同病理亚型TC细胞株上的治疗效应。经mAb A78-G/A7处理后,TC细胞株黏附指数较Control组显着下降,且细胞株黏附指数随抗体浓度增加而降低,以1/10（BCPAP:0.411± 0.008;8305C:0.635± 0.065）及1/20（BCPAP:0.407±0.022;8305C:0.735±0.007）抗体浓度的抑制效果最为显着,我们选用了1/20的抗体浓度;免疫荧光验证1/20的mAb A78-G/A7浓度中和TF-Ag的效率显示,经1/20 mAb A78-G/A7处理后,BCPAP及8305C的TF-Ag表达较Control组显着下降（BCPAP:8.444± 0.175 vs.13.860± 0.292,8305C:3.156± 0.319 vs.11.290 ±,P<0.05）,提示1/20的mAb A78-G/A7浓度可有效中和TF-Ag的表达;CCK8试剂盒检测结果显示,经mAb A78-G/A7处理后,8305C的细胞增殖指数较Control组显着下降（0.569±0.018 vs.0.7987±0.029,P<0.05）,而 mAb A78-G/A7 处理的BCPAP细胞增殖指数则较Control组无显着改变（0.357±0.009 vs.0.382± 0.019）;细胞周期检测结果显示,经mAb A78-G/A7处理后,BCPAP及8305C的G1静止期细胞均较Control组显着增加（BCPAP:48.300±1.193 vs.42.056±1.156,8305C:22.377±1.159 vs.10.473±0.866,P<0.05）;细胞凋亡检测结果显示,经 mAb A78-G/A7处理后,8305C的细胞凋亡率较Control组显着增加（62.910± 2.311 vs.42.270±2.284,P<0.05）,而 mAb A78-G/A7 处理的 BCPAP 细胞凋亡率则较 Control组无显着改变（27.090±0.584 vs.24.650±0.879）;Transwell 检测结果显示,经 mAb A78-G/A7 处理后,BCPAP 及 8305C 的侵袭细胞数（90.000±1.528,23.670±3.712）及迁移细胞数（73.670 ± 4.667,16.670±2.404）均较 Control 组（侵袭:147.700±4.910,85.670±3.528;迁移:176.300±5.812,47.330±1.764）显着下降（P<0.05）。（2）Thomsen-Friedenreich单克隆抗体（mAb A78-G/A7）在裸鼠PTC异种移植瘤中的治疗作用研究:对比分析来源于同一患者的肿瘤组织所构建成得不同移植瘤的生长特性、血液供应情况、HE染色及TF-Ag表达情况并无显着差异,可进一步进行对照研究;进一步进行mAb A78-G/A7干预的结果表明mAb A78-G/A7治疗组移植瘤瘤体均较Ctrl组瘤体消退迅速,治疗2周组较治疗1周组消退更明显,随着时间的推移2.5μg/μl治疗组较0.5μg/μl治疗组消退呈现更显着趋势,但暂无统计学意义。免疫荧光检测发现2.5μg/μl治疗组和0.5μg/μl治疗组肿瘤组织TF-Ag表达均较Ctrl组显着下降（P<0.05）,治疗2周组较治疗1周组而言下降更明显（0.5μg/μl 治疗组:0.013±0.004 vs.0.055±0.005,2.5 μg/μl治疗组:0.001±0.000 vs.0.040±0.004,P<0.05）,而治疗组内比较发现2.5μg/μl治疗组与0.5μg/μl治疗组之间也存在显着差异（P<0.05）。（3）抗TF-Ag单克隆抗体（mAb A78-G/A7）治疗对PTC差异表达基因影响的研究:采用RT2 Profiler PCR Arrays手段结合生物信息学技术挖掘TCGA数据库筛选出9个可能性较大的PTC差异基因;基于测序结果显示,与未做特殊处理的PTC细胞相比,mAb A78-G/A7处理后的PTC细胞呈现了较多差异表达的mRNA,但与上述9个可能性较大的PTC差异基因比对发现mAb A78-G/A7干预后仅有DDIT3、DDB2、E2F4三个基因呈现存在统计学意义的改变;QRT-PCR、Western blotting及免疫组化检测进一步检测体内外实验样本证实mAb A78-G/A7干预确实可以有效影响PTC差异表达基因DDIT3、DDB2、E2F4的表达。（4）临床样本探讨分析PTC患者TF-Ag及天然TF-Ab表达特征,探索TF-Ab中和TF-Ag、发挥潜在抑癌作用的证据:采集PTC患者临床肿瘤组织免疫荧光检测分析发现PTC肿瘤组织中均表达TF-Ag且发生淋巴结转移患者的TF-Ag表达量较无淋巴结转移患者的更高;采集患者对应临床血清样本ELISA检测分析发现,相较于健康人群而言,PTC患者天然TF-Ab表达特征较健康人群存在显着差异且IgG亚型血清浓度与对应肿瘤组织中的TF-Ag表达量呈显着负相关,为TF-Ab可中和TF-Ag提供了一定证据;此外,天然TF-Ab表达特征与患者部分临床病例特征存在显着相关性,在PTC的早期无创筛查及判断预后方面存在一定的潜在价值;更重要的是,PTC患者血清天然TF-Ab IgG亚型血清浓度与PTC差异表达基因DDIT3、DDB2、E2F4呈显着正相关,进一步证实了 TF-Ab治疗在PTC中可能存在的分子作用机制。[结论]mAb A78-G/A7对PTC细胞株及裸鼠移植瘤存在显着抑癌效应;mAb A78-G/A7干预可对PTC差异表达基因DDIT3、DDB2、E2F4产生显着影响;PTC患者的天然TF-Ab IgG血清浓度与TF-Ag呈显着负相关,为TF-Ab的中和TF-Ag作用提供了证据;天然TF-Ab亚型抗体表达特征分析在初发PTC患者的早期无创筛查及判断预后方面存在一定的潜在价值;天然TF-Ab IgG亚型血清浓度与PTC差异基因DDIT3、DDB2、E2F4存在显着正相关,进一步证实了TF-Ab治疗在PTC中可能存在的分子作用机制。
陈中原[8]（2021）在《新型功能化磁性纳米体系用于肿瘤成像与联合治疗的研究》文中研究表明近年来,以铁氧化物纳米粒子（iron oxide nanoparticles,IONPs）为代表的磁性纳米材料受到了生物医学研究领域的密切关注,这主要是因为:其一,IONPs是一种无毒材料,具有良好的生物相容性和生物可降解性;其二,IONPs的表面易于改性和修饰,因而可在其表面连接功能化分子,实现包括肿瘤靶向、化疗药物和治疗基因的递送以及荧光成像在内的多种不同功能;其三,IONPs的磁学性质可控,随粒径的增大,IONPs将发生从顺磁性到超顺磁性再到铁磁性的转变;其四,根据磁学特性的不同,IONPs可在磁共振成像（magnetic resonance imaging,MRI）中作为T1或T2造影剂,或是在交变磁场（alternating magnetic field,AMF）中产生高温,实现药物的可控释放和磁热治疗。因此,基于IONPs的纳米诊疗体系在肿瘤的成像、诊断及治疗方面具有广阔的发展前景和临床转化的应用潜力。在本论文中,我们探索了关于IONPs的合成、功能化修饰及其生物医学应用中的一系列基本和关键的问题。具体而言,我们基于超顺磁性IONPs构建了诊疗一体化纳米体系,以实现对肿瘤细胞和正常细胞的分子影像学识别与区分,并在动物肿瘤模型中进行了双模态成像和基因沉默增敏的磁热-化疗联合治疗。在本论文的第一章中,我们回顾近代癌症治疗和纳米技术的发展历程,总结了近几十年来关于IONPs的合成、表面改性及功能化修饰的研究成果,并讨论了IONPs在肿瘤成像、诊断与治疗应用研究领域的最新进展情况,最后我们对基于IONPs多功能纳米体系的肿瘤诊疗一体化应用进行了展望。在第二章中,我们搭建了用于实施高温分解法合成IONPs的可编程线性升温反应系统,并成功地合成了多种形貌规则、分散性好且具有高饱和磁化强度的超顺磁性IONPs。随后,我们对所合成的油相IONPs进行表面改性,使其在水相中具有良好的分散性和稳定性。在第三章中,我们首先针对肿瘤细胞高表达的HSP90αmRNA,设计了发卡状分子信标（HSP90α-MB）。随后我们基于11 nm立方体铁氧化物纳米粒子（iron oxide nanocubes,IONCs）,构建了基因递送纳米载体IONC-PAMAM-P123（IPP）,并装载HSP90α-MB,以得到IPP/MB纳米信标。在活细胞中,IPP/MB可实时检测HSP90αmRNA的表达水平,从而区分肿瘤细胞与正常细胞,并促进核酸酶对目标mRNA的降解。最后我们探究了IPP/MB纳米信标在动物肿瘤模型中的T2加权MRI造影能力。在第四章中,我们以15 nm八面体掺锌铁氧化物纳米粒子（zinc-doped iron oxide nano-octahedrons,ZIONOs）为磁性内核,构建了具有肿瘤细胞靶向性的纳米诊疗体系ZIPP-Apt:DOX/siHSPs。随后,我们对所构建的磁性纳米体系进行近红外荧光（near-infrared fluorescence,NIR）染料Cy5.5修饰,并在动物肿瘤模型中验证了其NIR/MRI双模态成像能力。最后,我们在细胞和动物水平上探究了ZIPP-Apt:DOX/siHSPs纳米诊疗体系介导的基因沉默增敏磁热-化疗联合治疗对肿瘤的抑制效果。结果表明,ZIPP-Apt:DOX/siHSPs在AMF的作用下能有效促进肿瘤细胞的凋亡和坏死,对肿瘤的生长具有显着的抑制效果,而且对血液和主要器官没有明显的毒副作用。综上所述,本论文基于IONPs构建的多功能纳米诊疗体系,不仅在细胞水平上能对肿瘤相关mRNA进行原位检测和调控,而且在动物肿瘤模型中可实现靶向多模态成像和基因沉默增敏的磁热-化疗联合治疗。这为磁性纳米诊疗体系的生物医学应用和临床转化开辟了新的道路。
