一、河南IBV肾变型地方分离株的分型研究（论文文献综述）
余娟,徐敏,刘明成,欧长波,刘兴友[1]（2018）在《鸡传染性支气管炎病毒分型与诊断防治的研究进展》文中研究指明鸡传染性支气管炎是由鸡传染性支气管炎病毒引起的一种急性、高度接触性传染性疾病。以张口呼吸、气管啰音、咳嗽、肾脏病变为主要临床症状,可引起鸡的饲料报酬率降低,蛋鸡产蛋数量和蛋的品质下降。IBV的特点是高频变异,血清型众多,导致疾病的临床和病理变化复杂多样,由于其变异株出现比较快,毒株之间交叉保护力差,给IB的诊断和防治带来了较大困难。从IBV的分型、检测技术、综合防治方面对该病的研究进展进行了综述。
洪艳芬[2]（2018）在《传染性支气管炎弱毒活疫苗的初步培育与筛选》文中指出鸡传染性支气管炎（infectious bronchitis,IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus,IBV）引起的一类急性、高度接触性呼吸道疾病,由于鸡传染性支气管炎病毒容易发生变异,导致新的血清型和基因型毒株不断出现,目前使用的商品化活疫苗如H120、H52、Ma5等Mass型疫苗株对我国主要流行毒株的保护效果并不是很理想,因此通过调查当地IBV流行株的进化情况,培育筛选弱毒活疫苗,对预防和控制IB的发生和流行具有重要意义。本研究自20162017年期间从广东省各地区采集的疑似病料中分离到16株IBV分离株,生物学特性研究表明经传代培养后,16株病毒株均可以引起鸡胚发生矮小化,出现“侏儒胚”等现象;对所分离毒株的S1基因进行序列测定,结果表明16株分离株的S1基因发生了较多的基因突变及氨基酸的替代和插入现象,经与国内外毒株对比分析表明,16株分离株中有1株分离株与国内流行株2992/02和J2等分离株处于同一基因群,有5株分离株与目前国内主要流行的LX4型处于同一基因群,有10株分离株形成一个独立的基因群,该基因群是国内新报道的IBV基因型。从10株新基因型的分离毒株中挑选1株具有代表性的毒株GDTS13进行全基因组测序,并对S1、M和N基因等IBV的主要结构基因进行遗传进化分析,结果表明GDTS13与国内外流行的主要参考毒株全基因组同源性为84.5%99.6%,其中与LX4型参考毒株同源性为87.6%,GDTS13 S1、M和N基因序列与LX4型参考毒株的同源性分别为68.0%、87.0%和86.5%。采用固定病毒浓度、稀释血清的方法进行鸡胚中和试验,结果显示5株疫苗株4/91、H120、M41、Holte和Conn46的血清抗体均不能中和GDTS13,说明GDTS13与5个疫苗株很可能不属于同一血清型。将GDTS13在SPF鸡胚上传代致弱,并进行不同代次毒株对SPF鸡的致病性试验,结果表明F40代毒株能引起50%的SPF鸡发病并引起相应症状和病变,F60代毒株能引起20%的SPF鸡发病并引起相应症状和病变,F80和F100代次的毒株不引起SPF雏鸡发病,无相应症状和病变;对GDTS13 F1、F20、F40、F60、F80和F100这6个代次毒株的S1基因进行核苷酸测序并分析,结果表明核苷酸序列有4个位点突变,对应氨基酸的序列则有3个残基突变;F80和F100代次病毒的核苷酸和氨基酸序列的同源性为100%,表明病毒经鸡胚多次传代后具有了较好的遗传稳定性。将GDTS13 F100代的病毒接种2日龄的SPF雏鸡并且连续传5代,通过观察临床症状、病变及测定EID50研究病毒毒力是否返强,结果表明GDTS13 F100代次的病毒在SPF鸡传5个代次,每个代次的试验鸡只均没有出现相关的IBV临床症状和病变,EID50在10-5.63-10-5.73之间变化不大,说明GDTS13 F100代次病毒遗传稳定,没有毒力返强的现象。将致弱的GDTS13 F100代次病毒采用滴鼻、点眼的方式接种2日龄的SPF雏鸡,剂量为103.5 EID50/只,14天后分别用同源强毒和异源强毒进行攻毒,攻毒的剂量为105 EID50,试验结果显示GDTS13 F100弱毒对强毒有超过90%的保护率,表明GDTS13F100代次弱毒可以作为新基因型IB的活疫苗候选毒株。本研究通过调查广东地区IBV的流行情况,了解当前IBV主要流行毒株的基因型及变化趋势,通过鸡胚传代致弱方法成功培育出新基因型IB的弱毒活疫苗候选毒株。
周海生[3]（2017）在《2001～2016年间华东地区IBV分子流行病学、致病性及S1蛋白的天然免疫应答研究》文中研究表明传染性支气管炎（Infectious bronchitis,IB）是由传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）引起鸡的一种急性、高度接触性传染病,主要引起鸡群呼吸道与肾脏疾病,是影响养禽业重要的病毒性病原之一。虽然IBV疫苗广泛使用,但IB仍然频繁爆发,特别是以引起肾脏损伤的肾型IBV分离报道较多,给我国养禽业造成巨大的经济损失。由于IBV血清型众多,且各血清型间交叉保护作用较低,同时IBV很容易发生基因突变和同源重组,导致新基因型甚至新血清型不断出现,这给养禽业IB的防控带来巨大的困难。提示我们在防控IB中对病毒进行流行病学监测,并对新型病毒或变异株的流行病学特点进行分析,从而为制定IB有效的免疫防控策略提供重要的理论依据。目前IBV临床分型包括呼吸型、肾型、生殖道型和腺胃型等,其中肾型IBV是近年来我国主要的IB病变型。肾型IBV主要引起鸡肾脏肿大,尿酸盐沉积,进而引起鸡群死亡率增加。病毒S蛋白在IBV的血清学分型、基因分型、病毒组织嗜性及致病性中发挥了决定性的作用,而S蛋白中中和抗原位点、受体结合区域都是位于S1亚基上。因此,研究IBVS1蛋白与宿主之间相互作用,可以为病毒组织嗜性与致病性方面的机理提供一定参考。本研究主要内容包括以下4个部分。1、2001～2016年间华东地区IBV分子流行病学分析2010～2016年间,本研究共从华东地区疑似IB发病鸡群分离到IBV 36株,其中从肉鸡分离毒株35株,从蛋鸡分离毒株1株。在所有分离株中,我们发现1例IB与H9亚型AIV混合感染。对36株IBV S1基因序列进行测定,发现S1基因长度存在4种:1620/540（28 株）、1617/539（4 株）、1611/537（3 株）及 1638/546（1 株）。S 蛋白裂解位点存在 5种:HRRRR（25 株）、RRFRR（6 株）、RRSRR（3 株）、RRLRR（1 株）及 HRRKR（1株）。序列比对显示本研究分离的36株IBV之间的S1基因核苷酸序列同源性在65.2%～99.9%,分离株与参考株之间S1基因核苷酸序列同源性在65.0%～99.9%。S1基因分型结果表明,36株IBV可划分为七个基因型:QX型（26株）、Mass型（3株）、4/91型（3 株）、tl/CH/LDT3/03 型（1 株）、TW-Ⅰ型（1 株）、TC07-2 型（1 株）和新发现的 New-Ⅰ型（1株）。结合GenBank中2001～2016年中国分离的396株IBV毒株S1基因序列,S1基因分型结果显示,2001～2016年间我国流行的432株IBV可以分为13个基因型,包括QX（321 株）、tl/CH/LDT3/03（25 株）、TW-I（20 株）、4/91（18 株）、Mass（18 株）、CK/CH/LSC/99I（7 株）、TC07-2（4 株）、TW-II（2 株）、Ck/CH/LDL/97I（1 株）、Arkansas（1株）、Vis S（1株）、及新鉴定的基因分支New-Ⅰ（8株）与New-Ⅱ（3株）。值得注意的是,属于美国相关基因分支的ck/CH/LSD/110712已在我国出现。重组分析显示,新出现的New-Ⅰ基因型IBV S1基因来源于4/91与tl/CH/LDT3/03型毒株之间的重组,基因分支New-Ⅱ病毒S1基因来源于tl/CH/LDT3/03型与QX型毒株重组。研究结果表明我国华东地区2001～2016年间流行的IBV基因型众多,基因重组导致IBV新的基因型或变异株出现。本研究为今后IBV疫苗的研发和IB的防控提供一些参考。2、2001～2016年间我国IBV基因组序列重组分析为了解我国IBV分离株基因组重组特点,特别是疫苗株基因参与IBV基因重组情况,本研究对分离株 CK/CH/2010/JT-1、CK/CH/2014/FJ14 及 CK/CH/2014/QL1403 全基因组序列进行测定,同时收集2001～2016年间分离于我国的55株全基因组序列,并与参考株进行了序列重组分析。序列分析显示分离株CK/CH/2010/JT-1与CK/CH/2014/QL1403基因组中共鉴定出4个重组事件,分别位于CK/CH/2010/JT-1基因组24709-365、17160-19811、21136-21770片段及CK/CH/2014/QL1403基因组20395-24840片段。进一步对基因组序列重组来源分析显示 CK/CH/2010/JT-1 来源于 QX、CK/CH/LSC/99I、tl/CH/LDT3/03 及 4/91基因型IBV重组,CK/CH/2014/QL1403来源于QX与TC07-2型毒株重组,而CK/CH/2014/FJ14是一株典型的QX型IBV。应用RDP4对我国2001～2016年间分离的55株IBV基因组序列进行重组分析,结果显示我国2001～2016年间流行的55株IBV中有52株IBV基因组存在重组事件,其中25个IBV分离株基因组中发现有疫苗型（Mass,tl/CH/LDT3/03及4/91型等）病毒基因组片段的重组,这一结果在SimPlot分析中进一步得到确认。根据生物信息学分析结果,证明流行于我国的IBV基因组序列存在许多基因重组事件,而且疫苗毒株基因频繁参与了 IBV基因重组,导致IBV新的基因型或变异株出现,提示在防控IB时注意合理使用IBV疫苗。3、我国IBV分离株致病性分析及交叉保护研究为了探究分离株 CK/CH/2010/JT-1、CK/CH/2014/FJ14 及 CK/CH/2014/QL1403 致病特点及不同毒株间抗原关系,本研究对分离株进行动物攻毒、交叉中和及交叉保护实验。动物攻毒实验结果显示CK/CH/2010/JT-1与CK/CH/2014/FJ14可引起雏鸡严重的呼吸道症状、肾脏病变及高死亡率（43.75%与50%）,而CK/CH/2014/QL1403不引起雏鸡产生明显的临床症状与病理变化。中和实验结果表明现有抗H120与4/91疫苗株鸡多抗血清不能有效中和 IBV 分离株 CK/CH/2010/JT-1 与 CK/CH/2014/FJ14,而抗 QX 型毒株 CK/CH/2014/FJ14鸡多抗血清能够有效中和TC07-2型IBV CK/CH/2014/QL1403。交叉保护实验结果表明CK/CH/2014/QL1403免疫雏鸡后能为鸡群提供有效保护来抵抗QX型毒株CK/CH/2014/FJ14 攻击。本研究结果显示 CK/CH/2010/JT-1 与 CK/CH/2014/FJ14 属于 IBV强毒株,且目前常用H120与4/91疫苗株不能有效防控该毒株,而CK/CH/2014/QL1403是一株天然弱毒株,而且可以作为疫苗候选株来防控QX型IBV。4、IBV S1蛋白的天然免疫应答研究为了探究IBV S1蛋白引起鸡胚肾细胞（Chickenembryokidneycell,CEKC）天然免疫应答反应,特别是肾型与呼吸型毒株S1蛋白引起CEKC天然免疫应答差异,本研究成功构建了肾型毒株CK/CH/2010/JT1、CK/CH/2014/FJ14与呼吸型IBVM41株S1基因真核表达载体,通过转染CEKC研究其在细胞中的天然免疫应答。结果表明IBV S1基因在CEKC中成功获得了瞬时表达,而且S1蛋白主要表达于细胞浆中。在mRNA水平上,转染后12 h,IBV 肾型毒株 CK/CH/2010/JT1、CK/CH/2014/FJ14 S1 蛋白引起 TLR3、MDA5 的表达明显高于呼吸型M41;转染后24h,肾型毒株CK/CH/2010/JT1、CK/CH/2014/FJ14 S1蛋白引起TLR3、MDA5、IFN-β及IL-6的表达显着高于呼吸型M41。在蛋白水平上,S1蛋白在 CEKC 中瞬时表达后 24h,肾型毒株 CK/CH/2010/JT1、CK/CH/2014/FJ14 引起 TLR3、IFN-β及IL-6的表达显着高于经典株M41。重组质粒转染CEKC 24 h时,使用配体poly（I:C）和LPS刺激后,IBV不同致病性毒株S1蛋白引起肾细胞天然免疫没有产生进一步放大作用。本研究结果表明肾型与呼吸型毒株S1蛋白引起CEKC天然免疫应答中TLR3、MDA5、IFN-β及IL-6的表达存在差异,暗示IBV对肾脏致病性差异可能与毒株S1蛋白引起肾细胞天然免疫中TLR3、MDA5、IFN-β及IL-6表达差异相关。
尤永君,张国中,刘月焕,王腾,刘兴采,沈元,王友[4]（2015）在《2010—2013年中国鸡传染性支气管炎病毒分离株S1基因分子特性分析》文中进行了进一步梳理为掌握近年来我国传染性支气管炎病毒的流行动态和变化规律,利用检测转化至克隆载体鸡传染性支气管炎病毒（IBV）S1基因序列,应用MEGA5分析软件进行聚类分析,并对瑞普生物疫病诊断研究服务中心2010—2013年间从我国野外分离并测定的30株传支的S1基因序列与常用疫苗毒株和GenBank中代表性IBV毒株的对应基因序列进行比较,结果发现:1)30株野外分离株可分为2个基因型:LX4型和TW型,分别占总数的90%和10%;2)LX4型分离株S1基因和氨基酸序列与常见疫苗毒株序列差别很大,同源性仅分别为77.6%86.3%和75.8%85.7%;3)分析S基因裂解位点时发现同一基因型毒株的裂解位点氨基酸序列高度趋同,且型间差异性较大。可见,近年来我国主要IBV分离株属于LX4型,并且彼此间亲缘关系较近,与我国现用传支主要弱毒疫苗和国外参考株属于不同的基因型,这可能是导致疫苗免疫失败,传染性支气管炎在鸡群中爆发的主要原因。该研究结果为筛选针对我国目前流行IBV毒株的疫苗株提供参考。