万玲玲[9]（2021）在《循环肿瘤细胞与代谢组学的多元分析在早期非小细胞肺癌诊断中的应用价值》文中研究表明据世界卫生组织国际癌症研究中心（International Agency for Research on Cancer,IARC）资料统计显示,2018年全球约有209万肺癌新发病例,约176万死亡病例,发病率以及死亡率均位居第一位,5年生存率仅为18%。其主要原因是早期肺癌缺少典型的临床症状,确诊时已经是中晚期,或者已出现转移,因此肺癌的早期诊断是减少死亡以及改善预后的关键因素。目前肺癌诊断的常用方法有影像学检查、痰脱落细胞学和支气管镜检,这些方法容易造成漏诊与误诊,且仪器价格昂贵。因此迫切需要寻找到新的早期肺癌诊断的生物标志物。传统的肺癌肿瘤标记物是由肿瘤细胞产生的正常细胞缺乏或含量极微的抗原性物质,可以用于肿瘤筛查、预后监测及治疗效果监测等,常见的肺癌标志物癌胚抗原（carcinoembryonic antigen,CEA）、细胞角蛋白19片段（cytokeratin 19 fragment,CYFRA21-1）、神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific-enolase,NSE）、胃泌素释放前体（progastrin releasing peptide,Pro-GRP）、鳞状上皮细胞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen,SCC）等已经广泛用于肺癌的诊断方面,但是还不能用于早期筛查方面。细胞因子（cytokine,CK）是免疫系统的重要组成部分,参与机体正常的免疫稳态,异常情况下也会成为一些疾病发生发展的重要介质,参与炎症与肿瘤的发生。炎症细胞因子是慢性炎症与肺癌之间的桥梁,通过检测细胞因子在血清中的表达水平,可以对肺癌早期诊断有一定的参考价值。循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTCs）是指来源于肿瘤组织并进入外周血循环的肿瘤细胞,即使在肿瘤形成的早期阶段,大量肿瘤细胞也可能流入循环系统,因此CTCs可以作为肿瘤无创和实时监测的工具,同时也是肿瘤患者液体活检重要标志物之一。法国一项研究表明,在慢阻肺患者中CTCs可较LDCT提前4-5年发现早期肺癌患者。早期CTCs检测主要以单纯计数为主,近年来用二代测序（next generation sequencing,NGS）技术对CTCs进行单细胞测序,为CTCs的研究提供了新的利器。我们前期研究显示,LDCT联合CTCs检测可以提高早期肺癌筛查的准确率,对捕获到的CTCs细胞进行NGS分析发现KIT、SMARCB1、TP53、ERBB2、PDGFRA、CFS1R and FGFR1等基因突变。代谢组学是研究某一时刻下正在发生的生命活动。代谢组学作为基因组学与蛋白质组学的补充,可以对肿瘤发生发展过程中的所有代谢物进行定性和定量分析。研究代谢物的表达量,代谢物与生理病理变化的关系,有助于筛选肿瘤患者早期诊断的生物标志物。研究表明,基于LC-MS的代谢组学方法在非吸烟女性非小细胞肺癌患者的血清代谢组学发现了56种差异代谢物,代谢谱特征为能量代谢紊乱、氨基酸代谢紊乱和脂类代谢紊乱等。Musharraf等采用GC-MS技术对肺癌患者、慢性阻塞性肺疾病患者、健康吸烟者和健康不吸烟者的血浆进行分析发现,肺癌患者血浆中脂肪酸、葡萄糖水平较其他组均升高。而Ding等人的研究提示糖代谢紊乱可能与肺癌密切相关。上述研究通过代谢组学方法发现了肺癌糖代谢增强和脂肪代谢的减弱,发现了一些潜在肺癌的肿瘤标志物。因此通过代谢组学寻找肺癌早期诊断的生物标志物具有重要意义。在本研究中,我们利用联合检测早期非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞、传统肿瘤标志物、细胞因子以提高早期非小细胞肺癌的诊断率,利用单细胞测序的方法检测早期非小细胞肺癌患者外周血CTCs的突变基因,LC-MS非靶向代谢组学方法对早期非小细胞肺癌患者和健康对照者血清中代谢物质进行定性分析,通过分析探究早期非小细胞肺癌患者基因突变和代谢紊乱状态,将健康人与早期非小细胞肺癌患者很好的区分开,并从中探索早期非小细胞肺癌的生物学标志物。第一部分 循环肿瘤细胞与传统肿瘤标志物、细胞因子联合检测对早期非小细胞肺癌诊断的意义目的:探讨循环肿瘤细胞（CTCs）与传统肿瘤标志物、细胞因子联合检测在非小细胞肺癌早期诊断中的价值。方法:将2018-2019年首次在河北医科大学第四医院胸外科住院手术后确诊的48例早期非小细胞肺癌患者作为病例组,50例健康体检者作为对照组,分别检测两组人群外周血循环肿瘤细胞计数、肿瘤标志物及细胞因子。1.本实验通过采用新型CTCs捕获装置Cell Collector对早期非小细胞肺癌患者和健康人外周血CTCs进行捕获富集,应用免疫荧光技术进行检测鉴定。2.利用罗氏cobas e 801全自动化学发光免疫分析仪检测早期非小细胞肺癌患者与健康人外周血清肿瘤标志物癌胚抗原（carcinoembryonic antigen,CEA）、细胞角蛋白19片段（cytokeratin 19 fragment,CYFRA21-1）、神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific-enolase,NSE）、胃泌素释放前体（progastrin releasing peptide,Pro-GRP）、鳞状上皮细胞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen,SCC）水平。3.利用贝克曼NAVIOS流式细胞仪微球阵列术检测早期非小细胞肺癌患者和健康人外周血清中细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-a、INF-g和IL-17A水平。4.利用受试者工作曲线（ROC）分析各指标单独检测与联合检测对早期非小细胞肺癌诊断价值,应用logistic回归分析比较联合肿瘤标记物检测和单独肿瘤标记物检测的灵敏度和特异度。所有数据采用SPSS 22.0软件进行统计分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.早期非小细胞肺癌患者外周血中的CTCs计数水平明显高于健康人,其计数水平、PD-L1表达水平与年龄、性别、吸烟史、临床病理分期和肿瘤大小对CTCs和/或PD-L1表达均无统计学差异（P>0.05）。2.利用ROC曲线分析CTCs表达水平对于早期非小细胞肺癌患者的诊断效果,CTCs对早期肺癌诊断ROC曲线下面积（AUC）为0.813,诊断灵敏度为62.5%,CTCs表达率对早期非小细胞肺的诊断有统计学意。（P<0.01）3.早期非小细胞肺癌患者外周血肿瘤标志物单独检测,标志物CEA（P<0.001）、CYFAR21-1（P<0.1）、NSE（P<0.001）水平均高于健康人,差异均有统计学意义。其中NSE敏感度最高,CEA与CYFAR21-1具有较高特异度。4.通过Logistic回归模型拟合CEA、CYFAR21-1、NSE联合检测结果,建立回归诊断模型Logit（P）,联合三种CEA、CYFAR21-1、NSE肿瘤标志物检测诊断早期非小细胞肺癌的灵敏度可达77.08%,特异度为74.00%。5.CTCs计数与肿瘤标志物单独与联合检测的诊断效果比较,结果显示（CTCs+CEA）对早期非小细胞肺癌的诊断效果最好,灵敏度达87.5%,特异度达到82.0%。其次为多个肿瘤标志（CEA+CYFAR21-1+NSE）联合检测,其灵敏度为89.58%,特异度为74.00%。6.早期非小细胞肺癌患者与健康人外周血细胞因子水平比较显示,早期非小细胞肺癌患者与健康人IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-a和IL-17A水平差异有统计学意义。（P<0.05）进一步分析,IL-17A对早期非小细胞肺癌的诊断效果最好。7.CTCs联合IL-17A检测,诊断早期非小细胞肺癌的灵敏度91.67%,特异度为73.33%。8.CTCs联合CEA与IL-17A检测,诊断早期非小细胞肺癌的灵敏度95.83%,特异度为58.00%。小结:1.本研究采用新型CTCs捕获装置Cell Collector对循环肿瘤细胞进行体内富集,并应用免疫荧光法检测循环肿瘤细胞,证实该方法具有较高的灵敏性及特异性,可以应用于早期非小细胞肺癌的检测。2.肿瘤标志物检测在早期非小细胞肺癌的诊断中有一定的价值,CTCs联合传统肿瘤标志物可以提高早期非小细胞肺癌的检出率,CTCs联合CEA诊断效果最好。3.CTCs联合细胞因子IL-7A检测,其灵敏度与特异度均高于单独检测。4.CTCs联合血清肿瘤标志物和/或细胞因子检测可以明显提高早期非小细胞肺癌患者的诊断敏感度,对早期非小细胞肺癌的诊断具有潜在的临床价值。第二部分 早期非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞基因突变的二代测序研究目的:利用二代测序技术检测质检合格的19例早期非小细胞肺癌患者外周血的CTCs,分析CTCs细胞的基因突变情况,探讨CTCs基因突变与早期非小细胞肺癌发生发展的关系,为早期非小细胞肺癌的筛查与诊断提供相应的分子标志物。方法:1.