尤永君[5]（2015）在《鸡传染性支气管炎病毒疫苗候选毒株的筛选及评价》文中研究指明鸡传染性支气管炎（Avian infectious bronchitis,IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（IBV）引起的一种急性、接触性传染病,雏鸡感染可造成高达30%死亡,还可造成生殖器官的损伤,母鸡到产蛋期没有产蛋高峰,产蛋鸡感染,造成产蛋率下降,蛋壳品质下降；给养殖业造成臣大的经济损失。疫苗免疫是预防IB最有效的方法之一。然而,因为IBV容易变异导致不断出现新的血清型,且不同血清型之间交叉保护能力较差,因此研究更适合的疫苗迫在眉睫。为了解我国当前IB的流行现状,掌握IB优势流行毒株的基因型和血清型,制备匹配当前优势血清型的疫苗,成为当前IB防治工作的重点。本研究从2010年-2013年全国18个省份临床发病的鸡群采集了4855份组织样品,通过病毒的分离、鉴定后,分析统计结果显示IBV感染普遍存在,4年间 IBV检出阳性率分别为8.1%、18.1%、15.5%、10.9%。对其中30株IBV分离株的Sl基因序列系统分析后发现我国当前优势流行毒株基因型为LX4型,占比90%（27/30）,27株之间同源性在93.5%-100%,与疫苗毒株H120株的同源性仅为77.6%-78.5%,且裂解位点氨基酸序列也存在明显差异；表明目前我国IB流行优势毒株和常用疫苗毒株基因型不同,且同源性较低。根据S1基因系统分析结果结合病料采集背景,筛选其中5株（JS101024株、SD100426株、JS121019株、BJ100306株和HuN100427株）与3株疫苗毒株（H120株、LDT3株、4/91株）制备单因子血清,通过气管环血清交叉中和试验鉴定血清型,计算相关性发现其中3株LX4基因型IBV分离株（JS101024株、SD100426株和HuN100427株）属于同一血清型（暂命名为JS101024血清型）,与目前常用疫苗毒株不属于同一血清型。致病性研究结果表明：5株1BV分离株以相同剂量回归28日龄的SPF鸡后,都出现相似的临床发病症状、病理剖检和组织病变：但是致死率不同,其中SD100426株（JS101024血清型/LX4基因型）毒力较强,致死率40%,可作为攻毒候选株;而同血清型的JS101024株（JS101024血清型/LX4基因型）毒力较弱,致死率为0,抗体产生时间较其它毒株早3-7天,其F6代种毒在鸡胚上的效价高达107.16EID50/0.1ml,繁殖性能最好,为最佳疫苗候选株。3株疫苗候选株（JS101024株、SD100426株和BJi00306株）与M41株制备成火活疫苗,免疫SPF鸡后,用SD100426株进行攻毒保护试验,结果表明：JS101024株制备的火活疫苗攻毒后100%临床保护,抗体上升速度快,抗体转阳时间比其它毒株早7日,且抗体滴度高；较其它毒株疫苗鸡只带毒、排毒时间短3～7天,该毒株制备的疫苗具有与当前IBV优势流行毒株匹配性好、保护率高、能显着降低IBV水平传播风险的优点,是优秀的疫苗候选株。本研究为筛选匹配IBV流行毒株的疫苗候选株提供了依据,为制定IBV综合防治措施奠定了丛础。
尤永君,张国中,刘月焕,梁武,王腾,刘兴彩,沈元,王友[6]（2015）在《2010—2013年我国鸡传染性支气管炎病毒分离株S1基因分子特性分析》文中进行了进一步梳理为掌握近年来我国传染性支气管炎病毒的流行动态和变化规律,利用检测转化至克隆载体鸡传染性支气管炎病毒（IBV）S1基因序列,应用MEGA5分析软件进行聚类分析,并对瑞普生物疫病诊断研究服务中心2010—2013年间从我国野外分离并测定的30株传染性支气管炎的S1基因序列与常用疫苗毒株和GenBank中代表性IBV毒株的对应基因序列进行比较,结果发现:1)30株野外分离株可分为2个基因型:LX4型和TW型,分别占总数的93.3%和6.7%;2)LX4型分离株S1基因和氨基酸序列与常见疫苗毒株序列差别很大,同源性仅分别为77.6%86.3%和75.8%85.7%;3)分析S基因裂解位点时发现同一基因型毒株的裂解位点氨基酸序列高度趋同,且型间差异性较大。可见,近年来我国主要IBV分离株属于LX4型,并且彼此间亲缘关系较近,与我国现用传染性支气管炎主要弱毒疫苗和国外参考株属于不同的基因型,这可能是导致疫苗免疫失败,传染性支气管炎（IB）在鸡群中爆发的主要原因。该研究结果为筛选针对我国目前流行IBV毒株的疫苗株提供参考。
陈玲凤[7]（2014）在《中国部分Massachusetts型鸡传染性支气管炎病毒的生物学特性》文中提出鸡传染性支气管炎是由鸡传染性支气管炎病毒引起的一种急性高度接触性病毒性疾病。中国大部分地区使用Mass血清型疫苗进行预防,但Mass型鸡传染性支气管炎病毒在发生呼吸道病鸡场的病鸡中仍有较高的分离率。本研究以32株Mass型IBV分离株为研究对象,首先测定其基因组序列,并对全基因组及其各个基因片段分别进行比较分析,构建遗传进化树,阐明中国IBV分离株与Mass型参考株之间的系统进化关系。然后,选择5株重组毒株进行体外中和试验,分析毒株的抗原性变化。最后,将5株重组毒株进行动物试验,观察毒株的致病性及H120疫苗对毒株的免疫保护效应。本研究对32株IBV分离株的基因组进行克隆、测序及拼接,比较32株IBV分离株与20株Mass型参考毒株的基因组序列,并进行遗传进化分析,结果显示其中25株分离株属于H120样型毒株,2株分离株属于Mass41样毒株,5株分离株属于重组毒株。比较分析基因组的各个基因片段,发现基因的点突变现象存在于所有IBV分离株基因组不同位置,而ck/CH/LHB/111172、 ck/CH/LDL/110931、ck/CH/LHB/130573、ck/CH/LHB/130598和ck/CH/LSD/111219这5株分离株均由H120疫苗株和另一种毒株重组形成。其中ck/CH/LDL/110931由H120疫苗株和Connecticut型病毒重组形成,其重组位点位于S1基因的3’端；ck/CH/LHB/130573由H120疫苗株和tl/CH/LDT3/03株重组形成,其重组位点也位于S1基因的3’端；ck/CH/LHB/130598由H120疫苗株和4/91毒株重组形成,其重组位点位于M基因与基因5之间的间隔序列；ck/CH/LSD/111219由H120疫苗株和DY07株重组形成,有两个重组位点,分别位于ORF1的nsp14和基因3的ORF3b; ck/CH/LHB/111172由H120疫苗株和TW2296/95株重组形成,有两个重组位点,分别位于E基因和基因5的ORF5a。选择重组毒株ck/CH/LHB/111172、ck/CH/LDL/110931、ck/CH/LHB/130598ck/CH/LHB/130573和Pck/CH/LSD/111219株进行体外中和试验。采用固定病毒量—稀释血清法（β法）进行交叉中和试验,以判定各毒株的血清型。结果表明,ck/CH/LHB/130598、ck/CH/LSD/111219及ck/CH/LHB/111172属于Mass血清型,而分离株ck/CH/LDL/110931与H120疫苗株及Connecticut型病毒的血清型均不相同,是一种新的血清型病毒；分离株ck/CH/LHB/130573与H120疫苗株及tl/CH/LDT3/03株的血清型均不相同,是一种新的血清型病毒。选择重组毒株ck/CH/LHB/111172、ck/CH/LDL/110931、ck/CH/LHB/130598ck/CH/LHB/130573和ck/CH/LSD/111219感染SPF鸡群及H120免疫鸡群,通过观察SPF鸡群的临床症状、发病率及死亡率,并定性检测口咽拭子病毒的存在,分析重组毒株的致病性及H120疫苗对重组毒株的免疫保护效果。结果表明,5株重组病毒只引起攻毒组鸡群轻微的临床症状,包括伸颈、甩鼻、羽毛蓬松或两翅下垂等症状,并不引起SPF鸡的死亡。因此,这5株重组毒致病力较弱。根据免疫鸡群的临床症状及口咽拭子病毒检测结果,H120疫苗株对分离株ck/CH/LHB/130598、ck/CH/LSD/111219及ck/CH/LHB/111172具有良好的免疫保护效应,对分离株ck/CH/LDL/110931和ck/CH/LHB/130573不能提供良好的免疫保护作用。