在早期非小细胞肺癌外周血CTCs收集完成后,根据染色试剂盒的说明对捕获的CTCs的细胞收集器进行染色和鉴定,并提供阴性对照（NK92细胞）和阳性对照（SK-BR-3细胞）,进行CD45（Exbio,克隆Mem-28-Alexa647）抗体,细胞角蛋白7/19/pan-CK抗体（Exbio Praha,克隆A53-B/A2-Alexa488）和PD-L1（克隆PD-L1,Abcam）抗体染色分析,随后用Hoechst33342（Sigma）进行核染色,鉴定肿瘤细胞。2.免疫荧光染色鉴定CTCs后,定位并剪切显微镜下CTCs区域。将取样针中的一小部分CTCs收集到PCR管中,采用MALBAC方法进行全基因组扩增。采用Qubit3.0和Nanodrop2000（Thermo Fisher）进行定量分析。结果:1.对19例早期非小细胞肺癌患者外周血CTCs进行二代测序,检测127个基因突变,早期非小细胞肺癌患者外周血CTCs基因突变比例大于50%的有94.7%。其中有4例患者外周血CTCs基因突变比例>70%,12例患者外周血CTCs基因突变比例在60%-70%之间,2例患者外周血CTCs基因突变比例在50%-60%之间,有1例患者外周血CTCs基因突变在50%以下。2.对19例早期非小细胞肺癌患者外周血CTCs基因突变频率进行分析,19例早期非小细胞肺癌患者外周血CTCs高频突变基因分别为NOTCH1、IGF2、EGFR、PTCH1、ARID1A。3.对19例早期非小细胞肺癌患者外周血CTCs进行二代测序,共检测到62个肺癌相关基因突变,检测到229个突变位点。统计分析高频突变基因发现,多位点突变频率最高的是TP53和ARID1A。4.二代测序结果显示,在早期非小细胞肺癌患者外周血CTCs基因突变中以TP53、NOTCH1、ARID1A、SMARCA4多位点基因突变频率较高,占所有突变位点的37.99%。5.二代测序结果显示,在早期非小细胞肺癌患者外周血CTCs基因突变中,TP53基因突变分别与ARID1A共突变11例,与NOTCH1共突变11例,与SMARCA4基因共突变9例,与ALK共突变8例,TP53基因突变与EGFR、ALK、CDKN2A等60个基因存在多基因共突变现象。结论:二代测序结果发现19例早期非小细胞肺癌患者外周血CTCs基因突变比例较高,高频突变基因分别为NOTCH1、IGF2、EGFR、PTCH1、ARID1A。这些基因突变是否可用于早期非小细胞肺癌筛查的分子标志物有待于进一步证实。小结:第二代测序结果显示19例早期肺癌患者外周血CTCs基因突变中有62个肺癌相关突变,其中TP53、NOTCH1、ARID1A和SMARCA4是与早期肺癌外周血CTCs基因相关的高频突变。而这些基因突变是否可以作为肺癌早期筛查的分子标志物,还有待进一步证实。第三部分 代谢组学多元分析在早期非小细胞肺癌诊断中的应用目的:研究早期非小细胞肺癌患者与健康人的代谢产物的差别,探讨LC-MS非靶向代谢组学技术寻找代谢差异物应用于早期肺小细胞肺癌诊断的价值。方法:1.临床样本收集,收集早期非小细胞肺癌患者及健康人血清,其中早期非小细胞肺癌CTCs阳性患者30例（均为I、II期腺癌）与健康对照30例,进行空腹采血。5毫升全血收集到一个无菌凝固BD真空血液收集管,立即颠倒混合5-8倍,在30-120分钟,4 C和离心机在4摄氏度10分钟,1300克和0.2-1毫升血清转移到1.5毫升EP管,保存在-80 C。与此同时,30名健康对照为空腹血液取样,采血与血清制备同肺癌组。2.用LC-MS非靶向代谢组学方法检测早期非小细胞肺癌和健康对照血清进行分析,采集血清样品100μL,采用400μL甲醇:乙腈（1:1,v/v）溶液提取代谢产物。将混合物旋涡30秒,在冰上超声10分钟,此步骤重复3次。样品在-20℃下放置30分钟。在4℃下13000 g离心15分钟后,将上清小心转移到样品瓶中进行LC-MS/MS分析。3.使用Uplc-Triple-Tof-Ms平台（AB SCIEX,USA）分析代谢产物。采用Exion LCTMAD系统（AB Sciex,USA）,ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（100 mm 2.1 mm内径,1.7μm;水域,米尔福德,美国）。流动相A为水（含0.1%甲酸）,流动相B为乙腈/异丙醇（1/1）（含0.1%甲酸）;流速为0.40m L/min,进样量为20μL,柱温为40。作为系统调整和质量控制过程的一部分,通过混合所有等体积的样品来制备复合质量控制样品（QC）。QC样品定期进样（每9个样品）,以监测分析的稳定性。QC样品的处理和测试方法与分析样品相同。最好是代表整个样本集,并监测分析的稳定性。4.UPLC-TOF/MS分析后,将原始数据导入Progenesis QI 2.3（Waters Corporation,Milford,USA）进行峰检测和比较。预处理结果生成了一个由保留时间（RT）、质量电荷比（m/z）值和峰值强度组成的数据矩阵。所有样本中至少有50%的代谢特征被保留。过滤后,估计某一特定代谢物最低代谢物值的一半。在这些特定样本中,代谢物水平低于定量下限,每个代谢物特征用总和归一化。采用QC样品进行数据质量控制（重复性）,删除质量控制样品的相对标准偏差（RSD）变量>30%,以得到最终的数据矩阵,供后续分析。5.非靶标代谢组学统计分析,通过与数据库（http://www.hmdb.ca/,https://metlin.scripps.edu/）匹配,最终得到代谢物列表和数据矩阵。采用主成分分析（PCA）和偏最小二乘判别分析（PLS-DA）,正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）分析差异代谢物。通过模型参数R2和Q2来评估模型的有效性,这两个参数分别为模型的可解释性和可预测性提供了信息,并避免了过度拟合的风险。采用OPLS-DA模型计算预测变量重要性（VIP）,进行差异代谢物分析,筛选标准是变量投影重要性（VIP）大于1.0且t检验结果P值<0.05。用于代谢物相关通路分析的数据库是京都基因和基因组百科全书（KEGG;http://www.genome.jp/kegg/）。6.采用SPSS 22.0软件对数据进行分析。计量数据采用均值标准差服从正态分布,不服从正态分布的采用中位数（四分位数）,计数数据采用频率或率。正态分布计量资料比较采用t检验,非正态分布计量资料比较采用秩和检验。计数资料比较采用卡方检验。采用ROC曲线分析不同指标对肺癌的诊断效果。假定值P-values<0.05为显着性。结果:1.采用非靶标LC-MS检测将早期非小细胞肺癌患者（LC）和健康人（NC）血清样本进行正负离子模式全扫描,得到原始数据和图谱,血清LC-MS非靶向代谢组学检测方法根据美吉自主数据库分析鉴定血清样本的TIC,覆盖的所有主代谢通路的1212个代谢产物进行了检测分析,涵盖了31条主要代谢通路。2.对数据进行PCA分析,观察早期非小细胞肺癌与健康人的总体代谢差异和组内样本之间的差异度大小,PCA得分图结果显示早期非小细胞肺癌患者与健康人代谢物有明显差异。应用ropls Version1.6.2软件PCA对检测30例早期非小细胞肺癌患者和健康人样本的差异代谢物数据进行趋势分析,观察到早期非小细胞肺癌患者与健康人之间的变异度大小。PCA、PLS-DA、OPLS-DA得分图结果显示早期肺非小细胞癌患者与健康人样本可以很明显分开。因此考虑早期非小细胞肺癌与健康人个体内差异代谢物有明显不同。3.统计学分析发现组间含量有差异的代谢物共100个,应用ropls Version1.6.2软件中的PLS-DA、t检验（Student’s t-test）以及差异倍数分析法（FC）筛选能区别早期非小细胞肺癌患者和健康人的差异代谢特征。结合VIP>1,P<0.05及FC>1或FC<1,结果发现,两组样本之间存在100个差异有明显统计学意义的代谢特征。早期非小细胞肺癌患者差异代谢物最显着的涉及脂质物质,特别是鞘脂（如三己基神经酰胺）和甘油磷脂（如心磷脂）,它们是细胞膜的组成成分。4.筛选出的100个差异代谢物通过人类代谢组数据库（Human Metabolome Database,HMDB）分类为化合物,使用KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）数据库进行pathway注释和富集分析。我们筛选出了6种不同类型的代谢物,KEGG通路分析分为六类。通过KEGG富集的三个最重要的途径是癌症中的胆碱代谢、甘油磷脂代谢和逆行的内源性大麻素信号通路。5.肿瘤的发生发展与糖脂代谢密切相关,本研究中,通过KEGG通路分析,糖脂代谢通路和肿瘤代谢通路中富集的差异代谢物较多。21个差异代谢物涉及脂质代谢途径,5个差异代谢物涉及多糖合成和代谢途径,15个差异代谢物涉及肿瘤代谢途径,此为研究重点关注的通路。6.筛选早期NSCLC的潜在生物标志物,研究进一步比较了早期非小细胞肺癌患者与健康人之间脂质代谢途径、多糖合成和代谢途径以及肿瘤相关途径中的差异代谢物,并使用工作者受试曲线（ROC）和曲线下面积（AUC）,得出10个差异代谢物,3个上调,7个下调。小结:1.本次研究探索非靶标代谢组学研究早期非小细胞肺癌的辅助诊断标志物的方法。该种方法对标志物进行半定量分析,使筛选出的标志物具有可重复性,有效提高了其临床应用价值。2.早期非小细胞肺癌患者呈现出不同于健康人的代谢谱图特征,早期非小细胞肺癌患者多种代谢物的含量显着不同于健康人,这为进一步实验与临床研究提供了一定的参考依据,并为实现早期非小细胞肺癌的诊断提供一定的指导。3.通过我们的研究,得出10种差异种代谢物作为潜在早期NSCLC生物标志物,可用于辅助诊断,结果需要进一步靶向代谢组学技术进行验证。4.代谢组学多元分析得出差异代谢物主要集中在糖脂代谢通路特别是磷脂代谢通路,脂类代谢在早期非小细胞肺癌的发生发展中起到重要作用。我们提出该通路中的关键酶的可能作为新的治疗靶点用于今后的研究。
胡博[10]（2021）在《长链非编码RNA CYTOR通过调节miR-125b-5p/KIAA1522轴影响肝细胞癌增殖、凋亡和细胞周期的机制研究》文中提出背景:肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是一种原发性肝脏恶性肿瘤,在世界范围内发病率高、治疗效果欠佳。随着靶向治疗药物如索拉非尼、伦伐替尼,以及免疫治疗药物如免疫检查点抑制剂的出现,其预后得到一定的改善,但5年生存率仍旧不高。竞争性内源性RNA（competing endogenous RNA,ceRNA）揭示了RNA间相互作用的新机制,即以长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）为主的非编码RNA通过竞争性共享微小RNA（microRNA,miRNA）来调节mRNA（messenger RNA,信使RNA）的表达,这种调节机制在癌症的发病机理中扮演了重要的角色。但是,ceRNA在HCC中的功能作用及调节机制仍未被完全解释,新的ceRNA调控轴亟待探究。lncRNA CYTOR是一种已被证实在多种肿瘤中发挥促进细胞增殖、迁移等作用的非编码基因,并可作为多种miRNA的内源性海绵。然而,lncRNACYTOR作为ceRNA在HCC发生、发展中的作用及调控网络目前仍不十分清楚。因此,本研究以lncRNACYTOR为起点,探索ceRNA调节机制在HCC中的应用。材料与方法:通过检索癌症基因组图谱数据库（The Cancer Genome Atlas,TCGA）,获得人类HCC的lncRNA、mRNA和miRNA数据集表达数据和相应临床信息。下载基因表达综合数据库（Gene Expression Omnibus database,GEO）数据库中GSE62232和GSE84402的HCC相关RNA数据用于后续验证。借助在线数据分析工具,分析lncRNA CYTOR在多种肿瘤类型及HCC相关数据集中的表达情况。借助R语言分析lncRNA CYTOR在TCGA数据库中HCC肿瘤组织及癌旁正常肝组织中的差异表达情况,以及其表达水平与TCGA数据库HCC患者总生存期（overall survival,OS）之间的关系。分析lncRNA CYTOR与常用临床病理参数,如性别、年龄、肿瘤分级、临床分期和T、N、M分期之间的关联性,并进一步整合这些参数,通过单因素及多因素Cox回归分析探究lncRNA CYTOR独立预测患者预后的能力。之后,识别TCGA数据库HCC样品中差异表达的miRNA,同时使用ENCORI软件（starbase3.0）预测目标lncRNA的靶向的miRNA,选择差异分析中表达下调的miRNA与预测的miRNA做交集后得出候选miRNA。同理,基于TCGA数据库分析HCC样品中差异表达的mRNA,并基于ENCORI软件使用6个数据库（PITA、miRNAmap、DIANA-microT、miRanda、PicTar 和 TargetScan）预测候选 miRNA 靶向的mRNA,选择差异分析中表达上调的mRNA与预测的mRNA做交集后得出候选的mRNA。使用基因集富分析（Gene Set Enrichment Analysis,GSEA）来识别与所筛选出的mRNA高表达相关的基因集和通路途径,探索其潜在的功能。结果:lncRNACYTOR在多种癌症的肿瘤组织（如结肠癌、肾透明细胞癌、膀胱尿路上皮癌等）及多个HCC相关数据集中（如GSE54236、GSE64041、GSE36376等）相较于癌旁组织表达上调。在TCGA数据库中,与癌旁正常组织相比,HCC组织中的lncRNACYTOR表达水平显着增高（P<0.001）;且高表达患者组的OS较低表达患者组显着缩短（P<0.001）。临床病理参数关联性分析显示,lncRNACYTOR的表达水平与病理分级（Grade）显着相关,且G2与G1（P<0.01）、G3与G2（P<0.05）、G3与G1（P<0.001）和G4与G1（P<0.05）之间存在显着性差异;该基因在临床Ⅱ期（StageⅡ）的表达水平较临床Ⅰ期（StageⅠ）显着上调（P<0.001）,在T2期及T4期的表达水平较T1期显着上调（P<0.001;P<0.05）。独立预后分析表明lncRNA可独立于上述临床参数来预测HCC患者的预后（P<0.05）。ENCORI软件分析得出miR-125b-5p可作为lncRNA CYTOR的靶向miRNA,后续6个数据库综合分析得出KIAA1522及PODXL可作为miR-125b-5p的候选靶向mRNA。对二者进行差异分析、生存分析及与miR-125b-5p的相关分析后,选择KIAA1522作为目标靶向mRNA。相较于癌旁组织,KIAA1522在GSE62232和GSE84402的HCC组织中表达显着上调（P<0.001）。GSEA富集分析结果表明,cell cycle信号通路、adherens junction信号通路、Notch信号通路、mTOR信号通路、Wnt信号通路、MAPK信号通路、VEGF信号通路、apoptosis信号通路和tight junction信号通路相关的基因集在高KIAA1522表达的表型中显着富集。结论:探究lncRNA的表达情况、生物学功能,构建新的lncRNA/miRNA/mRNA调控轴是研究HCC发病机制的有效手段。lncRNA在HCC组织中表达水平显着上调,与多种临床病理参数相关,且可作为HCC患者潜在的预后生物标志物。此外,lncRNA CYTOR可通过靶向miR-125b-5p进而调节KIAA1522的表达参与HCC的发生发展。背景:肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是一种由多种病因引起肿瘤,目前仍是人类最常见、最致命的恶性肿瘤之一。因此,寻找新的、临床上有效的HCC诊断及预后生物标志物至关重要。本实验的主要目的是基于第一部分生物信息学分析的结果,探索长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）CYTOR、微小RNA（microRNA,miRNA）miR-125b-5p 以及蛋白编码信使 RNA（messenger RNA,mRNA）KIAA1522的靶向调控作用及该调控轴在HCC发生、发展中的作用。材料与方法:通过脂质体将目的基因相关载体转染至正常肝细胞（HHL-5）及几种HCC细胞（SK-Hep-1、Hep3b和Huh-7）后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测 HCC 细胞中 lncRNA CYTOR、miR-125b-5p和KIAA1522的表达,并筛选实验细胞。免疫组化检测KIAA1522在HCC组织及癌旁正常组织中的表达情况。采用双荧光素酶报告基因检测试验证实lncRNA CYTOR、miR-125b-5p和KIAA1522间的调控关系。之后,利用CCK-8细胞增殖毒性检测试剂盒（Cell Counting Kit-8,CCK-8）检测不同转染条件下HCC细胞的增殖情况,采用流式细胞仪分析转染后HCC细胞周期的变化,使用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal-deoxynucleotidy l transferase mediated nick end labeling,TUNEL）观察转染后 HCC 细胞的凋亡情况;并通过蛋白免疫印迹实验（western blot,WB）分析检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡等相关蛋白的表达。结果:转染后,相较于HHL-5细胞,Hep3b细胞中上述基因的表达均是最为显着的,故选择Hep3b细胞进行下一步实验。双荧光素酶报告基因检测实验的结果显示miR-125b-5p mimic+CYTOR-wt 共转染组和miR-125b-5p mimic+KIAA1522-wt 共转染组Hep3b细胞的荧光素酶活性显着降低;lncRNA CYTOR可直接作用于miR-125b-5p,而miR-125b-5p可直接靶向KIAA1522。CCK-8实验结合WB检测结果显示敲低lncRNACYTOR抑制了 HCC细胞的增殖,并下调了 Ki-67和PCNA的蛋白表达;抑制miR-125b-5p或KIAA1522的过度表达则促进了细胞的增殖并上调了 Ki-67和PCNA的蛋白表达。流式细胞仪分析结合WB检测结果显示敲低lncRNA CYTOR 降低了 S期及G2/M期比值,下调了 cyclin D1及cyclin E等蛋白的表达而上调了 p21表达;抑制miR-125b-5p或KIAA1522的过度表达则升高了 S期及G2/M期比值,并上调了 cyclin D1等蛋白的表达并下调了 p21表达。TUNEL细胞凋亡检测结合WB检测提示敲低lncRNA CYTOR可促进Hep3b细胞凋亡,下调Bcl-2的表达同时上调 Bax 的表达及 cleaved caspase3/caspase 3、cleaved caspase9/caspase 9;而抑制miR-125b-5p或KIAA1522的过表达则抑制Hep3b细胞凋亡,上调Bcl-2的表达并下调 Bax 的表达及 cleaved caspase 3/caspase 3、cleaved caspase 9/caspase 9。结论:综上所述,HCC中过表达的lncRNA CYTOR可通过靶向抑制miR-125b-5p进而上调KIAA1522的表达水平,促进HCC细胞增殖、影响细胞周期并抑制细胞凋亡。本研究为肝细胞癌的发生机制注入了新的见解。