孙蓉[8]（2012）在《鸡传染性支气管炎病毒广西分离株血清型的鉴定及免疫原性的研究》文中研究说明鸡传染性支气管炎（infectious bronchitis, IB）是由传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus, IBV）引起的一种高度接触性、急性传染病。IBV血清型众多,不同血清型之间的交叉保护效果存在着差异,以致生产上往往因为使用的疫苗株与现地流行毒株血清型不一致而导致免疫失败,给世界各地养禽业带来极大的经济损失。因此,及时鉴定本地IBV流行毒株的血清型,筛选理想毒株作为研制适合本地使用的疫苗之候选种毒,并对其免疫原性和交叉免疫保护性进行研究将是一项重要且非常有意义的工作。首先,在本课题已完成对1985～2008年26个广西IBV分离株进行血清分型并将其分为7个血清型的基础上,从中选择代表6个不同血清型的单因子血清对2009～2011年间的20个广西IBV分离株进行鸡胚气管环中和试验并鉴定血清型。结果表明,20个新分离毒株归属6个血清型：分离株GX-YL0902、GX-NN1009、 GX-NN1013、 GX-YL1019、 GX-NN110034、GX-NN-4共6个毒株归为血清1型；分离株GX-NN1012、 GX-GL2、 GD-KP1033、 GX-NN-14共4个毒株归为血清2型；分离株GX-NN1014、 GX-NN1011、 GX-NN09093、 GX-NN110033、 GX-NN-11共5个毒株归为血清3型；分离株GX-GL1为血清4型；分离株GX-HC1006和GX-NN09032归为血清5型；分离株GX-YL1121与GX-NN-13归为血清6型。第二,在之前研究的基础之上,选择了致病力强、代表不同基因型和血清型的4个IBV广西分离株GX-YL5、 GX-YL9、 GX-NN7和GX-C与目前生产上广泛使用的商品疫苗株H120一起,按照国家IBV灭活联苗中免疫效力试验的规程进行免疫原性和交叉免疫保护性试验。所有试验鸡在14日龄时皮下接种各个毒株制备的单价灭活油乳剂疫苗（OEV）,在免疫后21d使用各个毒株经过滴鼻点眼的途径进行攻毒。以攻毒后各疫苗免疫组鸡只的临床发病率、死亡率、抗体水平的动态变化以及在呼吸系统（气管、肺脏）和泌尿系统（肾脏）的病毒重新分离结果,作为评价交叉免疫保护力的指标。结果显示,灭活油乳剂疫苗免疫组采用IBV强毒攻毒后引起鸡只出现轻微的临床症状,发病率为0-10%,死亡率为0-20%,各组间差异不显着（p>0.05）；非免疫攻毒对照组出现比较严重的临床症状,发病率为40%-70%,死亡率为20%-40%,与同一毒株免疫组相比存在极显着差异（p<0.01）或显着差异（p<0.05）；采用间接ELISA方法对5组试验鸡免疫前、免疫后7d、14d、21d的血清样品进行检测,结果显示疫苗免疫后7d即可产生抗体,除GX-NN7疫苗免疫组抗体水平表现出随时间变化略有下降外,其余免疫组抗体水平均具有随时间变化呈直线上升的趋势。至免疫后21d,免疫组鸡的血清样品80%呈抗体阳性。而非免疫对照组抗体水平始终为阴性；攻毒后5d采集的气管、肺脏和肾脏样品混合进行病毒重新分离的结果显示,免疫组样品病毒检出率为0-40%,保护率为60%-100%,各组间交叉保护力差异不显着（p>0.05）,极显着高于非免疫攻毒对照组（p<0.01）。H120灭活疫苗免疫组对4个分离株GX-C、 GX-NN7、GH-YL5、GX-YL9组织样品病毒的检出率分别为10%、20%、30%、30%,表明目前常用的商品疫苗株不能对当地流行毒株提供完全的保护；其余4种灭活油乳剂疫苗能对同源或者异源强毒株的攻击提供比较高的保护率（60%-100%）,其中GX-YL9的OEV对GX-YL9、 GX-C、 GX-NN7、 GX-YL5的保护率分别为100%、90%、70%、100%,免疫原性最好,可作为研制防制本地IBV的商品疫苗的候选种毒。本课题研究结果表明,广西IBV流行毒株血清型复杂,商品疫苗株H120不能对流行毒株产生完全保护作用,筛选免疫原性好的分离毒株作为研制IBV多价灭活疫苗的候选种毒是防控IBV的一种有效策略。
张小荣[9]（2012）在《2009-2011年国内传染性支气管炎病毒分子流行病学研究及以马立克病毒为载体的基因工程疫苗研制》文中指出禽传染性支气管炎病毒（avian infectious bronchitis virus,IBV）属于冠状病毒科冠状病毒属中的γ-冠状病毒,由该病毒感染引起的疾病称为禽传染性支气管炎（avian infectious bronchitis,IB）,是一种对鸡危害非常严重的急性、高度传染性的病毒性呼吸道疾病,可导致鸡的增重和饲料报酬降低,也能引起蛋鸡产蛋量和蛋的品质下降等,因此具有重要的经济意义,免疫预防是目前控制该病的最为有效的手段。IBV的重要特点之一就是血清型众多,不同血清型之间交叉保护性较低甚至完全不能保护,因此在生产中必须选用与流行毒株血清型一致的疫苗才能取得良好的免疫保护效果。不同血清型的IBV具有典型的地域性流行特征,而且由于病毒基因组的突变和毒株间的重组使得新的血清型不断出现,使免疫预防日益复杂化。本研究的目的旨在通过系统的流行病学监测了解近年来不同基因型IBV在我国的流行状况,通过生物信息学分析阐明不同IBV基因型间遗传演化的规律和发展趋势,并针对流行的优势基因型毒株研制新型疫苗。1、2009-2011年间国内IBV流行病学监测与流行株的遗传进化分析2009-2011年间,共从国内主要养鸡省份分离到IBV流行毒株54株,其中肉鸡源毒株52株,蛋鸡源毒株2株。在肉鸡源毒株中我们发现存在较高比例的IBV与H9亚型AIV的混合感染（25/52）,发生混合感染的鸡群往往发病更为严重,且混合感染样品对接种的鸡胚表现出更强的致病性,该结果提示这两种病毒之间可能存在一定程度的致病协同作用。对所有分离毒株S1基因进行克隆和基因测序,共发现4种不同的S1基因长度,分别为1611bp、1617bp、1620bp和1626bp,说明S1基因中碱基的插入和缺失是一种非常普遍的现象。将54个分离株S1基因序列和近年来在国内及周边国家和地区流行的13个基因型共57个参考毒株的S1基因序列用Mega4.1软件进行遗传进化分析,结果显示54个分离株可以分为QX型（42株）、HN-08型（5株）、LSC/991型（2株）、TW-I型（2株）、Mass型（1株）、793/B型（1株）和CHⅢ型（1株）等7个基因型。在所有分离株中,QX型分离株数量最多,占总数的77.8%（42/54）。从进化树中还可以看出,QX型分离株又可以进一步细分为两个不同的基因亚群-Cluster Ⅰ（21株）和Cluster Ⅱ（21株）,经典的QX型参考毒株QXIBV和LX4株均属于Cluster Ⅰ亚群,而Cluster Ⅱ亚群中的毒株均在2010年才开始出现。为了更加系统地描述同期内国内不同基因型IBV的分布情况,我们将已经在GenBank发表全长S1基因序列的所有同时期分离株共296株合并进行遗传进化分析,结果显示,350个同时期分离株可分为19个基因型,其中11个基因型均能根据现有文献报道找到同源的参考毒株,根据各基因型中包含的毒株数量多少依次为：QX型（219株）、HN-08型（26株）、LSC/99I型（22株）、LDT3/03型（12株）、TW-I型（12株）、CH Ⅲ型（11株）、Mass型（10株）、LDL/971型（3株）、CH VI型（3株）、TW-Ⅱ型（2株）和793/B型（1株）,此外还有8个基因型未能归入已被正式命名的已知基因型,因此暂定名为未定型Ⅰ～未定型Ⅷ。从分型结果可以看出,我国流行的IBV基因型具有典型的地域性分布特征,大多数在周边国家和地区广泛流行的基因型在我国并未发现。为阐明国内不同基因型毒株之间的遗传演化关系,根据遗传进化和基因分型的结果,从不同基因型中选择代表性毒株,用RDP3.31软件对S1基因进行重组分析。结果显示当前国内流行的毒株中存在广泛的重组现象,不同基因型间的重组事件不仅导致同一基因型内部发生分化,出现了不同基因亚群,而且经过多次的同源重组后可能会导致新的基因型毒株的出现。综合不同基因型间发生的系列重组事件,可以推断：QX型、LSC/991型、793/B型、LDL/971型、TW-Ⅰ型和TW-Ⅱ型是目前在我国流行的所有基因型毒株的原型毒株,除此以外的新出现的基因型均是在这6个基因型的基础上经过一次或多次的同源重组而产生的变异株。2、Mass型H120活疫苗对当前流行的主要基因型代表毒株的免疫保护效力试验根据遗传进化分析的结果,从当前主要流行的三个IBV基因型中挑选出4个代表毒株：AH/2009/1（QX型Cluster Ⅰ亚群）、JS/2010/12（QX型Cluster Ⅱ亚群）、JS/2009/5（LSC/99I型）和JS/2010/6（HN08型）,分别用Mass型IBV活疫苗（H120株）进行免疫保护效力试验,以评价现有疫苗对流行毒株的免疫保护状况。结果显示H120疫苗株对不同基因型的IBV毒株免疫保护效力存在较大差异,对同属于Mass基因型的M41强毒株能够提供完全保护，且能显着降低攻毒后气管和肾脏的排毒率；对于QX型毒株AH/2009/1和JS/2010/12,基本达到临床保护标准,但试验鸡气管和肾脏带毒的比例远远高于M41攻毒组,说明局部免疫保护效果不是非常理想；对于HN08型的JS/2010/6株和LSC/991型的JS/2009/5株保护效果均不理想,攻毒后鸡群表现出较为严重的临床症状和相当高的气管和肾脏排毒率。该结果提示我们,现有疫苗已经不能对当前流行的主要基因型毒株提供良好的免疫保护,急需研究开发与流行毒株基因型一致的新疫苗用于该病的防控。3、以马立克病毒为载体研制QX型IBV基因工程疫苗本研究以MDV CV1988/Rispens疫苗毒株为载体,以其IRS-US间隔区作为插入位点,选择网状内皮组织增生症病毒（REV）基因组长末端重复序列（LTR）作为启动子,构建含QX型IBV分离株CK/CH/JS/06Ⅱ S1基因及报告基因EGFP的转移载体pUP-LTR-EGFP-S1-DOWN。将MDV基因组DNA与转移载体共转染鸡胚成纤维细胞（CEF）,经同源重组获得重组病毒,通过多轮荧光筛选和纯化,最终获得的重组病毒命名为rMDV-EGFP-S1。进一步通过Cre重组酶介导的重组反应敲除EGFP报告基因,获得仅带有LTR启动子和S1基因的重组病毒,命名为rMDV-S1。通过PCR和间接免疫荧光试验（IFA）对重组病毒进行鉴定,结果表明S1基因完全按照预定方式正确插入到MDV基因组中并能够表达S1蛋白。将重组病毒在CEF上进行连续30代传代培养,经PCR和IFA试验鉴定,该重组病毒具有良好的遗传稳定性。重组病毒rMDV-S1。对QX型IBV强毒株CK/CH/JS/06Ⅱ的免疫攻毒保护效力试验结果显示,重组病毒按5×103PFU/羽的剂量免疫1日龄SPF鸡,免疫后4w攻毒,免疫组试验鸡发病率和死亡率分别为30%和5%,对照组则分别为100%和30%,经χ2检验差异显着（p<0.05）。排毒检测结果显示,免疫组气管排毒率在攻毒后部分时间点与对照组相比差异显着,攻毒后14d扑杀时肾脏排毒率差异极显着（p<0.01）。免疫组试验鸡攻毒后的增重未受明显影响,与对照组相比差异显着（p<0.05）。病理组织学检查结果显示与对照组相比免疫组试验鸡肾脏的病变程度相对较轻。所有结果均表明重组病毒对QX型强毒株的攻击能够提供良好的免疫保护。重组病毒对MDV强毒株RB1B的免疫攻毒保护试验结果显示,与亲本病毒CV1988/Rispens相比,对MDV本身的免疫保护效率未受明显影响,说明该重组病毒可以作为二联疫苗同时用于IB和MD两种疾病的免疫预防。
王新卫,王川庆,赵军,陈陆,杨霞,王泽霖,姚惠霞[10]（2012）在《鸡传染性支气管炎病毒Jin13株的分离与鉴定》文中指出为了对近年从郑州郊区鸡群中分离到的1株传染性支气管炎病毒（Jin13株）进行定型鉴定,作者采用气管环（TOC）中和试验、血凝抑制（HI）试验、单抗交叉ELISA、序列分析和免疫试验对其进行了研究。气管环（TOC）中和试验和血凝抑制（HI）试验表明Jin13病毒只与M41阳性血清反应,而与其它ND、EDS76、H9AI、IBD标准阳性血清不发生反应,序列分析证实该分离毒Jin13株是IBV。在交叉气管环（TOC）中和试验和交叉血凝抑制（HI）试验中Jin13株与肾变型Y株不交叉（R≤0.25）,而与马萨株血清型的M41株和H52株有明显交叉（0.25≤R≤0.8）;单抗交叉ELISA结果显示Jin13株与针对M41株的J1单抗有很好的反应（≥640～1 280）,而与针对肾变型Y株的单抗C2几乎不反应（≤40）,这进一步证实了Jin13与呼吸型M41株、H52株属同一血清型。与M41株相比较,Jin13株S1氨基酸序列在第126,386,390,461位出现了突变,又在S1基因第1 166位出现一个新Aiu I酶切位点,是M41株的一个变异株。对Jin13株纯化后原代毒进行免疫效力检测证实其免疫原性优于M41株和H52株。Jin13毒株是一株免疫原性良好的IBV地方流行毒株。
二、河南IBV肾变型地方分离株的分型研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、河南IBV肾变型地方分离株的分型研究（论文提纲范文）
（1）鸡传染性支气管炎病毒分型与诊断防治的研究进展（论文提纲范文）
| 1 鸡传染性支气管炎病毒的分型 |
| 1.1 临床分型 |
| 1.2 血清分型 |
| 1.3 分子生物学分型 |
| 2 鸡传染性支气管炎病毒的检测技术 |
| 2.1 血清学检测技术 |
| 2.2 分子生物学检测技术 |
| 3 鸡传染性支气管炎的综合防治 |
| 3.1 科学饲养与卫生防控 |
| 3.2 疫苗免疫 |
| 4 小结 |
（2）传染性支气管炎弱毒活疫苗的初步培育与筛选（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 1 前言 |
| 1.1 传染性支气管炎概述 |
| 1.2 传染性支气管炎病毒 |
| 1.2.1 IBV的形态学特点 |
| 1.2.2 IBV的结构蛋白 |
| 1.2.3 IBV的分子变异机理 |
| 1.2.4 IBV的生物学特性 |
| 1.3 传染性支气管炎的分型 |
| 1.3.1 临床分型 |
| 1.3.2 血清分型 |
| 1.3.3 基因分型 |
| 1.4 传染性支气管炎疫苗的研究进展 |
| 1.4.1 灭活疫苗 |
| 1.4.2 活疫苗 |
| 1.4.3 基因工程疫苗 |
| 1.5 本研究的目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 病料来源 |