二、可在早期检测癌症的新型装置（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、可在早期检测癌症的新型装置（论文提纲范文）
（1）石墨烯基电化学适配体传感器的构建及其对疾病标记物的检测（论文提纲范文）
| 缩略语 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 纳米材料 |
| 1.1.1 纳米材料简介 |
| 1.1.2 纳米材料的分类及应用 |
| 1.2 2D碳纳米材料--石墨烯 |
| 1.2.1 石墨烯结构性能概述 |
| 1.2.2 石墨烯的制备 |
| 1.2.3 石墨烯的功能化 |
| 1.2.4 石墨烯基复合纳米材料的应用 |
| 1.3 电化学传感器 |
| 1.3.1 电化学生物传感器 |
| 1.3.2 电化学适配体传感器的构建方法 |
| 1.4 疾病标记物的分析检测 |
| 1.4.1 肿瘤标记物的概述 |
| 1.4.2 肿瘤标记物的分类 |
| 1.4.3 肿瘤标记物的检测方法 |
| 1.4.4 疾病标记物的检测进展 |
| 1.5 立题背景 |
| 1.6 主要研究内容 |
| 1.7 创新点 |
| 第二章 基于TCPP功能化的石墨烯金纳米颗粒复合材料构建的电化学适配体传感器检测肌红蛋白 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 试剂与仪器 |
| 2.2.2 TCPP-Gr/AuNPs的制备 |
| 2.2.3 传感界面的构建 |
| 2.2.4 电化学检测Mb |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 传感器的工作机制 |
| 2.3.2 TCPP-Gr/AuNPs的表征 |
| 2.3.3 适配体传感界面的表征 |
| 2.3.4 实验条件的优化 |
| 2.3.5 适配体传感器对Mb的分析检测 |
| 2.3.6 Mb适配体传感器的重现性、稳定性和选择性研究 |
| 2.3.7 实际样品分析 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 基于血红素功能化石墨烯钯纳米复合材料的电化学适配体传感器检测前列腺特异性抗原 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 材料和仪器 |
| 3.2.2 H-Gr和H-Gr/Pd NPs的制备 |
| 3.2.3 PSA适配体传感器的构建 |
| 3.2.4 PSA电化学检测 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 PSA电化学适配体传感机理 |
| 3.3.2 H-Gr/Pd NPs的表征 |
| 3.3.3 PSA电化学适配体的逐步表征 |
| 3.3.4 实验条件的优化 |
| 3.3.5 PSAa-SA-DNA-Biotin/H-Gr/Pd NPs/GCE对 PSA的分析检测 |
| 3.3.6 PSAa-SA-DNA-Biotin/H-Gr/Pd NPs/GCE重现性、稳定性、特异性的研究 |
| 3.3.7 实际样品检测 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 基于血红素/石墨烯@PdPtNPs新型双信号免标记的电化学适体传感器对粘蛋白1 的灵敏检测 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 实验试剂与设备 |
| 4.2.2 H-Gr@PdPtNPs的制备 |
| 4.2.3 MUC1 传感器的构建 |
| 4.2.4 MUC1 电化学分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 MUC1 传感器设计策略 |
| 4.3.2 H-Gr@PdPtNPs的表征 |
| 4.3.3 H-Gr@PdPtNPs/GCE的电化学逐步表征 |
| 4.3.4 实验条件的优化 |
| 4.3.5 dsDNA/H-Gr@PdPtNPs/GCE对 MUC1 的双信号检测 |
| 4.3.6 dsDNA/H-Gr@PdPtNPs/GCE对 MUC1 检测的重现性、稳定性、选择性研究 |
| 4.3.7 dsDNA/H-Gr@PdPtNPs/GCE的实际样品分析 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 基于H-Gr/β-CD@Pd Pt NFs和 Exo I三重放大策略的比率型电化学传感器准确检测CA125 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验部分 |
| 5.2.1 试剂与仪器 |
| 5.2.2 石墨烯基材料的合成 |
| 5.2.3 传感器的构建 |
| 5.2.4 ExoI辅助循环对CA125 的电化学测定 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 CA125 比率型传感器的设计策略 |
| 5.3.2 H-Gr/SH-β-CD@PdPtNFs的表征 |
| 5.3.3 适配体传感器扩增策略的对比 |
| 5.3.4 实验参数的优化 |
| 5.3.5 比率型传感器对CA125 的分析测定 |
| 5.3.6 CA125 传感器的稳定性、重复性和选择性 |
| 5.3.7 CA125 传感器在加标血清样品中的实际应用 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 总结与展望 |
| 6.1 总结 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简况及联系方式 |
（2）肝癌演进关键节点光声多模跨尺度成像、边界界定、关键分子功能在体可视化及早诊早治的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一章 肝癌演进关键节点跨尺度光声多模成像研究 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 新型NIR-Ⅱ靶向纳米探针Pt@PDA-c的合成、表征及体外NIR-Ⅱ光声、光热性能的研究 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 新型纳米探针Pt@PDA-c细胞靶向性及毒性研究 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 肝癌NIR-Ⅱ光声多模跨尺度成像及关键分子功能在体可视化研究 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 不足与展望 |
| 附录 光声成像系统介绍 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（3）早期肿瘤行为片上建模研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 肿瘤现状 |
| 1.2 肿瘤发生与发展 |
| 1.3 肿瘤分类 |
| 1.4 传统肿瘤研究模型 |
| 1.4.1 二维培养模型 |
| 1.4.2 三维培养模型 |
| 1.4.3 动物模型 |
| 1.5 新兴肿瘤研究模型 |
| 1.5.1 原发肿瘤芯片 |
| 1.5.2 转移肿瘤芯片 |
| 1.5.3 肿瘤芯片的应用 |
| 1.6 本文选题意义和研究内容 |
| 1.6.1 本文选题意义 |
| 1.6.2 本文研究内容 |
| 第2章 血管芯片的构建 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料与实验仪器 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 芯片设计与制作 |
| 2.3.2 细胞与细胞外基质 |
| 2.3.3 血管生成实验 |
| 2.3.4 血管出芽实验 |
| 2.3.5 免疫荧光染色 |
| 2.3.6 细胞骨架染色 |
| 2.3.7 图像采集与分析 |
| 2.4 理论建模 |
| 2.5 结果与讨论 |
| 2.5.1 片上流速分布 |
| 2.5.2 片上微血管网络的形成 |
| 2.5.3 片上微血管网络的特征 |
| 2.5.4 细胞密度对血管生成的影响 |
| 2.5.5 流动对血管生成的影响 |
| 2.5.6 片上血管出芽 |
| 2.6 本章小结 |
| 第3章 基于血管芯片的原发肿瘤早期发展研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 芯片设计与制作 |
| 3.3.2 细胞及细胞培养 |
| 3.3.3 细胞外基质制备 |
| 3.3.4 肿瘤球制备 |
| 3.3.5 细胞和肿瘤球加载 |
| 3.3.6 免疫荧光染色 |