| 2.1.2 SPF鸡与鸡胚 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 病毒的分离 |
| 2.2.3 病料的RT-PCR鉴定 |
| 2.2.4 分离株RT-PCR反应产物的连接与转化 |
| 2.2.5 分离株重组质粒的提取及S1基因序列测定 |
| 2.2.6 分离株S1基因序列分析 |
| 2.2.7 分离株生物学特性研究 |
| 2.2.8 GDTS13纯净性检验 |
| 2.2.9 分离株与疫苗株鸡胚半数感染量(EID50)的测定 |
| 2.2.10 GDTS13的血清中和试验 |
| 2.2.11 血清型与基因型分析 |
| 2.2.12 GDTS13全基因组序列测定与分析 |
| 2.2.13 GDTS13的传代致弱 |
| 2.2.14 SDTS13不同代次的EID50及S1基因序列测定 |
| 2.2.15 GDTS13不同代次的致病性检测 |
| 2.2.16 GDTS13F100的纯净性检测 |
| 2.2.17 GDTS13F100的毒力稳定性试验 |
| 2.2.18 GDTS13F100的免疫效力的初步评价 |
| 3 结果 |
| 3.1 分离株RT-PCR检测结果 |
| 3.1.1 分离株M基因的鉴定 |
| 3.1.2 分离株S1基因的鉴定 |
| 3.2 分离株S1基因序列分析结果 |
| 3.3 分离株生物学特性鉴定结果 |
| 3.3.1 红细胞凝集试验 |
| 3.3.2 致鸡胚病变特征 |
| 3.4 GDTS13的纯净性检测 |
| 3.5 分离株GDTS13和疫苗株EID50测定结果 |
| 3.6 血清中和试验 |
| 3.6.1 GDTS13和疫苗株的血清抗体检测结果 |
| 3.6.2 疫苗株对GDTS13分离株的血清中和试验结果 |
| 3.7 GDTS13的基因序列分析结果 |
| 3.7.1 GDTS13的全基因序列分析 |
| 3.7.2 GDTS13S1基因分析结果 |
| 3.7.3 GDTS13M基因分析结果 |
| 3.7.4 GDTS13N基因分析结果 |
| 3.8 GDTS13不同代次致病力鉴定结果 |
| 3.9 GDTS13 不同代次的 EID50及 S1 基因序列分析结果 |
| 3.9.1 GDTS136个不同代次的EID50测定结果 |
| 3.9.2 GDTS13不同代次S1基因序列分析 |
| 3.10 GDTS13F100的纯净性检测结果 |
| 3.11 GDTS13F100毒力稳定性评价结果 |
| 3.12 GDTS13F100免疫效力初步评价结果 |
| 3.12.1 攻毒试验 |
| 3.12.2 GDTSF100免疫保护效力评价 |
| 4 讨论 |
| 4.1 分离株的生物学特性 |
| 4.2 分离毒株的分子特点 |
| 4.3 GDTS13的分子特性 |
| 4.3.1 血清中和试验 |
| 4.3.2 GDTS13的全基因序列分析 |
| 4.3.3 GDTS13的S1基因序列分析 |
| 4.3.4 GDTS13的M基因序列分析 |
| 4.3.5 GDTS13的N基因序列分析 |
| 4.4 GDTS13不同代次的EID50结果和S1基因序列分析及致病力分析 |
| 4.5 GDTS13F100的毒力返强试验结果评价 |
| 4.6 GDTS13F100的弱毒疫苗免疫效力的初步评价 |
| 5 全文总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
（3）2001～2016年间华东地区IBV分子流行病学、致病性及S1蛋白的天然免疫应答研究（论文提纲范文）
| 摘要 ABSTRACT 中英对照缩略词 第一部分 文献综述 |
| 综述一 传染性支气管炎病毒研究进展 |
| 1 病原学 |
| 1.1 发现、命名与分类 |
| 1.2 生物学特性 |
| 1.3 基因组结构与主要功能蛋白 |
| 1.4 生活周期 |
| 1.5 致病机理 |
| 1.6 毒株分型 |
| 2 流行病学 |
| 2.1 自然宿主 |
| 2.2 实验室宿主 |
| 2.3 传播方式 |
| 3 临床症状及病理变化 |
| 3.1 呼吸道 |
| 3.2 肾脏 |
| 3.3 生殖道 |
| 3.4 消化道 |
| 3.5 其它 |
| 4 诊断 |
| 4.1 病原的分离鉴定 |
| 4.2 血清学诊断技术 |
| 4.3 分子生物学检测技术 |
| 5 防治 |
| 5.1 免疫预防 |
| 5.2 治疗 |
| 综述二 传染性支管炎病毒在世界范围内流行现状 |
| 1 亚洲国家IBV流行现状 |
| 2 欧洲国家IBV流行现状 |
| 3 非洲国家IBV流行现状 |
| 4 北美洲国家IBV流行现状 |
| 5 南美洲国家IBV流行现状 |
| 6 大洋洲国家IBV流行现状 |
| 综述三 禽冠状病毒纤突蛋白研究进展 |
| 1 禽冠状病毒S蛋白概述 |
| 1.1 结构特点 |
| 1.2 序列多样性 |
| 1.3 其它禽类冠状病毒S蛋白 |
| 2 禽冠状病毒S蛋白功能 |
| 2.1 组织吸附中的作用 |
| 2.2 细胞亲和性中的作用 |
| 2.3 体内组织嗜性与致病性中的作用 |
| 3 病毒吸附中宿主影响因素 |
| 3.1 唾液酸 |
| 3.2 蛋白受体 |
| 3.3 凝集素 |
| 3.4 硫酸肝素 |
| 3.5 宿主蛋白酶 |
| 4 禽冠状病毒S蛋白引起宿主天然免疫反应 |
| 参考文献 第二部分 研究内容 |
| 第一章 2001～2016年间华东地区传染性支气管炎病毒分子流行病学分析 |
| 1 材料 |
| 1.1 生物材料 |
| 1.2 试剂与载体 |
| 1.3 主要试剂溶液配制 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 引物设计 |
| 2.2 病毒增殖 |
| 2.3 病毒总RNA提取 |
| 2.4 S1基因扩增与序列测定 |
| 2.5 S1基因序列分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 病毒分离结果 |
| 3.2 分离株S1蛋白长度与裂解位点的多样性 |
| 3.3 分离株S1基因分型的多样性 |
| 3.4 新分支New-Ⅰ与New-Ⅱ基因型IBV S1基因的来源 |
| 4 讨论 |
| 第二章 2001～2016年间我国传染性支气管炎病毒基因组序列重组分析 |
| 1 材料 |
| 1.1 生物材料 |
| 1.2 试剂与载体 |
| 1.3 主要试剂溶液配制 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 分离株全序列扩增引物设计 |
| 2.2 分离株全基因组序列RT-PCR |
| 2.3 病毒基因组5'与3'端序列扩增 |
| 2.4 分离株基因组序列测定与分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 分离株基因组结构 |
| 3.2 分离株CK/CH/2010/JT-1基因组的重组来源 |
| 3.3 分离株CK/CH/2014/QL1403基因组的重组来源 |
| 3.4 我国2001～2016年间IBV基因组重组现象普遍 |
| 4 讨论 |