| 3.3.7 细胞骨架染色 |
| 3.3.8 ELISA实验 |
| 3.3.9 肿瘤生长分析 |
| 3.3.10 肿瘤周围血管表征 |
| 3.3.11 细胞因子加载实验 |
| 3.3.12 数据分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 片外HeLa细胞球的生长过程 |
| 3.4.2 片外HeLaF细胞球的生长过程 |
| 3.4.3 片上原发肿瘤的构建 |
| 3.4.4 血管生成对早期肿瘤行为的影响 |
| 3.4.5 成纤维细胞对早期肿瘤行为的影响 |
| 3.4.6 成纤维细胞因子对早期肿瘤行为的影响 |
| 3.4.7 肿瘤发展对肿瘤周围血管的影响 |
| 3.4.8 肿瘤细胞上皮间质转化 |
| 3.4.9 血管生成拟态 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 基于血管芯片的转移肿瘤早期研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料与仪器 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 芯片设计与制作 |
| 4.3.2 细胞与细胞外基质 |
| 4.3.3 片上细胞加载 |
| 4.3.4 乳腺癌细胞灌注 |
| 4.3.5 片上细胞活性分析 |
| 4.3.6 免疫荧光染色 |
| 4.3.7 细胞骨架染色 |
| 4.3.8 微血管灌注实验 |
| 4.3.9 ELISA实验 |
| 4.3.10 数据分析 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 片上细胞分布 |
| 4.4.2 片上微血管网络特征 |
| 4.4.3 乳腺癌细胞内渗 |
| 4.4.4 乳腺癌细胞外渗 |
| 4.4.5 乳腺癌细胞定植 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 总结与展望 |
| 5.1 总结 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 常用缩略词 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 |
（4）肽核酸功能化的纳米通道生物传感器高灵敏检测肿瘤外泌体MicroRNA（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章:肽核酸功能化纳米通道生物传感器构建及miRNA检测 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 仪器与材料 |
| 1.2.1 实验所用材料与试剂 |
| 1.2.2 实验所用仪器设备 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 PET锥形纳米通道的制备与孔径表征 |
| 1.3.2 肽核酸功能化纳米通道生物传感器的制备 |
| 1.3.3 Ag/Ag Cl电极的制备 |
| 1.3.4 离子电流的测量 |
| 1.3.5 传感器用于miRNA检测的条件优化 |
| 1.3.6 表征实验 |
| 1.3.7 传感器用于miRNA检测的特异性考察 |
| 1.3.8 传感器用于miRNA检测的灵敏度实验 |
| 1.4 结果与讨论 |
| 1.4.1 检测原理 |
| 1.4.2 PET锥形纳米通道的SEM表征 |
| 1.4.3 PNA功能化过程的电学及XPS表征 |
| 1.4.4 传感器用于miRNA检测的实验条件优化 |
| 1.4.5 通过激光共聚焦(LSCM)和XPS验证杂交成功 |
| 1.4.6 传感器用于miRNA检测的特异性考察 |
| 1.4.7 传感器用于miRNA检测的灵敏度实验 |
| 1.5 小结 |
| 第二章:基于肽核酸功能化的纳米通道生物传感器用于肿瘤外泌体miRNA的检测 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 仪器与材料 |
| 2.2.1 实验所用材料与试剂 |
| 2.2.2 实验所用仪器设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 细胞培养及外泌体的提取 |
| 2.3.2 外泌体表征 |
| 2.3.2.1 透射电子显微镜(TEM) |
| 2.3.2.2 纳米粒子跟踪分析(NTA) |
| 2.3.2.3 蛋白质印迹(WB) |
| 2.3.3 外泌体miRNA的提取及检测 |
| 2.3.4 荧光定量PCR与传感器结果的比较 |
| 2.3.5 传感器对临床样本进行检测 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 检测原理 |
| 2.4.2 外泌体的表征 |
| 2.4.3 外泌体miRNA的检测 |
| 2.4.4 荧光定量PCR与传感器结果的比较 |
| 2.4.5 传感器对临床样本进行检测 |
| 2.5 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录1 综述 仿生固态纳米孔在生物传感中的应用进展 |
| 参考文献 |
| 附录2 攻读硕士学位期间的科研论文及学术交流获奖情况 |
| 致谢 |
（5）新型循环肿瘤细胞识别界面的设计及应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩写列表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 循环肿瘤细胞的概述 |
| 1.1.1 循环肿瘤细胞的定义 |
| 1.1.2 循环肿瘤细胞的异质性 |
| 1.1.3 循环肿瘤细胞的检测意义 |
| 1.2 循环肿瘤细胞的分离与检测 |
| 1.2.1 循环肿瘤细胞的分离 |
| 1.2.2 循环肿瘤细胞富集后的研究分析 |
| 1.2.3 循环肿瘤细胞的定量检测 |
| 1.3 循环肿瘤细胞的释放与下游分析 |
| 1.3.1 循环肿瘤细胞的释放 |
| 1.3.2 循环肿瘤细胞的下游分析 |
| 1.4 论文的研究意义和主要内容 |
| 1.4.1 论文的研究意义 |
| 1.4.2 论文的主要内容 |
| 参考文献 |
| 第二章 近红外光开关的MoS_2纳米片@明胶生物平台用于循环肿瘤细胞的捕获、检测与无损释放研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 材料与试剂 |
| 2.2.2 设备与仪器 |
| 2.2.3 PEG-MoS_2 NFs的制备 |
| 2.2.4 生物平台的构建 |
| 2.2.5 细胞培养 |
| 2.2.6 癌细胞的捕获 |
| 2.2.7 细胞毒性实验 |
| 2.2.8 电化学检测 |
| 2.2.9 实际样品中癌细胞的检测和免疫染色 |
| 2.2.10 扫描电子显微镜(SEM)的表征 |
| 2.2.11 细胞活力和增殖能力分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 PEG-MoS_2@明胶的表征 |
| 2.3.2 PEG-MoS_2@gelatin的细胞毒性实验 |
| 2.3.3 生物平台的电化学表征 |
| 2.3.4 实验条件优化 |
| 2.3.5 癌细胞捕获 |
| 2.3.6 生物平台对CTCs的有效捕获 |
| 2.3.7 癌细胞的检测 |
| 2.3.8 生物平台对CTCs的特异性捕获 |
| 2.3.9 全血中CTCs的加标检测与免疫细胞染色识别 |
| 2.3.10 生物平台与免疫染色测定检测性能的比较 |
| 2.3.11 癌症病人血液样品中CTCs的捕获 |
| 2.3.12 释放细胞的活性与增殖能力分析 |
| 2.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 适配体功能化白细胞膜包覆UCNPs-Fe_3O_4@SiO_2纳米生物探针用于异质性循环肿瘤细胞高效分离与荧光检测 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 材料与试剂 |
| 3.2.2 设备与仪器 |
| 3.2.3 PEI-UCNPs的合成 |
| 3.2.4 Fe_3O_4@SiO_2的合成 |
| 3.2.5 PEI-UCNPs与Fe_3O_4@SiO_2的静电作用 |
| 3.2.6 细胞培养 |
| 3.2.7 白细胞膜包覆UCNPs-Fe_3O_4@SiO_2的制备 |
| 3.2.8 白细胞膜包覆UCNPs-Fe_3O_4@SiO_2复合材料的SDS-PAGE表征 |
| 3.2.9 SA-WM-UCNPs-Fe_3O_4@SiO_2与biotin-C-9S/SYL3C的组装 |
| 3.2.10 aptamer-SA-WM-UCNPs-Fe_3O_4@SiO_2的细胞毒性实验 |
| 3.2.11 实验条件优化 |
| 3.2.12 aptamer-SA-WM-UCNPs-Fe_3O_4@SiO_2对靶细胞的特异性捕获 |
| 3.2.13 aptamer-SA-WM-UCNPs-Fe_3O_4@SiO_2对靶细胞的分离捕获 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 上转换纳米材料的表征 |
| 3.3.2 上转换纳米材料的荧光性能 |
| 3.3.3 aptamer-SA-WM-UCNPs-Fe_3O_4@SiO_2的表征 |
| 3.3.4 UCNPs-Fe_3O_4@SiO_2和SA-WM-UCNPs-Fe_3O_4@SiO_2的荧光性能 |
| 3.3.5 aptamer-SA-WM-UCNPs-Fe_3O_4@SiO_2捕获靶细胞的可行性分析 |
| 3.3.6 aptamer-SA-WM-UCNPs-Fe_3O_4@SiO_2的细胞毒性实验 |
| 3.3.7 实验条件优化 |
| 3.3.8 aptamer-SA-WM-UCNPs-Fe_3O_4@SiO_2对靶细胞的特异性捕获 |
| 3.3.9 aptamer-SA-WM-UCNPs-Fe_3O_4@SiO_2纯度和灵敏度的考察 |
| 3.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 基于pH敏感染料的纳米生物平台对异质性循环肿瘤细胞的比色检测 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 材料与试剂 |
| 4.2.2 设备与仪器 |
| 4.2.3 多价适配体-Au NP纳米复合物的制备 |
| 4.2.4 PAA-MoS_2 NFs的合成 |
| 4.2.5 比色纳米探针的制备 |
| 4.2.6 细胞培养 |
| 4.2.7 CTCs的比色检测 |
| 4.2.8 样品分析 |
| 4.2.9 癌细胞的免疫染色 |
| 4.2.10 临床血液样品中CTCs的检测 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 纳米材料的表征 |
| 4.3.2 比色纳米探针的表征 |
| 4.3.3 比色纳米探针的性能 |
| 4.3.4 实验条件优化 |
| 4.3.5 多价适配体-AuNP纳米复合物对癌细胞的捕获 |
| 4.3.6 比色纳米探针对异质性CTCs的同时性检测 |
| 4.3.7 临床血液样品中CTCs的检测 |
| 4.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 基于双信号放大的超灵敏电化学适配体传感体系用于循环肿瘤细胞上皮-间质转化的研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验部分 |
| 5.2.1 材料与试剂 |
| 5.2.2 设备与仪器 |
| 5.2.3 传感电极的制备 |
| 5.2.4 双信号标记适配体的HCR组装 |
| 5.2.5 双信号标记适配体HCR组装体的PAGE表征 |
| 5.2.6 细胞培养 |
| 5.2.7 异质性CTCs的捕获 |
| 5.2.8 电化学检测 |
| 5.2.9 全血中加标CTCs的捕获与检测 |
| 5.2.10 不同EMT阶段的检测 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 适配体传感的表征 |
| 5.3.2 双信号标记适配体 HCR组装体 PAGE表征及检测性能 |
| 5.3.3 捕获异质性CTCs的可行性分析 |
| 5.3.4 实验条件优化 |
| 5.3.5 异质性CTCs在 PBS中的捕获 |
| 5.3.6 异质性CTCs在全血中的捕获 |
| 5.3.7 不同EMT阶段的检测 |
| 5.3.8 EMT传感系统的应用 |
| 5.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第六章 总结与展望 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 致谢 |
（6）新型光学生物传感策略的开发及其在肿瘤标志物检测中的应用研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 基于错配连接反应触发的级联链置换扩增反应构建的比色生物传感器用于PIK3CA基因点突变的检测 |
| 1 引言 |
| 2 实验部分 |
| 3 结果和讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 基于适配体修饰的磁珠和碳量子点/羟基氧化钴纳米片构建的新型三明治样荧光细胞传感器用于循环肿瘤细胞的检测 |
| 1 引言 |
| 2 实验部分 |
| 3 结果和讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 基于等温扩增和氢氧钴纳米片/量子点双重信号放大策略的新型生物传感器用于PML/RARa融合基因的检测 |
| 1 引言 |
| 2 实验部分 |
| 3 结果和讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 文献综述 用于医疗生物传感的纳米材料 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间成果 |
（7）Thomsen-Friedenreich单克隆抗体（A78-G/A7）在甲状腺乳头状癌中的作用靶点研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1. TF-Ag在肿瘤中的研究背景 |
| 2. 中和TF-Ag的TF-Ab免疫治疗在肿瘤中的研究进展 |
| 3. PTC致病相关分子机制的相关研究 |
| 4. 天然TF-Ab表达特征作为肿瘤患者无创筛查诊断指标的研究现状 |
| 材料与方法 |
| 1. 主要试剂与仪器耗材 |
| 2. 实验方法 |
| 结果 |
| 1. mAb A78-G/A7在甲状腺癌细胞株上的潜在作用探讨 |
| 2. mAb A78-G/A7对裸鼠PTC异种移植瘤的治疗作用研究 |
| 3. TF-Ag单克隆抗体(mAb A78-G/A7)治疗对PTC差异表达基因E2F4、DDB2、DDIT3的影响研究 |
| 4. TF-Ab中和TF-Ag及对PTC抑癌作用的证据探索 |
| 讨论 |
| 1. 中和TF-Ag的mAb A78-G/A7对PTC细胞株存在潜在抑癌作用 |
| 2. mAb A78-G/A7对裸鼠PTC异种移植瘤存在潜在治疗效应 |
| 3. mAb A78-G/A7干预对可能性较大的PTC差异表达基因的影响研究 |
| 4. TF-Ab在PTC无创诊断方面的潜在价值及其中和TF-Ag与发挥抑癌作用的证据探索 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 治疗性抗体在肿瘤免疫治疗中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（8）新型功能化磁性纳米体系用于肿瘤成像与联合治疗的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究工作的背景与意义 |
| 1.1.1 胜利的曙光 |
| 1.1.2 费曼的愿景 |
| 1.2 铁氧化物纳米粒子 |
| 1.2.1 铁氧化物纳米粒子的合成 |
| 1.2.2 铁氧化物纳米粒子的生物相容性 |
| 1.2.3 铁氧化物纳米粒子的靶向性 |
| 1.3 铁氧化物纳米粒子在肿瘤成像与癌症诊断方面的应用 |
| 1.3.1 铁氧化物纳米粒子在磁共振成像方面的应用 |
| 1.3.2 铁氧化物纳米粒子在荧光成像方面的应用 |
| 1.3.3 铁氧化物磁性纳米粒子在其他成像方面的应用 |
| 1.3.4 铁氧化物纳米粒子在生物分离及分子诊断方面的应用 |
| 1.4 铁氧化物纳米粒子在肿瘤治疗方面的应用 |
| 1.4.1 铁氧化物纳米粒子在肿瘤化疗中的应用 |
| 1.4.2 铁氧化物纳米粒子在肿瘤磁热治疗中的应用 |
| 1.4.3 铁氧化物纳米粒子在肿瘤基因治疗中的应用 |
| 1.4.4 铁氧化物纳米粒子在肿瘤多疗法联合治疗中的应用 |
| 1.5 基于铁氧化物纳米粒子的全套纳米诊疗平台 |
| 1.6 本论文的研究意义和内容 |
| 第二章 可编程线性升温反应系统用于磁性纳米粒子的制备 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验试剂 |
| 2.2.2 主要实验仪器 |
| 2.2.3 控温模块所需元件 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 可编程线性升温反应系统的设计 |
| 2.3.2 球形铁氧化物纳米粒子的制备 |
| 2.3.3 立方体铁氧化物纳米粒子的制备 |
| 2.3.4 八面体掺锌铁氧化物纳米粒子的制备 |
| 2.3.5 磁性纳米粒子的分离与纯化实验 |
| 2.3.6 磁性纳米粒子的相转移实验 |
| 2.4 实验结果与讨论 |
| 2.4.1 磁性纳米粒子形貌和粒径的表征 |
| 2.4.2 磁性纳米粒子的磁学性能和晶体结构分析 |
| 2.4.3 八面体掺锌铁氧化物纳米粒子的元素组成分析 |
| 2.4.4 磁性纳米粒子形貌、粒径及磁学性能的影响因素 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 立方体铁氧化物纳米信标用于HSP90α的检测与调控以及磁共振成像 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 细胞实验及动物实验材料 |