| 第三章 我国鸡传染性支气管炎病毒分离株致病性分析及交叉保护研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 生物材料 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 病毒扩增 |
| 2.2 SPF鸡致病性实验 |
| 2.3 病毒中和实验 |
| 2.4 交叉保护实验 |
| 2.5 鸡IBV血清抗体ELISA |
| 3 结果 |
| 3.1 IBV分离株致病性 |
| 3.2 交叉中和实验结果 |
| 3.3 天然弱毒CK/CH/2014/QL1403对QX型IBV交叉保护实验 |
| 4 讨论 |
| 第四章 传染性支气管炎病毒S1蛋白的天然免疫应答研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 生物材料 |
| 1.2 试剂与载体 |
| 1.3 主要试剂溶液配制 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 引物设计 |
| 2.2 真核表达载体的构建 |
| 2.3 CEKC的制备 |
| 2.4 CEKC的质粒转染 |
| 2.5 共聚焦显微镜荧光分析 |
| 2.6 Western-blot |
| 2.7 荧光定量PCR方法检测相关因子 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 S1基因RT-PCR扩增结果 |
| 3.2 重组质粒酶切鉴定 |
| 3.3 重组质粒转染CEKC后S1蛋白的表达 |
| 3.4 IBV S1蛋白引起CEKC天然免疫相关因子表达差异 |
| 3.5 配体刺激后IBV S1蛋白引起CEKC天然免疫相关因子表达差异 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 全文总结 致谢 攻读博士期间所获成果 |
（5）鸡传染性支气管炎病毒疫苗候选毒株的筛选及评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号与缩略语 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 国内外研究现状 |
| 1.2 研究内容和方法 |
| 1.3 研究目的和意义 |
| 第二章 2010-2013年我国部分地区鸡传染性支气管炎流行病学调查 |
| 引言 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 2010-2013年间30株鸡传染性支气管炎病毒分离株S1基因分子特性分析 |
| 引言 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 五株鸡传染性支气管炎分离株的血清学和致病性研究 |
| 引言 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 鸡传染性支气管炎疫苗候选株的纯化、生物学特性及免疫原性研究 |
| 引言 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
| 作者简介 |
（6）2010—2013年我国鸡传染性支气管炎病毒分离株S1基因分子特性分析（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 病毒及鸡胚 |
| 1.2 引物、载体及细菌 |
| 1.3 主要仪器及试剂 |
| 1.4 病毒繁殖 |
| 1.5 RNA提取及 RT-PCR扩增 |
| 1.6 克隆鉴定与测序 |
| 1.7 序列分析 |
| 2 结 果 |
| 2.1 S1基因的 RT-PCR扩增及克隆测序 |
| 2.2 分离株S1 基因系统发育进化关系分析 |
| 2.3 分离株S1 基因序列比对分析 |
| 2.4 分离株推导的S1蛋白序列分析 |
| 2.4.1 分离株裂解位点分析 |
| 2.4.2 分离株S1 基因缺失、插入及点突变分析 |
| 3 讨 论 |
（7）中国部分Massachusetts型鸡传染性支气管炎病毒的生物学特性（论文提纲范文）
| 中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表 摘要 Abstract 英文缩略表 第一章 引言 |
| 1.1 鸡传染性支气管炎概述 |
| 1.1.1 IB临床症状 |
| 1.1.2 IB流行情况 |
| 1.2 IBV的分子生物学特性 |
| 1.2.1 病原分类学 |
| 1.2.2 基因组结构 |
| 1.2.3 结构蛋白及其生物学功能 |
| 1.3 IBV的变异机制 |
| 1.3.1 基因突变 |
| 1.3.2 基因重组 |
| 1.3.3 环境压力 |
| 1.4 IBV的分型 |
| 1.4.1 IBV的免疫分型 |
| 1.4.2 IBV的血清分型 |
| 1.4.3 IBV的基因分型 |
| 1.4.4 IBV各种分型之间的关系 |
| 1.5 研究目的和意义 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 病毒 |
| 2.1.2 SPF鸡胚和雏鸡 |
| 2.1.3 受体菌与载体 |
| 2.1.4 主要试剂 |
| 2.1.5 主要仪器 |
| 2.1.6 引物 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 病毒总RNA的提取 |
| 2.2.2 反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) |
| 2.2.3 基因组5’末端扩增 |
| 2.2.4 基因组3’末端扩增 |
| 2.2.5 PCR产物纯化回收 |
| 2.2.6 PCR产物连接 |
| 2.2.7 感受态细胞TG1的制备 |
| 2.2.8 连接产物转化 |
| 2.2.9 重组质粒的提取 |
| 2.2.10 基因片段的序列测定 |
| 2.2.11 全基因组序列拼接与序列比较分析 |
| 2.2.12 中和试验 |
| 2.2.13 免疫保护试验 |
| 2.2.14 血清抗体检测 |
| 2.2.15 口咽拭子样品的处理及其病毒含量的检测 第三章 结果 |
| 3.1 病毒的全基因组扩增 |
| 3.2 全基因组序列的确定及系统进化分析 |
| 3.3 分段基因序列的确定及同源性分析 |
| 3.3.1 IBV分离株基因1序列的确定及同源性分析 |
| 3.3.2 IBV分离株S基因序列的确定及同源性分析 |
| 3.3.3 IBV分离株基因3序列的确定及同源性分析 |
| 3.3.4 IBV分离株M基因序列的确定及同源性分析 |
| 3.3.5 IBV分离株基因5序列的确定及同源性分析 |
| 3.3.6 IBV分离株N基因序列的确定及同源性分析 |
| 3.4 结构蛋白基因的系统进化分析 |
| 3.4.1 S基因的系统进化分析 |
| 3.4.2 M基因的系统进化分析 |
| 3.4.3 N基因的系统进化分析 |
| 3.4.4 E基因的系统进化分析 |
| 3.5 中和试验结果 |
| 3.6 动物试验结果 |
| 3.6.1 临床症状 |
| 3.6.2 发病率和死亡率 |