| 3.2.2 核酸序列 |
| 3.2.3 主要实验仪器 |
| 3.2.4 主要实验试剂 |
| 3.2.5 主要溶液的配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 HSP90α mRNA特异性分子信标HSP90α-MB的设计 |
| 3.3.2 HSP90α-MB在体外对目标核酸序列的检测 |
| 3.3.3 IPP纳米载体的制备 |
| 3.3.4 IPP纳米载体的磁共振成像造影实验 |
| 3.3.5 IPP/MB纳米信标的制备及基因保护实验 |
| 3.3.6 细胞培养 |
| 3.3.7 IPP/MB纳米信标的细胞毒性实验 |
| 3.3.8 正常细胞与肿瘤细胞对IPP/MB纳米信标的摄取实验 |
| 3.3.9 细胞中HSP90α mRNA水平的qRT-PCR检测 |
| 3.3.10 IPP/MB纳米信标对活细胞中HSP90α mRNA水平的检测实验 |
| 3.3.11 肿瘤细胞中HSP90α表达水平的检测 |
| 3.3.12 IPP/MB纳米信标在体内的T_2增强磁共振成像实验 |
| 3.3.13 IPP/MB纳米信标的急性全身毒性和血液相容性实验 |
| 3.3.14 统计分析 |
| 3.4 实验结果与讨论 |
| 3.4.1 HSP90α-MB对目标序列的结合特异性和灵敏度分析 |
| 3.4.2 IPP纳米载体形貌、粒径及理化性质的表征 |
| 3.4.3 IPP纳米载体磁共振成像弛豫效能的分析 |
| 3.4.4 IPP对 HSP90α-MB的吸附和保护作用 |
| 3.4.5 IPP/MB纳米信标的体外生物安全性分析 |
| 3.4.6 IPP/MB纳米信标对正常细胞与肿瘤细胞的区分作用 |
| 3.4.7 IPP/MB纳米信标对肿瘤细胞HSP90α的抑制作用 |
| 3.4.8 IPP/MB纳米信标对肿瘤的T_2增强磁共振成像研究 |
| 3.4.9 IPP/MB纳米信标在动物体内的生物安全性评估 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 八面体磁性纳米诊疗体系用于双模态成像及磁热-化疗联合增敏治疗 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 细胞实验及动物实验材料 |
| 4.2.2 核酸序列 |
| 4.2.3 主要实验仪器 |
| 4.2.4 主要实验试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 ZIPP纳米载体的制备 |
| 4.3.2 ZIPP纳米载体的磁共振成像造影实验 |
| 4.3.3 ZIPP纳米载体的磁热升温效率测量实验 |
| 4.3.4 ZIPP纳米载体修饰靶向核酸适配体 |
| 4.3.5 ZIPP-Apt与不同荧光分子(FAM/FITC/Cy5.5)的连接 |
| 4.3.6 ZIPP-Apt和ZIPP-CRO的细胞摄取实验 |
| 4.3.7 ZIPP(FITC)-Apt的亚细胞定位实验 |
| 4.3.8 ZIPP-Apt的细胞毒性实验 |
| 4.3.9 ZIPP-Apt:DOX的制备 |
| 4.3.10 ZIPP-Apt:DOX的DOX释放实验 |
| 4.3.11 ZIPP-Apt/siRNA的制备 |
| 4.3.12 ZIPP-Apt:DOX/siHSPs对细胞的磁热-化疗联合增敏治疗 |
| 4.3.13 ZIPP-Apt/siHSPs对HSP70和HSP90的沉默实验 |
| 4.3.14 ZIPP(Cy5.5)-Apt对肿瘤的靶向双模态成像实验 |
| 4.3.15 ZIPP-Apt:DOX/siHSPs对肿瘤的磁热-化疗联合增敏治疗 |
| 4.3.16 ZIPP-Apt纳米体系的全身毒性和血液相容性实验 |
| 4.3.17 统计分析 |
| 4.4 实验结果与讨论 |
| 4.4.1 ZIPP纳米载体粒径和表面电位的表征 |
| 4.4.2 ZIPP纳米载体磁共振成像弛豫效能的分析 |
| 4.4.3 ZIPP纳米载体磁热转化的比损耗功率分析 |
| 4.4.4 ZIPP的Apt修饰及光谱学表征结果 |
| 4.4.5 Apt修饰对肿瘤细胞摄取ZIPP的促进作用 |
| 4.4.6 ZIPP-Apt的体外生物安全性分析 |
| 4.4.7 ZIPP-Apt:DOX的包封率、载药率及响应性释放结果 |
| 4.4.8 ZIPP-Apt装载siRNA的质量比分析 |
| 4.4.9 ZIPP-Apt/siHSPs在体外的基因沉默效果 |
| 4.4.10 ZIPP-Apt:DOX/siHSPs对细胞磁热-化疗联合增敏治疗的分析 |
| 4.4.11 ZIPP-Apt对肿瘤的靶向双模态成像效果分析 |
| 4.4.12 ZIPP-Apt:DOX/siHsps对肿瘤磁热-化疗联合增敏治疗的疗效 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 全文总结及展望 |
| 5.1 全文总结 |
| 5.2 后续工作展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的成果 |
（9）循环肿瘤细胞与代谢组学的多元分析在早期非小细胞肺癌诊断中的应用价值（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 循环肿瘤细胞与传统肿瘤标志物、细胞因子联合检测对早期NSCLC诊断的意义 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 早期非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞基因突变的二代测序研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 代谢组学多元分析在早期NSCLC诊断中的应用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 循环肿瘤细胞检测技术在肺癌中的研究与应用进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）长链非编码RNA CYTOR通过调节miR-125b-5p/KIAA1522轴影响肝细胞癌增殖、凋亡和细胞周期的机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 第一部分: 应用生物信息学方法筛选新的肝细胞癌相关的lncRNA/miRNA/mRNA调控轴 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 引言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 第三章 结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分: lncRNA CYTOR/miR-125b-5p/KIAA1522调控轴在肝细胞癌细胞系中的作用 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 引言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 第三章 结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 非编码RNA在肝细胞癌发生与发展中的调节作用及临床应用(文献综述) |
| 第一章 引言 |
| 第二章 作为ceRNA的ncRNA及其它ncRNA在肝细胞癌发展中的可能作用及机制 |
| 第三章 ncRNA在HCC诊断及预后中的临床应用 |
| 第四章 结论、局限性和展望 |
| 参考文献 |
| 博士期间发表论文情况 |
| 致谢 |
四、可在早期检测癌症的新型装置（论文参考文献）
- [1]石墨烯基电化学适配体传感器的构建及其对疾病标记物的检测[D]. 张国娟. 山西大学, 2021(01)
- [2]肝癌演进关键节点光声多模跨尺度成像、边界界定、关键分子功能在体可视化及早诊早治的实验研究[D]. 齐硕. 南方医科大学, 2021(02)
- [3]早期肿瘤行为片上建模研究[D]. 李成盼. 中国科学技术大学, 2021(09)
- [4]肽核酸功能化的纳米通道生物传感器高灵敏检测肿瘤外泌体MicroRNA[D]. 肖萍萍. 湖北中医药大学, 2021(10)
- [5]新型循环肿瘤细胞识别界面的设计及应用研究[D]. 王秀丽. 华东师范大学, 2021(12)
- [6]新型光学生物传感策略的开发及其在肿瘤标志物检测中的应用研究[D]. 沈陈兰. 重庆医科大学, 2021(01)
- [7]Thomsen-Friedenreich单克隆抗体（A78-G/A7）在甲状腺乳头状癌中的作用靶点研究[D]. 彭颖. 昆明医科大学, 2021(02)
- [8]新型功能化磁性纳米体系用于肿瘤成像与联合治疗的研究[D]. 陈中原. 电子科技大学, 2021(01)
- [9]循环肿瘤细胞与代谢组学的多元分析在早期非小细胞肺癌诊断中的应用价值[D]. 万玲玲. 河北医科大学, 2021(02)
- [10]长链非编码RNA CYTOR通过调节miR-125b-5p/KIAA1522轴影响肝细胞癌增殖、凋亡和细胞周期的机制研究[D]. 胡博. 北京协和医学院, 2021(02)