| 3.6.3 血清中IBV抗体检测结果 |
| 3.6.4 口咽拭子病毒检测结果 第四章 讨论 |
| 4.1 基因组的分析 |
| 4.1.1 H120样型毒株的基因组分析 |
| 4.1.2 Mass41样型毒株的基因组分析 |
| 4.1.3 重组毒株的基因组分析 |
| 4.2 重组病毒的血清型分析 |
| 4.3 重组病毒的致病性分析 |
| 4.4 H120疫苗株对5株重组毒株的保护性分析 |
| 4.5 基因型与血清型之间的关系 |
| 4.6 IBV的变异特点分析 第五章 结论 参考文献 致谢 作者简历 |
（8）鸡传染性支气管炎病毒广西分离株血清型的鉴定及免疫原性的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 鸡传染性支气管炎病毒的研究概况 |
| 1.1 IBV病原学分类及其基本结构 |
| 1.1.1 IBV病原学分类 |
| 1.1.2 病毒粒子基本结构 |
| 1.2 IBV血清分型和基因分型的研究概况 |
| 1.2.1 IBV血清分型研究进展 |
| 1.2.2 IBV基因分型研究进展 |
| 1.3 IBV的致病性和临床症状 |
| 1.4 IBV诊断技术和防控技术的研究 |
| 1.4.1 IBV的诊断技术 |
| 1.4.2 IBV的防控技术 |
| 1.5 IBV疫苗种类及其特点 |
| 1.5.1 灭活疫苗 |
| 1.5.2 弱毒疫苗 |
| 1.5.3 基因工程疫苗 |
| 1.6 开展本课题的目的和意义 |
| 第二章 2009-2011年IBV广西分离株血清型的鉴定 |
| 2.1 试验材料和方法 |
| 2.1.1 IBV分离株 |
| 2.1.2 试验鸡胚 |
| 2.1.3 单因子血清 |
| 2.1.4 鸡胚气管环半数感染量(TOC-ID_(50))的测定 |
| 2.1.5 各分离株中和试验 |
| 2.2 试验结果 |
| 2.2.1 各分离株鸡胚气管环半数感染量(TOC-ID_(50))测定结果 |
| 2.2.2 中和试验与血清分型结果 |
| 2.2.3 广西IBV分离株不同时期血清分型的比较分析 |
| 2.3 小结与讨论 |
| 第三章 IBV广西代表分离株免疫原性的研究 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 IBV广西分离株 |
| 3.1.2 IBV参考毒株 |
| 3.1.3 试验用鸡胚和试验鸡 |
| 3.1.4 主要试剂 |
| 3.1.5 其他仪器设备 |
| 3.1.6 引物设计 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 病毒的增殖与灭活 |
| 3.2.2 各毒株鸡胚半数感染量(EID_(50))的测定 |
| 3.2.3 灭活油乳剂疫苗(OEV)的制备 |
| 3.2.4 免疫原性试验 |
| 3.3 试验结果 |
| 3.3.1 各毒株EID_(50)测定结果 |
| 3.3.2 临床发病症状和病理变化 |
| 3.3.3 免疫鸡血清中抗体水平检测结果 |
| 3.3.4 病毒分离和鉴定结果 |
| 3.4 小结与讨论 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况及参与的科研项目 |
（9）2009-2011年国内传染性支气管炎病毒分子流行病学研究及以马立克病毒为载体的基因工程疫苗研制（论文提纲范文）
| 中文摘要 英文摘要 目录 符号说明 文献综述 |
| 禽传染性支气管炎研究进展 参考文献 第一章 |
| 2009～2011年间国内部分地区IBV分子流行病学研究 1. |
| 材料与方法 2. |
| 结果 3. |
| 讨论 参考文献 第二章 |
| Mass型H120活疫苗对不同基因型IBV流行毒株的免疫保护效力试验 1. |
| 材料与方法 2. |
| 结果 3. |
| 讨论 参考文献 第三章 |
| 表达QX型IBV |
| S1蛋白的重组马立克病毒构建与免疫效力试验 1. |
| 材料与方法 2. |
| 结果 3. |
| 讨论 参考文献 致谢 攻读博士学位期间发表的学术论文目录 |
（10）鸡传染性支气管炎病毒Jin13株的分离与鉴定（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 病毒分离 |
| 1.3 病毒的血清学鉴定 |
| 1.3.1 Jin13株气管环中和试验 |
| 1.3.2 气管环交叉中和试验 |
| 1.3.3 Jin13株的血凝 (HA) 与血凝抑制 (HI) 试验 |
| 1.3.4 Jin13、M41、H52、Y株的交叉HI试验 |
| 1.3.5 单抗介导的交叉ELISA试验 |
| 1.4 Jin13株毒S1全基因测序和序列分析 |
| 1.5 Jin13株、M41株、H52株免疫原性比较试验 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 病毒的分离 |
| 2.2 病毒的血清学鉴定 |
| 2.2.1 Jin13株的气管环 (TOC) 中和试验 |
| 2.2.2 气管环 (TOC) 交叉中和试验 |
| 2.2.3 Jin 13、M41、H52和Y株的交叉HI试验 |
| 2.2.4 单抗介导的交叉ELISA试验 |
| 2.3 Jin 13株毒S1全基因测序和序列分析 |
| 2.4 IBV Jin13毒株的免疫原性测定结果 |
| 3 讨论 |
四、河南IBV肾变型地方分离株的分型研究（论文参考文献）
- [1]鸡传染性支气管炎病毒分型与诊断防治的研究进展[J]. 余娟,徐敏,刘明成,欧长波,刘兴友. 畜牧与饲料科学, 2018(07)
- [2]传染性支气管炎弱毒活疫苗的初步培育与筛选[D]. 洪艳芬. 华南农业大学, 2018(08)
- [3]2001～2016年间华东地区IBV分子流行病学、致病性及S1蛋白的天然免疫应答研究[D]. 周海生. 扬州大学, 2017(05)
- [4]2010—2013年中国鸡传染性支气管炎病毒分离株S1基因分子特性分析[A]. 尤永君,张国中,刘月焕,王腾,刘兴采,沈元,王友. 第四届全国禽病分子生物技术青年工作者会议论文集, 2015
- [5]鸡传染性支气管炎病毒疫苗候选毒株的筛选及评价[D]. 尤永君. 中国农业大学, 2015(03)
- [6]2010—2013年我国鸡传染性支气管炎病毒分离株S1基因分子特性分析[J]. 尤永君,张国中,刘月焕,梁武,王腾,刘兴彩,沈元,王友. 中国农业大学学报, 2015(02)
- [7]中国部分Massachusetts型鸡传染性支气管炎病毒的生物学特性[D]. 陈玲凤. 中国农业科学院, 2014(12)
- [8]鸡传染性支气管炎病毒广西分离株血清型的鉴定及免疫原性的研究[D]. 孙蓉. 广西大学, 2012(03)
- [9]2009-2011年国内传染性支气管炎病毒分子流行病学研究及以马立克病毒为载体的基因工程疫苗研制[D]. 张小荣. 扬州大学, 2012(07)
- [10]鸡传染性支气管炎病毒Jin13株的分离与鉴定[J]. 王新卫,王川庆,赵军,陈陆,杨霞,王泽霖,姚惠霞. 安徽农业大学学报, 2012(01)
标签：鸡传染性支气管炎论文; 基因型论文; 重组蛋白论文; 疫苗事件论文; 问题疫苗论文;